АВТОРЫ
СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

Войдите в систему

Для просмотра этого контента требуется подписка на Jove Войдите в систему или начните бесплатную пробную версию.

В этой статье

  • Резюме
  • Аннотация
  • Введение
  • протокол
  • Результаты
  • Обсуждение
  • Раскрытие информации
  • Благодарности
  • Материалы
  • Ссылки
  • Перепечатки и разрешения

Резюме

В приведенной ниже статье представлен протокол измерения всхожести семян, роста рассады и физиологических показателей двух сортов перца с различиями толерантности к солености в ответ на шесть смешанных концентраций соли. Этот протокол может быть использован для оценки толерантности к соли сортов перца.

Аннотация

Для определения солеустойчивости и физиологического механизма перца (Capsicum annuum L.) на стадии прорастания в качестве материалов исследования используются сорта Hongtianhu 101 и Xinxiang 8, имеющие большие различия в толерантности к соли. Используют шесть смешанных концентраций соли 0, 3, 5, 10, 15 и 20 г/л, полученных с использованием равных молярных соотношений Na2CO3, NaHCO3, NaCl, CaCl2, MgCl2, MgSO4 и Na2SO4 . Чтобы определить их эффекты, измеряются соответствующие показатели прорастания семян, роста рассады и физиологии, а толерантность к соли всесторонне оценивается с использованием анализа функции принадлежности. Результаты показывают, что по мере увеличения концентрации смешанных солей потенциал всхожести, индекс всхожести, скорость прорастания, индекс всхожести семян, длина корня и свежий вес корней двух сортов значительно уменьшаются, тогда как относительная скорость соли постепенно увеличивается. Длина гипокотила и свежий вес над землей сначала увеличиваются, а затем уменьшаются, в то время как активность малондиальдегида (MDA), пролина (Pro), каталазы (CAT), пероксидазы (POD) и супероксиддисмутазы (SOD) уменьшаются, а затем увеличиваются. Потенциал всхожести, индекс прорастания, скорость прорастания, индекс силы прорастания семян, длина корня, свежий вес корня, содержание MDA и Pro и активность CAT семян Hongtianhu 101 выше, чем у Xinxiang 8 для всех концентраций соли, используемых здесь. Тем не менее, длина гипокотила, свежий вес над землей и относительная норма соли в Hongtianhu 101 ниже, чем в Xinxiang 8. Всесторонняя оценка толерантности к соли показывает, что общие взвешенные значения двух индексов функции членства сначала увеличиваются, а затем уменьшаются по мере увеличения концентрации смешанной соли. По сравнению с 5 г/л, который имеет наибольшее значение функции принадлежности, индекс при концентрациях соли 3 г/л, 10 г/л и 15 г/л снижается на 4,7%-11,1%, 25,3%-28,3% и 41,4%-45,1% соответственно. Это исследование обеспечивает теоретическое руководство по разведению солеустойчивых сортов перца и анализ физиологических механизмов, участвующих в солеустойчивости и солеустойчивом культивировании.

Введение

Соленость является основным ограничивающим фактором для урожайности сельскохозяйственных культур во всем мире1. В настоящее время почти 19,5% орошаемых земель в мире и 2,1% засушливых земель страдают от солености, и примерно 1% сельскохозяйственных земель ежегодно вырождается в соленые щелочные земли. Ожидается, что к 2050 году 50% пахотных земель будут затронуты засолением 2,3. В дополнение к природным факторам, таким как естественное выветривание горных пород и соленая дождевая вода вблизи или вокруг побережья, быстрое поверхностное испарение, малое количество осадков и необоснованные методы управления сельским хозяйством усугубили процесс засоления почвы. Засоление почвы подавляет рост корней растений и уменьшает поглощение и транспортировку воды и питательных веществ от корней растений к листьям. Это торможение приводит к физиологической нехватке воды, дисбалансу питательных веществ и токсичности ионов, что приводит к снижению урожайности сельскохозяйственных культур и полной потере урожайности. Засоление обрабатываемых земель постепенно становится одним из наиболее критических абиотических стрессовых факторов, влияющих на мировое сельскохозяйственное производство продовольствия4. Солевой стресс уменьшает пахотные земли, доступные для сельского хозяйства, что может привести к значительному дисбалансу между спросом и предложением будущей сельскохозяйственной продукции. Таким образом, изучение влияния засоления почв на рост сельскохозяйственных культур и физиологические и биохимические механизмы способствует выведению солеустойчивых сортов, устойчивому использованию засоленной почвы и безопасности сельскохозяйственной продукции.

