JoVE Logo
АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

В качестве примера мы представляем эффективную и стабильную трансформационную систему для функционального анализа гена CcCIPK14, обеспечивающую техническую основу для изучения метаболизма немодельных растений.

Аннотация

Эффективная и стабильная система трансформации имеет основополагающее значение для изучения функций генов и молекулярной селекции растений. В данной статье мы описываем использование системы трансформации, опосредованной Agrobacterium rhizogenes , на голубином горохе. Стебель заражен A. rhizogenes , несущим бинарный вектор, который индуцировал каллус через 7 дней и придаточные корни через 14 дней. Сгенерированный трансгенный волосатый корень был идентифицирован с помощью морфологического анализа и репортерного гена GFP. Чтобы дополнительно проиллюстрировать область применения этой системы, CcCIPK14 (Calcineurin B-like protein-interintering protein kinases) был преобразован в голубиный горох с использованием этого метода трансформации. Трансгенные растения обрабатывали жасмоновой кислотой (JA) и абсцизионной кислотой (ABA) соответственно с целью проверки того, реагирует ли CcCIPK14 на эти гормоны. Результаты показали, что (1) экзогенные гормоны могут значительно повышать уровеньэкспрессии CcCIPK14, особенно в растениях с сверхэкспрессией (OE) CcCIPK14 ; (2) содержание генистеина в линиях CcCIPK14-OE было значительно выше, чем в контроле; (3) уровень экспрессии двух нижележащих ключевых генов флавоноидсинтазы, CcHIDH1 и CcHIDH2, был повышен в линиях CcCIPK14-OE; и (4) трансгенная система волосистого корня может быть использована для изучения метаболически функциональных генов у немодельных растений.

Введение

Трансформация является основным инструментом оценки экспрессии экзогенных генов 1,2. Многие биологические аспекты ресурсных растений являются общими для всех растений; таким образом, функциональные исследования определенных генов могут быть проведены на модельных растениях (таких как Arabidopsis)3. Тем не менее, многие гены у растений уникальны по своим функциям и паттернам экспрессии, что требует исследований на их собственных или близкородственных видах, особенно для ресурсных растений 3,4. Растительные клетки могут воспринимать различные сигналы, которые позволяют растениям проявлять специфические изменения в экспрессии генов, метаболизме и физиологии в ответ на различные условия стресса окружающей среды 5,6,7. Флавоноиды играют ключевую роль в сигнальном процессе растений, которые реагируют на стрессы окружающей среды 5,8,9. Кроме того, содержание флавоноидов в садовых и лекарственных растениях также является важным показателем для оценки качества10. Идентификация генов, участвующих в регуляции синтеза флавоноидов в ответ на внешние сигналы, имеет решающее значение для понимания механизма синтеза флавоноидов в растениях. Несколько исследований показали, что применение экзогенных гормонов может способствовать накоплению флавоноидов 6,11. Стабильная система трансформации и метод валидации функций генов необходимы для демонстрации функции генов и понимания вторичного метаболизма в растениях.

Агробактериально-опосредованная трансформация широко используется при вставке ДНК 5,8,9. Агробактерия tumefacient может переносить кольцевые гены в хромосомы растительных клеток, а экзогенные фитогормоны индуцируют одну или несколько клеток-хозяев, которые могут регенерировать растения для получения стабильных трансформантов 12,13,14. Методы трансформации, опосредованные тумефациантом, более применимы к видам растений, пригодным для манипуляций in vitro, в то время как большинство многолетних древесных растений ограничивают применение этого метода из-за их трудности регенерации 4,15. A. rhizogenes также способен модифицировать геном клеток-хозяев16. В настоящем исследовании мы разработали эффективную и стабильную процедуру трансформации, опосредованную A. rhizogenes. A. rhizogenes содержит вторую бинарную плазмиду, несущую неестественный ген Т-ДНК в дополнение к плазмиде R. Растение-хозяин заражено, и можно получить сложное растение с трансгенными волосистыми корнями, выходящими из побега дикого типа 16,17. Системы трансформации, опосредованные A. rhizogenes, подходят для применения в исследованиях древесных растений благодаря их быстрой, низкой стоимости и отсутствию необходимости в регенерации растений. Более 160 видов растений успешно индуцируют волосистые корни, и большинство из них относятся к семействам Solanaceae, Compositae, Cruciferae, Convolvulaceae, Umbelliferae, Leguminosae, Caryophyllaceae и Polygonaceae18,19. По сравнению с A. tumefaciens, A. rhizogenes показал более высокую эффективность в опосредованном преобразовании голубиного гороха17,20.

