В городе Ово Внутрисосудистая инъекция куриным эмбрионам

Резюме

Общей целью данной работы является описание того, как выполнить внутриклеточную инъекцию экзогенных материалов в куриные эмбрионы. Такой подход очень полезен для изучения биологии развития куриных эмбрионов.

Аннотация

В качестве классической модельной системы биологии эмбрионов куриный эмбрион был использован для исследования эмбрионального развития и дифференцировки. Доставка экзогенных материалов в куриные эмбрионы имеет большое преимущество для изучения функции генов, трансгенного разведения и подготовки химер во время эмбрионального развития. Здесь мы показываем метод внутрисосудистой инъекции in ovo, при котором экзогенные материалы, такие как плазмидные векторы или модифицированные первичные половые клетки (PGC), могут быть перенесены в донорские куриные эмбрионы на ранних стадиях развития. Результаты показывают, что внутрисосудистая инъекция через дорсальную аорту и головку позволяет введенным материалам диффундировать во весь эмбрион через кровеносную систему. В представленном протоколе эффективность введения экзогенных плазмидных и лентивирусных векторов, а также колонизация вводимых экзогенных ПГК в гонаду-реципиента определялись путем наблюдения флуоресценции у эмбрионов. В данной статье подробно описаны процедуры этого метода, тем самым обеспечивая отличный подход к изучению функции генов, биологии эмбриона и развития, а также производства гонадно-химерной курицы. В заключение данная статья позволит исследователям с большим успехом и воспроизводимостью выполнить внутрисосудистую инъекцию экзогенных материалов в куриные эмбрионы.

Введение

Куриные эмбрионы широко использовались на протяжении веков в развитии, иммунологическом, патологическом и других биологических применениях ^1,2,3. Они имеют много неотъемлемых преимуществ перед другими животными моделями в изучении токсикологии и клеточной биологии⁴. Куриные эмбрионы легко доступны и могут манипулироваться in vitro и непосредственно наблюдаться на любой стадии развития, что обеспечивает удобную систему моделирования эмбрионов.

В целом, современные методы доставки куриного эмбриона, такие как электрот....

протокол

Все процедуры, связанные с уходом и использованием животных, соответствовали руководящим принципам Национального института здравоохранения США (NIH Pub. No. 85-23, пересмотренный в 1996 году), а протоколы куриных эмбрионов были одобрены Комитетом по управлению лабораторными животными и экспериментальной этике животных Университета Янчжоу, Китай (No 201803124).

1. Сбор и подготовка оплодотворенных яйцеклеток

Примечание: В отличие от млекопитающих, курица имеет миллионы фолликулов в одном яичнике, но только некоторые из этих фолликулов достаточно зрелые, чтобы овулировать. Каждый фолликул содержит од....

Результаты

Здесь мы покажем внутрисосудистую инъекцию в ово куриных эмбрионов. Схематический процесс внутрисосудистой инъекции показан на рисунке 1; В нашем исследовании мы использовали различные экзогенные растворы для тестирования и проверки инъекций.

Что?.......

Обсуждение

Метод внутрисосудистой инъекции куриных эмбрионов оптимизирован для переноса в эмбрион экзогенных материалов (векторных, вирусных или ПГК). На основе этого метода мы построили модели куриного эмбриона со стабильной гиперэкспрессией или интерференцией генов (SpinZ, JUN, UBE2I и т.д.)

Материалы

Name	Company	Catalog Number	Comments
Fluorescence macro-microscope	OLYMPUS	MVX10
Glass Capillaries	Narishige	G1
Lipofectamine 2000	Invitrogen	12566014	liposome
pEGFP-N1 vector	Clontech	#6085-1
PKH26 Red Fluorescent Cell Linker Kit	Sigma	PKH26GL
pLVX-EGFP lentivirus vector	Addgene	128652
Pneumatic Microinjector	Narishige	IM-11-2
Puller	Narishige	PC-100
Trypan Blue Stain	Gibco	15250061