Перец (Capsicum annuum L.) высаживается во всем мире благодаря своей высокой питательной и лекарственной ценности. Например, капсаицин является алкалоидом, отвечающим за пряный вкус перца. Капсаицин может быть использован для облегчения боли, потери веса, улучшения сердечно-сосудистой системы, желудочно-кишечного тракта и дыхательной системы, а также в ряде других применений5. Перец также богат биологически активными веществами, особенно различными антиоксидантными соединениями (каротиноидами, фенолами и флавоноидами) и витаминомС6. В настоящее время перец, как сообщается, является овощной культурой с самой большой площадью выращивания в Китае, с ежегодной площадью посадки более 1,5 х 106 га, что составляет 8%-10% от общей площади посадки овощей в Китае. Перечная промышленность стала одной из крупнейших овощных отраслей в Китае и имеет самую высокую стоимость выпуска7. Однако выращивание перца часто подвергается различным биологическим (вредители и грибы) и абиотическим стрессам, особенно соляному стрессу, который оказывает прямое негативное влияние на прорастание, рост и развитие семян, что приводит к снижению урожайности плодов перца и качества8.

Прорастание семян является первым этапом взаимодействия растений и окружающей среды. Прорастание семян очень чувствительно к колебаниям в окружающих средах, особенно к соляному стрессу почвы, который может оказывать обратное влияние на физиологию и метаболизм и в конечном итоге нарушать нормальный рост, развитие и морфогенез культур9. В предыдущих исследованиях широко изучалось прорастание семян перца и рост рассады в условиях солевого стресса; однако в большинстве исследований NaCl использовался в качестве единственной соли для индукции стресса 10,11,12. Однако повреждение почвенных солей в основном обусловлено токсичностью ионов Na+, Ca2+, Mg 2+, Cl-,CO32- и SO 4 2-ионной токсичностью, вызванной диссоциацией солей натрия, кальция и магния. Из-за синергизма и антагонизма между ионами воздействие смешанной соли и одной соли на рост и развитие сельскохозяйственных культур может быть совершенно различным. Однако соответствующие характеристики прорастания семян перца и роста в смешанной соли до сих пор неясны. Поэтому в качестве материалов в этом исследовании используются два сорта перца с заметными различиями в толерантности к соли. Анализ влияния различных концентраций соли на прорастание, рост семян перца, физиологические и биохимические показатели после эквимолярного смешивания семи солей может выявить механизм реакции прорастания семян перца на стресс солености. Это также может обеспечить теоретическую основу для выращивания крепких саженцев перца, а также высокой урожайности и качественного выращивания на засоленных обрабатываемых землях.

протокол

ПРИМЕЧАНИЕ: Здесь мы представляем протокол оценки характеристик реакции и внутренних механизмов прорастания семян перца и роста рассады при различных смешанных солевых стрессах, который может служить эталонным методом оценки толерантности семян к соли.

1. Экспериментальная подготовка

  1. Подготовьте семена сельскохозяйственных культур для сортов - Hongtianhu 101 с сильной толерантностью к соли и Xinxiang 8 с низкой толерантностью.
  2. Готовят 0,2% раствор KMnO4 в качестве реагента для дезинфекции семян. Сначала взвесьте 4,0 г KMnO4, а затем добавьте 2000 мл дистиллированной воды.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Перманганат калия обычно нестабилен из-за его сильного окисления; соответственно, его готовят непосредственно перед употреблением.
  3. Приготовьте смешанные соли, используя семь солей, включая карбонат натрия, бикарбонат натрия, хлорид натрия, хлорид кальция, хлорид магния, сульфат магния и сульфат натрия13. Добавьте одинаковое молярное количество каждого, которое последовательно составляет 14,8%, 11,7%, 8,2%, 15,5%, 13,3%, 16,7% и 19,8% от общего массового соотношения смешанных солей соответственно.
  4. Готовьте чашки Петри (одноразовая) и фильтровальную бумагу (среднескоростная качественная фильтровальная бумага), обе диаметром 9 см.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Материал чашки Петри может быть изменен; однако диаметр чашки Петри и фильтровальной бумаги должен быть одинаковым.