В данном исследовании голубиный горох был использован в качестве примера для представления процесса трансформации, опосредованного A. rhizogenes. От прививки до укоренения эксперименты длились 5 недель. Мы идентифицировали трансформацию придаточного корня через морфологию и репортерный ген GFP, и эффективность трансформации составила до 75%. Кроме того, мы обрабатывали композитную установку JA и ABA, а также обнаруживали транскрипты и вторичные метаболиты с помощью количественной реальной ПЦР и ВЭЖХ (высокоэффективной жидкостной хроматографии). Подтверждено, что уровень экспрессии CcCIPK14 реагирует не только на JA и ABA, но и влияет на биосинтез флавоноидов. Эта система достаточна для изучения функции генов, связанных с вторичным метаболизмом. Также предложен новый подход к изучению немодельных растений при отсутствии достаточной устойчивой системы трансформации 17,21,22.

протокол

ПРИМЕЧАНИЕ: Голубиный горох является диплоидной бобовой культурой, которая принадлежит к семейству Fabaceae. Семена голубиного гороха, использованные в этом эксперименте, получены из Северо-восточного университета лесного хозяйства Китая и имеют код 87119. Основные шаги этого протокола проиллюстрированы на рисунке 1A. Инкубацию рассады проводили в условиях высокой влажности воздуха при температуре 25 °С при люминесцентных лампах со скоростью 50 моль/м-2 с-1 в течение 16-часового фотопериода. Штаммы A. rhizogenes K599 (NCPPB2659) были сохранены в лабораторных условиях. Их хранили в среде дрожжевого маннита (YEP) с 15% глицерина при температуре -80 °C. Протокол, описанный в данной работе, был основан на протоколе Meng et al.21.

ВНИМАНИЕ: Поместите все генетически модифицированные бактерии и растения в соответствующий контейнер для отходов. Используйте все опасные химические вещества в вытяжном шкафу и утилизируйте их в контейнере для опасных отходов.

1. Подготовка рассады голубиного гороха

  1. Выбирайте пухлые и неповрежденные семена голубиного гороха (рис. 1А), которые хранились менее 1 года.
  2. Замочите семена в дистиллированной воде на 24 ч (рис. 1В). Переложите набухшие семена в лоток для семян и поместите их в теплицу.
  3. Семена начинают прорастать через 1-2 дня. Когда эпикотиль достигнет 1,5 см, пересадите рассаду в горшки размером 10 см (диаметр) х 9 см (высота) с землей и песком в соотношении объема 3:1.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Почва состоит из смеси питательной почвы, вермикулита и перлита в соотношении 2:1:1.
  4. Выращивайте рассаду в теплице.

2. Активация A. rhizogenes

Примечание: Штаммом, используемым для преобразования A. rhizogenes , был K599, сохраненный при -80 °C. Бинарный вектор pROK2 (pBIN438; http://www.biovector.net/product/428388.html) содержит зеленый флуоресцентный белок (GFP) в качестве индикаторного гена и ген устойчивости к канамицину в качестве селективного маркера для трансформации A. rhizogenes.

  1. Разморозьте A. rhizogenes на льду.
  2. Опустите бактерии и равномерно выложите их на дрожжевую среду маннита (YEP) с добавлением 8 г/л порошка агара, 25 мг/л рифампицина и 25 мг/л канамицина (YRK, pH 7,0).
  3. Выдерживать при температуре 28 °C в течение 16 часов.
  4. Выберите моноклональные колонии. Культивируют их в пробирке объемом 50 мл, содержащей 10 мл среды YEB с добавлением 25 мг/л рифампицина и 25 мг/л канамицина (YRK, pH 7,0). Поместите центрифужную пробирку на встряхивающий инкубатор с радиусом вращения 10 см, при температуре 28 °C и 200 об/мин на 16 часов.

3. Трансформация растений с помощью A. rhizogenes

ПРИМЕЧАНИЕ: Выберите здоровые растения для заражения A. rhizogenes с помощью следующей процедуры инъекции. Результатом этой процедуры является преображение волосатых корней. Для анализа функции гена CcCIPK14 необходим контроль. Растворы A. rhizogenes с пустым вектором или плазмидами CcCIPK14-pROK2 вводили в рассаду для индуцирования волосистых корней.

  1. Инокулировать A. rhizogenes
    1. Выбирайте рассаду голубиного гороха с одинаковым статусом роста.
    2. Слейте воздух из шприца объемом 1 мл и аспирируйте 0,3 мл бактериальной жидкости. Медленно нажимаем на толкатель, чтобы наполнить иглу шприца бактериальной жидкостью21.
    3. Сначала зафиксируйте стебель рассады голубиного гороха пинцетом, а затем воткните иглу шприца в стебель на 1 см.
    4. При извлечении шприца полностью погрузите кончик иглы в стебель. Медленно нажмите на толкатель, чтобы откачать бактериальную жидкость из проникающей раны.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Присоединение остаточной бактериальной жидкости к ране в виде бактериальных капель может улучшить инфекцию и эффективность трансформации.
  2. Управление рассадой
    ПРИМЕЧАНИЕ: Высокая температура и влажность могут повысить эффективность инфекции A. rhizogenes.
    1. Поместите рассаду, инокулированную A. rhizogenes, в поддон (30 см x 60 см x 6 см) с 1 л воды. Используйте прозрачную пластиковую крышку (30 см х 60 см х 30 см) в качестве крышки для поддержания температуры и влажности внутренней среды.
    2. Периодически удаляйте опавшие листья и хлопьевидные гифы, прикрепленные к кончикам листьев и опавшим листьям.
    3. Через неделю в ране начинает появляться мозоль. После этого держите пластиковую крышку полуоткрытой.
    4. Через 4-5 недель большая часть каллусной ткани дифференцировалась в придаточные корни. Снимите пластиковую крышку.
    5. Добавляйте 1 л воды в поддон каждые 3 дня, чтобы почва оставалась влажной.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Голубиный горох является засухоустойчивым растением; Слишком много воды может затормозить рост растений.

4. Выявление трансформированных волосистых корней

ПРИМЕЧАНИЕ: Трансформированные волосистые корни могут быть идентифицированы на основе морфологии и генного уровня. Эта процедура в первую очередь направлена на анализ идентификации репортерного гена (GFP).

  1. Соберите кончики корней волосистого корня и отметьте оставшуюся часть.
  2. Оцените, есть ли зеленая флуоресценция под конфокальным лазерным сканирующим микроскопом.
  3. 0,1 г волосистых корней с сильным сигналом флуоресценции измельчить в мелкий порошок в жидком азоте.
  4. В соответствии с инструкциями производителя набора геномной ДНК растений получить геномную ДНК независимых трансгенных линий голубиного гороха методом модифицированного цетилтриметиламмония бромида (CTAB)23.
  5. Используйте 500 нг матрицы геномной ДНК и праймеры для ПЦР. Капсюли приведены в таблице 1.
  6. Выполняют следующий цикл амплификации: предварительную денатурацию при 94 °C в течение 5 мин, денатурацию при 94 °C в течение 30 с, отжиг грунтов при 55 °C в течение 30 с и удлинение праймера при 72 °C в течение 30 с. После 36 циклов и заключительного продления в течение 10 минут при температуре 72 °C проанализируйте усиленные продукты на 1% агарозном геле.
  7. Окрашивайте гели с помощью окрашивания нуклеиновыми кислотами и визуализируйте их под воздействием ультрафиолета.

5. Лечение экзогенными гормонами

Примечание: Растения с положительным результатом были обработаны экзогенными гормонами для изучения влияния CcCIPK14 на метаболические вещества. Составные растения, индуцированные A. rhizogenes , были разделены на три группы: группа обработки JA, группа обработки ABA и контрольная группа (рис. 3A).