2. Замачивание семян и подготовка к прорастанию

  1. Для оптимизации семян выбирайте семена перца с одинаковым размером и полными частицами из каждого сорта, со средним диаметром 4,2 мм и 3,7 мм для семян Hongtianhu 101 и Xinxiang 8 соответственно. Рассчитайте общее количество выбранных семян в соответствии с тестовой рабочей нагрузкой.
  2. Для обеззараживания семян замочите выбранные семена перца в 0,2% растворе KMnO4 в течение 15 мин, а затем пять раз промойте дистиллированной водой.
  3. Для замачивания семян переложите стерилизованные семена в дистиллированную воду и дайте им замочиться в течение 24 ч. Смойте семена несколько раз дистиллированной водой и высушите для дальнейшего использования.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Время замачивания семян для разных культур может варьироваться.

3. Прорастание семян и рост рассады

  1. Готовят шесть концентраций смешанных солей: 0 (контрольная), 3, 5, 10, 15 и 20 г/л. Измерьте проводимость солевого раствора с помощью измерителя проводимости; значения EC проводимости раствора составляют 0,092, 3,05, 4,73, 8,33, 11,53 и 15,22 мс/см соответственно.
  2. Для приготовления семян равномерно поместите 40 семян перца в чашку Петри с двумя слоями фильтровальной бумаги. Подготовьте семена к шести экспериментальным обработкам и повторите каждую обработку пять раз.
  3. Для прорастания семян добавьте подходящее количество шести смешанных концентраций соли в чашку Петри, чтобы фильтровальная бумага оставалась влажной. Поместите семена в воздушный инкубатор при 28 °C и влажности воздуха 80% для прорастания в темноте.
  4. После прорастания семян дайте саженцам продолжать расти в свете (интенсивность света около 450 люкс; световой цикл 12/12ч) в инкубаторе в течение 14 дней после посева. Температура и влажность на стадии роста рассады должны быть такими же, как и на стадии прорастания.
  5. Пополняйте раствор в чашке для культивирования каждые 12 ч, чтобы сохранить влажную фильтровальную бумагу, и полностью промывайте фильтровальную бумагу каждые 24 ч соответствующей концентрацией смешанного солевого раствора, чтобы поддерживать постоянную концентрацию смешанной соли в чашке Петри.
    ПРИМЕЧАНИЕ: Количество раствора соли, добавляемого во влажные семена, может регулироваться в зависимости от стадий прорастания и роста семян. Существует множество методов поддержания постоянной концентрации солевых растворов в культуральных блюдах. Помимо методов, описанных в данном эксперименте, может быть использована стратегия добавления дистиллированной воды по весу.

4. Измерение и расчет показателей

  1. Определение показателей всхожести семян
    1. Определите норму всхожести ежедневно после посева, при этом в качестве маркера прорастания в качестве маркера всхожести костыль разрушается семенная оболочка, достигающая половины длины диаметра семени.
    2. Рассчитайте скорость всхожести, потенциал прорастания, относительную скорость соли, индекс всхожести и индекс силы прорастания семян, используя следующие формулы:
      Всхожесть (%) = (количество нормальных проросших семян на 7-й день после посева/количество испытуемых семян) × 100
      Всхожесть (%) = (количество нормальных проросших семян на 3-й день после посева/количество испытуемых семян) × 100
      Относительная скорость соли (%) = (контрольная всхожесть - скорость прорастания лечения)/контрольная скорость всхожести × 100
      рассчитывается с использованием нормы всхожести семян на 7 день после посева
      Индекс прорастания (GI) = ∑ [Gt/Dt]
      где Gt относится к числу всхожести семян в период времени (t) после посева, а Dt относится к соответствующим дням прорастания
      Индекс силы прорастания семян (VI) = GI x S
      где S — длина корня
  2. Определение индекса роста рассады
    1. На 14 день после посева случайным образом выберите 10 представительных саженцев из каждой чашки Петри и измерьте длину корня и длину гипокотила.
    2. С помощью ножа разделите рассаду перца на две части: радикулярную и надземную. Удалите воду из рассады, протирая, и взвесьте рассаду отдельно, чтобы определить свежий вес.
  3. Определите активность антиоксидантного фермента, уровень малондиальдегида (MDA) и содержание пролина (Pro) в перце следующим образом.
    1. Чтобы сохранить рассаду перца, отбирайте репрезентативные цельные саженцы перца (примерно 24,0 г) из каждой обработки на 14-й день после посева. После удаления поверхностных вод немедленно заморозьте рассаду в жидком азоте на 1 мин и храните их в холодильнике при сверхнизкой температуре (-80 °С).
      ПРИМЕЧАНИЕ: Количество образцов саженцев перца, хранящихся в холодильнике со сверхнизкой температурой, должно быть достаточным на случай необходимости повторного тестирования некоторых показателей.
    2. Извлеките приблизительно 1,0 г образца рассады из каждой обработки, собранной в трех экземплярах. Поместите образец рассады в центрифужную трубку, добавьте жидкий азот и измельчите образец с помощью шлифовального стержня для определения физиологических показателей рассады. Определяемые индексы и схема измерения приведены ниже.
    3. Определение активности защитного фермента рассада (пероксидазы [POD], каталазы [CAT], супероксиддисмутазы [SOD]), содержания малонового сильдегида (MDA) и пролина (Pro) с использованием коммерчески доступного набора (на основе спектрофотометрии) для каждого фактора14.
      ПРИМЕЧАНИЕ: Более ранние наблюдения не выявили различий в солевом стрессе между концентрациями смешанных солей 15 и 20 г/л. В результате измеряется только пять концентраций соли (0, 3, 5, 10 и 15 г/л).
  4. Комплексная оценка толерантности к соли с использованием метода функции членства
    ПРИМЕЧАНИЕ: Функция членства использует метод нечеткой математики, который преобразует качественную оценку в количественную оценку15 для оценки различных физиологических показателей, затронутых повреждением солями.
    1. Вычислите значение функции членства, используя следующую формулу Zhoubin Liu et al.15:
      Ri = (Xi - Xmin)/(Xmax - Xmin)
      Если признак отрицательно коррелирует с солевой толерантностью, вычислите обратную функцию членства, используя:
      Ri = 1 - (Xi - Xmin)/(Xmax - Xmin)
      Накапливайте значения принадлежности каждого физиологического индекса, где Xi — измеренное значение определенного признака, Xmax и Xmin — максимальное и минимальное значения для Xi, соответственно, а Ri — значение принадлежности этого признака.
    2. Включите следующие соответствующие показатели: характеристики прорастания семян (потенциал прорастания, скорость прорастания, индекс всхожести и индекс силы прорастания семян), характеристики роста рассады на стадии прорастания (длина корня, длина гипокотила, свежий вес корня и свежий вес над землей), MDA, Pro и активность защитных ферментов (CAT, POD, SOD) для расчета значения функции принадлежности. Значения функции членства получены из каждого индикатора.
  5. Используйте электронные таблицы и программное обеспечение SPSS (версия 22.0) для анализа и обработки тестовых данных и применяйте метод наименьшей значимой разницы (LSD) для нескольких сравнений для выявления существенных различий. Используйте корреляционный анализ Пирсона, чтобы исследовать корреляцию между всхожестью семян и физиологическими показателями рассады перца при сложном солевом стрессе.

Результаты

Характеристики прорастания семян
По мере увеличения концентрации смешанных солей потенциал прорастания и индекс прорастания Hongtianhu 101 и Xinxiang 8 значительно снижаются. Оба сорта имеют резкое снижение концентрации соли с 0-3 г/л и медленное и устойчивое снижение концентрации сол...

Обсуждение

Этот метод исследования состоит из четырех ключевых этапов, которые влияют на точность экспериментальных результатов. Во-первых, из-за плохого растворения смешанных солей, вызванного повышенным содержанием растворенных веществ в растворах с высокой концентрацией соли, и низкой раств...

Раскрытие информации

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Благодарности

Эта работа была поддержана Департаментом науки и техники провинции Цзянси (20203BBFL63065) и Общим проектом научно-технического исследовательского проекта Департамента образования Цзянси (GJJ211430). Мы хотели бы поблагодарить Editage (www.editage.cn) за редактирование на английском языке.