  1. Уменьшите полив за 3 дня до лечения экзогенными гормонами.
  2. Приготовьте растворы JA и ABA в концентрации 5 мг/л.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Порошок JA и ABA сначала растворяют в этиловом спирте, а затем заполняют дистиллированной водой до целевого объема.
  3. С помощью пульверизатора равномерно распылите растворы JA и ABA на листья растений. Обработайте контрольную группу водой.
    ПРИМЕЧАНИЕ: На каждый саженец распыляли в среднем 10 мл раствора.
  4. Накрыть пластиковой крышкой сразу после обработки распылением. Поставьте его обратно в теплицу с искусственным климатом.

6. Сбор и сохранение образцов

Примечание: После 3 ч обработки экзогенными гормонами был собран растительный материал из различных групп лечения.

  1. Удалите рыжевато-коричневые и загрязненные волосатые корни и выберите те, которые имеют белый вид. Соберите эти волосатые корни и обсушите их впитывающей бумагой.
  2. Собранные с каждого саженца волосистые корни разделите на две части. Положите одну часть в пронумерованную пробирку и оберните ее маркированной фольгой.
  3. Лиофилизируйте фольгу в жидком азоте, а затем храните всю собранную фольгу при температуре -80 °C для дальнейшего исследования.

Результаты

A. rhizogenes -опосредованное преобразование волосистого корня на голубином горохе
В этом исследовании описаны пошаговые протоколы генетической трансформации волосистых корней при посредничестве A. rhizogenes, которая имеет значение в о?...

Обсуждение

Быстрая характеристика функции генов является общей целью при изучении большинства видов, и она особенно важна для развития ресурсных растений. Трансформация, опосредованная A. rhizogenes, широко используется в культуре волосистых корней. Культура волосистых корней...

Раскрытие информации

Авторы заявляют, что у них нет известных конкурирующих финансовых интересов или личных отношений, которые могли бы повлиять на работу, описанную в этой статье.

Благодарности

Авторы выражают признательность за финансовую поддержку Национальному фонду естественных наук Китая (31800509, 31922058), Фонду выдающихся молодых талантов Пекинского университета лесного хозяйства» (2019JQ03009), Фондам фундаментальных исследований для центральных университетов (2021ZY16), Пекинскому муниципальному фонду естественных наук (6212023) и Национальной ключевой программе исследований и разработок Китая (2018YFD1000602,2019YFD1000605-1) и Пекинскому передовому инновационному центру селекции деревьев методом молекулярного дизайна. Я хотел бы поблагодарить Чжэнъяна Хоу за его руководство при написании статьи и профессора Мэн Дуна за его руководство по идее статьи.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
0.1 mL qPCR 8-strip tube (with optical caps)KIRGEN, Shanghai, ChinaKJ2541
ABASolarbio Life Science, Beijing, ChinaA8060
Agar powderSolarbio Life Science, Beijing, ChinaA8190
CentrifugeOsterode am Harz, Germanyd37520
CFX Connect TW Optics ModuleBio-rad, US1855200
constant temperature incubatorShanghai Boxun Industry & Commerce Co., Ltd, Shanghai,ChinaBPX-82
Diposable Petri dishCorning, US
Dry BathGingko Bioscience Company/Coyote bioscience, ChinaH2H3-100C
Eastep Total RNA Extraction Kit50Promega, Beijing, ChinaLS1030
Electronic balanceTianjin, ChinaTD50020
Filter papeHangzhou wohua Filter Paper Co., Ltd, China
FiveEasy PlusMettler Toledo, Shanghai, China30254105
Flowerpot 9*9China
JASolarbio Life Science, Beijing, ChinaJ8070
KanSolarbio Life Science, Beijing, ChinaK8020
MagicSYBR MixtureCWBIO, Beijing, ChinaCW3008M
Mini MicrocentrifugeScilogex, Beijing, ChinaS1010E
NaClSolarbio Life Science, Beijing, ChinaS8210
NanPhotometer N50 TouchIMPLEN GMBH, GermanyT51082
Purelab untra
RifampicinSolarbio Life Science, Beijing, ChinaR8010
Seedling box 30*200China
Thermal Cycler PCRBio-rad, UST100
Thermostatic oscillatorBeijing donglian Har lnstrument Manufacture Co.,Ltd,ChinaDLHE-Q200
Tomy AutoclaveTomy, JapanSX-500
TryptoneSolarbio Life Science, Beijing, ChinaLP0042
UEIris II RT-PCR System for First-Strand cDNA Synthesis( with dsDNase)US Everbright INC, Jiangsu, ChinaR2028
Yeast Extract powderSolarbio Life Science, Beijing, ChinaLP0021