Материалы

NameCompanyCatalog NumberComments
Calcium chlorideShanghai Experiment Reagent Co., Ltd.,ChinaAnalytical reagent
Centrifugal machineShanghai Luxianyi Centrifuge Instrument Co., Ltd., ChinaTGL-16M
Centrifuge tubeNoneNone
Conductivity meterShanghai Instrument&Electronics Science Instrument Co., Ltd., ChinaDDSJ-308F
Constant temperature and humidity boxNingbo Laifu Technology Co., Ltd.,ChinaPSX-280H
Digital display vernier caliperDeli Group Co., Ltd.,ChinaDL90150
Electronic balanceMettler Toledo Instruments (Shanghai) Co., Ltd.,ChinaME802E/02
Filter paperHangzhou Fuyang North Wood Pulp and Paper Co., Ltd.,ChinaGB/T1914-2017
Grinding rodNoneNone
Hongtianhu  101Seminis Seed (Beijing) Co., Ltd.,China11933955/100147K1-137
Ice machineShanghai Kehuai Instrument Co., Ltd., ChinaIM150G
Liquid nitrogenNoneNone
Magnesium chlorideTianjin Kermel Chemical Reagent Co., Ltd.,ChinaAnalytical reagent
Magnesium sulfateTianjin Kermel Chemical Reagent Co., Ltd.,ChinaAnalytical reagent
Petri dishJiangsu Yizhe Teaching Instrument Co., Ltd.,ChinaI-000163
Pocket knifeNoneNone
Potassium permanganate (KMnO4Xilong Scientific Co.,Ltd.,ChinaAnalytical reagent
Pure water equipmentSichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd.,ChinaUPT-I-20T
Sodium bicarbonateXilong Scientific Co.,Ltd.,ChinaAnalytical reagent
Sodium carbonateXilong Scientific Co.,Ltd.,ChinaAnalytical reagent
Sodium chlorideXilong Scientific Co.,Ltd.,ChinaAnalytical reagent
Sodium sulfate Xilong Scientific Co.,Ltd.,ChinaAnalytical reagent
Test kitSuzhou Keming, Biotechnology Co., Ltd, Suzhou.,ChinaSpectrophotometer method
Ultra-low temperature freezerSANYO Techno Solution TottoriCo.,Ltd.MDF-382
Ultraviolet visible spectrophotometerShanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd., China 760CRT
Xinxiang 8Jiangxi Nongwang High Tech Co., Ltd.,ChinaGPD Pepper 2017(360013)