Ссылки

  1. Poland, J. A., Rife, T. W. Genotyping-by-sequencing for plant breeding and genetics. The Plant Genome. 5 (3), (2012).
  2. Barabaschi, D., et al. Next generation breeding. Plant Science. 242, 3-13 (2016).
  3. Petri, C., Webb, K., Hily, J. -. M., Dardick, C., Scorza, R. High transformation efficiency in plum (Prunus domestica L.): a new tool for functional genomics studies in Prunus spp. Molecular Breeding. 22 (4), 581-591 (2008).
  4. Tang, H., Ren, Z., Reustle, G., Krczal, G. Plant regeneration from leaves of sweet and sour cherry cultivars. Scientia Horticulturae. 93 (3-4), 235-244 (2002).
  5. Yang, L., et al. Response of plant secondary metabolites to environmental factors. Molecules. 23 (4), 762 (2018).
  6. Ross, J. J., Weston, D. E., Davidson, S. E., Reid, J. B. Plant hormone interactions: how complex are they. Physiologia Plantarum. 141 (4), 299-309 (2011).
  7. Meng, D., et al. The pigeon pea CcCIPK14-CcCBL1 pair positively modulates drought tolerance by enhancing flavonoid biosynthesis. The Plant Journal. , (2021).
  8. Wen, W., Alseekh, S., Fernie, A. R. Conservation and diversification of flavonoid metabolism in the plant kingdom. Current Opinion in Plant Biology. 55, 100-108 (2020).
  9. Shah, A., Smith, D. L. Flavonoids in agriculture: Chemistry and roles in, biotic and abiotic stress responses, and microbial associations. Agronomy. 10 (8), 1209 (2020).
  10. Zhang, W., Jiang, W. UV treatment improved the quality of postharvest fruits and vegetables by inducing resistance. Trends in Food Science & Technology. 92, 71-80 (2019).
  11. Koyama, R., et al. Exogenous abscisic acid promotes anthocyanin biosynthesis and increased expression of flavonoid synthesis genes in Vitis vinifera× Vitis labrusca table grapes in a subtropical region. Frontiers in Plant Science. 9, 323 (2018).
  12. Guo, M., Ye, J., Gao, D., Xu, N., Yang, J. Agrobacterium-mediated horizontal gene transfer: Mechanism, biotechnological application, potential risk and forestalling strategy. Biotechnology Advances. 37 (1), 259-270 (2019).
  13. Veena, V., Taylor, C. G. Agrobacterium rhizogenes: recent developments and promising applications. In Vitro Cellular & Developmental Biology-Plant. 43 (5), 383-403 (2007).
  14. Lacroix, B., Citovsky, V. Pathways of DNA transfer to plants from Agrobacterium tumefaciens and related bacterial species. Annual Review of Phytopathology. 57, 231-251 (2019).
  15. Guan, Y., Li, S. -. G., Fan, X. -. F., Su, Z. -. H. Application of somatic embryogenesis in woody plants. Frontiers in Plant Science. 7, 938 (2016).
  16. Alpizar, E., et al. Efficient production of Agrobacterium rhizogenes-transformed roots and composite plants for studying gene expression in coffee roots. Plant Cell Reports. 25 (9), 959-967 (2006).
  17. Hwang, H. -. H., Yu, M., Lai, E. -. M. Agrobacterium-mediated plant transformation: biology and applications. The Arabidopsis Book. 15, (2017).
  18. Srivastava, S., Srivastava, A. K. Hairy root culture for mass-production of high-value secondary metabolites. Critical Reviews in Biotechnology. 27 (1), 29-43 (2007).
  19. Porter, J. R., Flores, H. Host range and implications of plant infection by Agrobacterium rhizogenes. Critical Reviews in Plant Sciences. 10 (4), 387-421 (1991).
  20. Fan, Y. -. l., et al. One-step generation of composite soybean plants with transgenic roots by Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation. BMC Plant Biology. 20, 1-11 (2020).
  21. Meng, D., et al. Development of an efficient root transgenic system for pigeon pea and its application to other important economically plants. Plant Biotechnology Journal. 17 (9), 1804-1813 (2019).