Ссылки

  1. Szabolcs, I. Soils sand salinisation. Handbook of Plant and Crop Stress. , 3-11 (1994).
  2. Lakhdar, A., et al. Effectiveness of compost use in salt-affected soil. Journal of Hazardous Materials. 171 (1-3), 29-37 (2009).
  3. Cheng, Z., Chen, Y., Zhang, F. Effect of cropping systems after abandoned salinized farmland reclamation on soil bacterial communities in arid northwest China. Soil and Tillage Research. 187, 204-213 (2019).
  4. Shrivastava, P., Kumar, R. Soil salinity: A serious environmental issue and plant growth promoting bacteria as one of the tools for its alleviation. Saudi Journal of Biological Sciences. 22 (2), 123-131 (2015).
  5. Fattori, V., Hohmann, M. S., Rossaneis, A. C., Pinho-Ribeiro, F. A., Verri, W. A. Capsaicin: Current understanding of its mechanisms and therapy of pain and other pre-clinical and clinical uses. Molecules. 21 (7), 844-878 (2016).
  6. Zhao, Z., et al. Investigation, collection and identification of pepper germplasm resources in Guangxi. Journal of Plant Genetic .Resources. 21 (4), 908-913 (2020).
  7. Zhang, J., et al. Biochar alleviated the salt stress of induced saline paddy soil and improved the biochemical characteristics of rice seedlings differing in salt tolerance. Soil and Tillage Research. 195, 104372-104381 (2019).
  8. Ashraf, M., Foolad, M. R. Pre-sowing seed treatment-A shotgun approach to improve germination, plant growth, and crop yield under saline and non-saline conditions. Advances in Agronomy. 88, 223-271 (2005).
  9. Esra, K. O. &. #. 1. 9. 9. ;., Üstün, A. S., İşlek, C., Arici, Y. K. Effect of exogenously applied spermine and putrescine on germination and in vitro growth of pepper (Capsicum annuum l.) seeds under salt stress. Anadolu University Journal of Science and Technology C-Life Sciences and Biotechnology. 3 (2), 63-71 (2014).
  10. Demir, I., Mavi, K. Effect of salt and osmotic stresses on the germination of pepper seeds of different maturation stages. Brazilian Archives of Biology and Technology. 51 (5), 897-902 (2008).
  11. Khan, H. A., et al. Effect of seed priming with NaCl on salinity tolerance of hot pepper (Capsicum annuum L.) at seedling stage. Soil and Environment. 28 (1), 81-87 (2009).
  12. Zhou, L. L. Effects of salinity stress on cotton (Gossypium hirsutum L.) root growth and cotton field soil micro-ecology. Nanjing Agricultural University. , (2010).
  13. Ding, D. X., et al. Exogenous zeaxanthin alleviates low temperature combined with low light induced photosynthesis inhibition and oxidative stress in pepper (Capsicum annuum L.) plants. Current Issues in Molecular Biology. 44 (6), 2453-2471 (2022).
  14. Liu, Z. B., Yang, B. Z., Ou, L. J., Zou, X. X. The impact of different Ca2+ spraying period on alleviating pepper injury under the waterlogging stress. Acta Horticulturae Sinica. 42 (8), 1487-1494 (2015).
  15. Aloui, H., Souguir, M., Latique, S., Hannachi, C. Germination and growth in control and primed seeds of pepper as affected by salt stress. Cercetări agronomice în Moldova. 47 (3), 83-95 (2014).
  16. Zhani, K., Elouer, M. A., Aloui, H., Hannachi, C. Selection of a salt tolerant Tunisian cultivar of chili pepper (Capsicum frutescens). EurAsian Journal of Biosciences. 6, 47-59 (2012).
  17. Patanè, C., Saita, A., Sortino, O. Comparative effects of salt and water stress on seed germination and early embryo growth in two cultivars of sweet sorghum. Journal of Agronomy and Crop Science. 199 (1), 30-37 (2013).
  18. Smith, P. T., Cobb, B. G. Accelerated germination of pepper seed by priming with salt solutions and water. Hortscience. 26 (4), 417-419 (2019).
  19. Mirosavljević, M., et al. Maize germination parameters and early seedlings growth under different levels of salt stress. Ratarstvo i Povrtarstvo. 50 (1), 49-53 (2013).
  20. Khan, H. A., et al. Hormonal priming alleviates salt stress in hot pepper (Capsicum annuum L.). Soil and Environment. 28 (2), 130-135 (2009).
  21. Zhang, B. B., et al. Effects of simulated salinization on seed germination and physiological characteristics of muskmelon seedlings. Chinese Journal of Tropical Crops. 41 (5), 912-920 (2020).
  22. Guzmán-Murillo, M. A., Ascencio, F., Larrinaga-Mayoral, J. A. Germination and ROS detoxification in bell pepper (Capsicum annuum L.) under NaCl stress and treatment with microalgae extracts. Protoplasma. 250 (1), 33-42 (2013).
  23. Slama, I., Abdelly, C., Bouchereau, A., Flowers, T., Savoure, A. Diversity, distribution and roles of osmoprotective compounds accumulated in halophytes under abiotic stress. Annals of Botany. 115 (3), 433-447 (2015).
  24. Muchate, N. S., Nikalje, G. C., Rajurkar, N. S., Suprasanna, P., Nikamd, T. D. Physiological responses of the halophyte Sesuvium portulacastrum to salt stress and their relevance for saline soil bio-reclamation. Flora. 224, 96-105 (2016).
  25. Javed, S. A., et al. Can different salt formulations revert the depressing effect of salinity on maize by modulating plant biochemical attributes and activating stress regulators through improved N supply. Sustainability. 13 (14), 8022-8037 (2021).
  26. Chen, J., et al. Effects of salt stress on form of polyamine and antioxidation in germinating tomato seed. Acta Pedologica Sinica. 58 (6), 1598-1609 (2021).

Перепечатки и разрешения

Запросить разрешение на использование текста или рисунков этого JoVE статьи

Запросить разрешение

Смотреть дополнительные статьи

189

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Конфиденциальность

Условия эксплуатации

Политика

СВЯЖИТЕСЬ С НАМИ

РЕКОМЕНДОВАТЬ БИБЛИОТЕКЕ

НОВОСТИ JoVE

Исследования

Образование

АВТОРЫ

Библиотекарь

О JoVE

Авторские права © 2025 MyJoVE Corporation. Все права защищены