  22. Ma, R., et al. Agrobacterium-Mediated genetic transformation of the medicinal plant Veratrum dahuricum. Plants. 9 (2), 191 (2020).
  23. Mi, Y., et al. Inducing hairy roots by Agrobacterium rhizogenes-mediated transformation in tartary buckwheat (Fagopyrum tataricum). Journal of Visualized Experoments: JoVE. (157), (2020).
  24. Cordovez, V., et al. Plant phenotypic and transcriptional changes induced by volatiles from the fungal root pathogen Rhizoctonia solani. Frontiers in Plant Science. 8, 1262 (2017).
  25. Trovato, M., Mattioli, R., Costantino, P. From A. rhizogenes RolD to plant P5CS: exploiting proline to control plant development. Plants. 7 (4), 108 (2018).
  26. Van Altvorst, A. C., et al. Effects of the introduction of Agrobacterium rhizogenes rol genes on tomato plant and flower development. Plant Science. 83 (1), 77-85 (1992).
  27. Bahramnejad, B., Naji, M., Bose, R., Jha, S. A critical review on use of Agrobacterium rhizogenes and their associated binary vectors for plant transformation. Biotechnology Advances. 37 (7), 107405 (2019).
  28. Gutierrez-Valdes, N., et al. Hairy root cultures-a versatile tool with multiple applications. Frontiers in Plant Science. 11, (2020).
  29. Che, P., et al. Developing a flexible, high-efficiency Agrobacterium-mediated sorghum transformation system with broad application. Plant Biotechnology Journal. 16 (7), 1388-1395 (2018).
  30. Keshavareddy, G., Kumar, A., Ramu, V. S. Methods of plant transformation-a review. International Journal of Current Microbiology and Applied Sciences. 7 (7), 2656-2668 (2018).
  31. Lacroix, B., Citovsky, V. Beyond Agrobacterium-mediated transformation: horizontal gene transfer from bacteria to eukaryotes. Agrobacterium Biology. , 443-462 (2018).
  32. Sarkar, S., Ghosh, I., Roychowdhury, D., Jha, S. . Biotechnological approaches for medicinal and aromatic plants. , 27-51 (2018).
  33. Singh, R. S., et al. . Biotechnological Approaches for Medicinal and Aromatic Plants. , 235-250 (2018).
  34. Bahramnejad, B., Naji, M., Bose, R., Jha, S. A critical review on use of Agrobacterium rhizogenes and their associated binary vectors for plant transformation. Biotechnology Advances. 37 (7), 107405 (2019).
  35. Meng, D., et al. Development of an efficient root transgenic system for pigeon pea and its application to other important economically plants. Plant Biotechnology Journal. 17 (9), 1804-1813 (2019).
  36. Surekha, C., et al. Agrobacterium-mediated genetic transformation of pigeon pea (Cajanus cajan (L.) Millsp.) using embryonal segments and development of transgenic plants for resistance against Spodoptera. Plant Science. 169 (6), 1074-1080 (2005).
  37. Saxena, K. Genetic improvement of pigeon pea-a review. Tropical Plant Biology. 1 (2), 159-178 (2008).
  38. Hada, A., et al. Improved Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation of soybean [Glycine max (L.) Merr.] following optimization of culture conditions and mechanical techniques. In Vitro Cellular & Developmental Biology-Plant. 54 (6), 672-688 (2018).
  39. Foti, C., Pavli, O. High-efficiency Agrobacterium rhizogenes-mediated transgenic hairy root induction of lens culinaris. Agronomy. 10 (8), 1170 (2020).
  40. Bhattacharya, A., Sood, P., Citovsky, V. The roles of plant phenolics in defence and communication during Agrobacterium and Rhizobium infection. Molecular Plant Pathology. 11 (5), 705-719 (2010).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

CcCIPK14Agrobacterium RhizogenesCcHIDH1CcHIDH2

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены