Авторы выражают благодарность Андреа Акстелл, Сатоши Ито, доктор медицинских наук, Джефф Velotta, доктор медицинских наук, Грант Хойт, Роберт С. Роббинс, доктор медицинских наук, Цзинь Юй, доктор медицинских наук, Тим Дойл, кандидат наук, и Стэнфордского небольшое ядро ​​изображениями животных для оказания технической помощи. Авторы также выражают благодарность А. М. Бикфорд, Inc для поддержки ветеринарное оборудование. Это исследование было поддержано исследовательских грантов от Национального института здоровья (R01 HL-75774, R01 CA098303, R21 HL085743, 1K12 HL087746), Табак Калифорнии соответствующей программы исследований Заболевание Калифорнийского университета (15IT-0257 и 1514RT-0169) , и Калифорнийского института регенеративной медицины (RS1-00183). NH поддерживает общение с Американской ассоциации сердца.

1. Индукция Односторонние ишемии задней конечности <ol><li> Хирургические инструменты, необходимые для этой операции включают в себя: штраф отметил щипцы, пинцеты отметил, весна ножницы, хирургические ножницы, иглодержатель, и втягивающим. Мы делаем наши собственные втягивающим помощью скрепки, потому что это меньше, чем коммерчески доступные преднатяжителями. Стерилизовать эти инструменты до операции по автоклаве или горячей бусинка стерилизатор. Прижигания инструмент и стерильный штраф отметил ватные тампоны также будут необходимы для этой операции. Рекомендуется, чтобы инструменты повторно стерилизуют при советы по мере необходимости во время процедуры. </li><li> Когда инструменты готовы, поместите мышь в камере наркоза индукция содержащие 1-3% изофлуран в 100% кислорода при скорости потока 1L/min. </li><li> Оставьте мышь в индукции камере, пока он не реагирует на внешние раздражители. Затем удалите животное от индукции камеры. Рекомендуется, чтобы избавиться от анестезии окно до открытия крышки, для уменьшения воздействия на оператора в изофлуран. </li><li> Затем поместите животное в лежачем положении на предварительно операционном столе и подключить его к непрерывным потоком изофлуран. Использование электробритвы, удалить волосы из задних конечностей. Нанесите крем для удаления волос тщательно удалить волосы. </li><li> Наведите в положении лежа на драпированные подогревом накладка на операционном столе, и подключить его к непрерывным потоком изофлуран. Расширение и безопасной задних конечностей с ленты. Как только задние конечности находится в безопасности, протирать кожу трех чередующихся бетадин и алкоголя скрабов. На оставшуюся часть хирургической процедуры, используйте рассечение микроскопа 10х или 20х увеличением, чтобы получить увеличенное изображение задней конечности регионе. </li><li> Использование тонких хирургических щипцов и ножниц, делают разрез кожи, примерно 1 см длиной, от колена к медиальной бедра. </li><li> Использование фосфатным буферным раствором (PBS) увлажненных штраф отметил ватных тампонов, слегка смахнуть подкожной жировой ткани, окружающие мышцу бедра. </li><li> Далее, применяют прижигание поперек надрезать и анализировать через подкожную жировую ткань, чтобы выявить основные бедренной артерии. </li><li> Используйте втягивающим, чтобы открыть раны и получить более четкое представление о нижних конечностей сосудов. </li><li> Использование тонких щипцов и штраф отметил ватным тампоном, слегка прокалывают через мембранные бедренной оболочки подвергать сосудисто-нервный пучок. </li><li> Затем, используя чистую множество мелких пинцетом и ватным тампоном, препарировать и отдельных бедренной артерии от бедренной вены и нерв в проксимальных расположение вблизи паха. После вскрытия, проходят нити 7-0 шелковых шва под проксимального конца бедренной артерии. Окклюзии проксимального отдела бедренной артерии помощью двойных узлов. Место галстук на судне в качестве проксимального в ране, как это возможно, чтобы оставить длину галстука и второй промежуточный сегмент, который будет перерезана. </li><li> Отдельные бедренной артерии от бедренной вены на дистальном месте рядом с коленом. Pass прядь 7-0 шва под дистального конца бедренной артерии проксимальнее подколенной артерии. Закупорить сосуд помощью двойных узлов. </li><li> Окклюзии дистальной бедренной артерии с второй набор двойных узлов просто проксимальнее первого набора узлов. Второй комплекс швы будут использованы для захвата артерии во время сделки процедуры. </li><li> Аналогично, для захвата целей, закрывают проксимального отдела бедренной артерии с второй набор двойных узлов только дистальнее первого набора узлов. </li><li> Трансекта сегменте бедренную артерию между дистальной и проксимальной узлов с тонкой отметил ватный тампон и пару весной ножницами. Будьте осторожны, чтобы не проткнуть стену бедренной вены. </li><li> Удалить втягивающим и закрыть разрез использованием 5-0 Викрил швов. Эти швы не должны быть удалены в более позднее время, как они растворяются сами по себе. </li><li> Как только разрез закрыт, место животного в верхней части драпированные подогревом площадку в восстановлении клетку и монитор непрерывно, пока не проснулись. </li><li> После животного восстановилась в течение 1 часа, выполните крови лазерный доплеровский шаг перфузии с целью подтверждения ишемии индукции. </li></ol> 2. Лазерная допплеровская кровотока <ol><li> Для начала перфузии лазерного доплеровского шаг, при наведении в камеру анестезии индукции содержащие 1-3% изофлуран в 100% кислорода при скорости потока 1L/min. </li><li> Оставьте мышь в индукции камере, пока он не реагирует на внешние раздражители. Затем удалите животное от индукции камеры. Рекомендуется, чтобы избавиться от анестезии окно до открытия крышки, для уменьшения воздействия на оператора в изофлуран. </li><li> Место животное на предварительно операционном столе связано с непрерывным потоком изофлуран. Затем удалите волосы от задних конечностей использованием электробритвы следуют удаления волос крем по мере необходимости. </li><li> После удаления волос,место животного на 37 ° C нагретой поверхности в течение 5 минут при непрерывном потоке изофлуран. Монитор температуры ядра для обеспечения euthermia, как изменения температуры будет заметно влиять перфузии. </li><li> Через 5 минут, поместите животное в лежачем положении на антибликовым поглощающих свет поверхности, например, зеленого цвета, ткани, связанные с непрерывным потоком изофлуран. Расширение задних конечностей. </li><li> Затем включите лазерного доплеровского томографа и приобретение программного обеспечения и инициализации программного обеспечения. Укажите размер поля зрения и разрешение. Лучше всего держать в поле зрения и плотность пикселей последовательной между животными, с тем чтобы в будущем анализ проще. </li><li> Откройте новый файл. Пресса начала начать приобретения данных изображений. Как правило, тепловизор автоматически определяет расстояние мышь, но если будет предложено указать расстояние животных в тепловизор. Лазер-шоу границ поля зрения, а затем начать сбор данных. </li><li> После приобретения завершен, изображение начнет показывать диапазон цветов, которые указывают на уровень кровотока в ногах. Цвета могут быть установлены в определенном диапазоне перфузии лучше сравнивать данные между животными. </li><li> Когда сбор данных завершен, сохраните файл. </li><li> Затем вернитесь животное восстановления клетки и мониторинг животного непрерывно, пока не проснулись. </li><li> Для анализа данных, используйте настройки порога в программное обеспечение для анализа вычесть любые фоновые шумы. Порог в 0,2, как правило, в разумных пределах. Выберите 2 регионах, представляющих интерес, или трансформирования, которые покрывают каждый задних конечностей области. Различные ориентиры могут быть использованы для стандартизации ROI между конечностями и животных. Затем определить среднее перфузии и изменчивости в ROI. Разница перфузии и перфузионного соотношения между ишемической конечностей и контроль конечности могут быть легко определены. </li><li> Эта процедура может быть повторена, чтобы следить за изменениями в задних конечностей перфузии с течением времени. В нужное время точки, животное может быть умерщвлены для оценки функции тканей и сравнение с данными перфузии изображения. </li></ol> 3. Представитель Результаты: Анатомия задней конечности сосудистую показано на рисунке 1 2. Представитель диаграмма задних конечностей после бедренной артерии эксплантации показано на рисунке 2. Для подтверждения индукции ишемии на задних конечностей, лазерная допплеровская перфузии анализа изображений демонстрирует значительное уменьшение притока крови к ишемической конечности, по сравнению с контролем конечности, как показано на рисунке 3. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_26_9/figure1_1035.png" alt="Рисунок 1" width="600" height="406" /> Рисунок 1. Анатомия сосудистой задних конечностей. Звездочки указывают места перевязки для индукции задних конечностей ишемии. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_20_7/Niiyama_HLI_Fig2.png" alt="Изображение 2" width="600" height="450" /> Рисунок 2. Представителю диаграмма, показывающая анатомию задней конечности после перевязки бедренной артерии в проксимальных и дистальных участков после удаления бедренной артерии. <img src="/files/ftp_upload/old/1035_2009_1_20_8/Niiyama_HLI_Fig3.png" alt="Рисунок 3" width="600" height="256" /> Рисунок 3. Лазерные доплеровские изображения, показывающие кровотока до и после индукции ишемии в левой задней конечности (указано стрелкой).

<ol>
	<li>Huang, N. F., Niiyama, H., De, A., Cooke, J. P., , . <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Transplantation+and+non-invasive+tracking+of+embryonic+stem+cell-derived+endothelial+cells+for+treatment+of+hindlimb+ischemia.">Transplantation and non-invasive tracking of embryonic stem cell-derived endothelial cells for treatment of hindlimb ischemia.</a> J Vis Exp. , (2008).</li><li>Cook, M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=.">.</a> The anatomy of the laboratory mouse. , (1976).</li><li>Niiyama, H., Kai, H., Yamamoto, T., Shimada, T., Sasaki, K., Murohara, T., Egashira, K., Imaizumi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Roles+of+endogenous+monocyte+chemoattractant+protein-1+in+ischemia-induced+neovascularization.">Roles of endogenous monocyte chemoattractant protein-1 in ischemia-induced neovascularization.</a> J. Am. Coll. Cardiol. 44, 661-666 (2004).</li><li>Dokun, A. O., Keum, S., Hazarika, S., Li, Y., Lamonte, G. M., Wheeler, F., Marchuk, D. A., Annex, B. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+quantitative+trait+locus+(LSq-1)+on+mouse+chromosome+7+is+linked+to+the+absence+of+tissue+loss+after+surgical+hindlimb+ischemia.">A quantitative trait locus (LSq-1) on mouse chromosome 7 is linked to the absence of tissue loss after surgical hindlimb ischemia.</a> Circulation. 117, 1207-1215 (2008).</li></ol>

Есть несколько источников изменчивости, чтобы рассмотреть при планировании и проведении задних конечностей модели ишемии. Во-первых, уровень ишемии может различаться в зависимости от расположения лигирования в отношении этой боковых ветвей. Таким образом, для последовательности модели, животные должны пройти тот же уровень артериального труб. Другой источник изменчивости при ишемической восстановление, связанные с возрастом животных, с маленькими животными (6-8 недель), имеющие более быстрого и полного восстановления темпами, чем старых животных (8-10 месяцев), по оценке гемодинамики (т.е. лазерного доплеровского перфузии) или функциональные (например, тестирование беговой дорожке) мер. Для исследований, в которых один является оценка ангиогенных агентом, он может быть предпочтительнее использовать старых животных, потому что большая разница между группами могут наблюдаться с терапевтического вмешательства. Наоборот, для исследований, в которых один является оценка антиангиогенного фактор, он может быть предпочтительнее использовать более молодых животных, чтобы максимизировать эффект 3 размера. Если выполнены правильно, там должны быть минимальными осложнениями, такими как кровотечение, инфекция, или смертности. Если кровотечение происходит путем случайного нарушения бедренную вену или других судов, умеренное давление со стерильным ватным тампоном наконечником аппликатором или марлю следует наносить на месте кровоизлияния, пока кровотечение не остановится. Животные демонстрируют признаки инфекции следует лечить антибактериальными агентами. Животные, демонстрирующие значительные гангрена, возможно, потребуется beeuthanized. Это осложнение чаще встречается у взрослых животных, а в некоторых штаммов, например, с мышей BALB 4. Кроме того, модель задних конечностей ишемии может привести к легкой или умеренной боли. Таким образом, анальгетики, такие как бупренорфин или carprofen следует вводить по мере необходимости для лечения боли, в соответствии с рекомендациями IACUC. В заключение, мы продемонстрировали простой и воспроизводимый метод для изучения ОРП в мышиной модели задних конечностей ишемии. Модели ишемии задней конечности с лазерным анализ допплер является отличной системой для изучения сосудистой патологии, а также для оценки терапевтических кандидатов.

<!DOCTYPE html PUBLIC "-//W3C//DTD XHTML 1.0 Transitional//EN" "http://www.w3.org/TR/xhtml1/DTD/xhtml1-transitional.dtd">
<html xmlns="http://www.w3.org/1999/xhtml" xml:lang="en" lang="en">	
		
		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Surgical Tools</td>
<td>Tool</td>
<td>Fine Science Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Constix Cotton Swabs</td>
<td>Tool</td>
<td>Contec</td>
<td>SC-4</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Betadine (Povidone-iodine)</td>
<td>Reagent</td>
<td>PDI</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>70% alcohol</td>
<td>Reagent</td>
<td>Kendall</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Phosphate Buffered Saline</td>
<td>Reagent</td>
<td>Invitrogen</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>7-0 silk suture</td>
<td>Tool</td>
<td>Genzyme</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>5-0 vicryl suture</td>
<td>Tool</td>
<td>Ethicon</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Electric shaver</td>
<td>Tool</td>
<td>GE</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Cautery</td>
<td>Tool</td>
<td>Baxter</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Laser Doppler and PeriScan PIM 3 System</td>
<td>Equipment</td>
<td>Perimed</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

murine model of hindlimb ischemia 

В Соединенных Штатах, заболевания периферических артериальных (PAD) страдают около 10 миллионов человек, а также распространение по всему миру. Медицинские терапии для облегчения симптомов ограничены. Хирургическое или эндоваскулярных вмешательств являются полезными для некоторых людей, но и долгосрочные результаты часто разочаровывают. В результате, существует необходимость разработки новых методов лечения для лечения PAD. Мышиные подготовки ишемии задних конечностей представляет собой модель PAD, и полезно для тестирования новых методов лечения. По сравнению с другими моделями ишемии тканей, таких как ишемическая или мозговой артерии перевязки, перевязки бедренной артерии обеспечивает простую модель ишемической ткани. Другие преимущества этой модели легкость доступа к бедренной артерии и низкой смертности. В этом видео, мы демонстрируем методологии мышиной модели односторонних ишемии hindimb. Конкретные материалы и процедуры создания и оценки модели будет описана, в том числе оценку перфузии конечностей при лазерной допплеровской визуализации. Этот протокол также может быть использована для трансплантации и неинвазивные отслеживания клеток, о чем свидетельствует Huang и соавт. 1.

Watch this Scientific Journal Video about Murine Model of Hindlimb Ischemia at JoVE.com

Murine Model of Hindlimb Ischemia

Хирургическая процедура для индукции односторонних ишемии задних конечностей свидетельствует, с подтверждением ишемии лазерным перфузии Доплера.

Мышиной модели ишемии задней конечности

In the United States, peripheral arterial disease (PAD) affects about 10 million individuals, and is also prevalent worldwide.  Medical therapies for ...

Research

JoVE Journal

Biology

Murine Model of Hindlimb Ischemia 

57.1K Views.  Stanford University. Хирургическая процедура для индукции односторонних ишемии задних конечностей свидетельствует, с подтверждением ишемии лазерным перфузии Доплера.

Video: Murine Model of Hindlimb Ischemia

The Hypoxic Ischemic Encephalopathy Model of Perinatal Ischemia

Hypoxic-Ischemic Encephalopathy (HIE) is the consequence of systemic asphyxia occurring at birth. Twenty five percent of neonates with HIE develop severe and permanent neuropsychological sequelae, including mental retardation, cerebral palsy, and epilepsy. The outcomes of HIE are devastating and permanent, making it critical to identify and develop therapeutic strategies to reduce brain injury in newborns with HIE. To that end, the neonatal rat model for hypoxic-ischemic brain injury has been developed to model this human condition. The HIE model was first validated by Vannucci et al 1 and has since been extensively used to identify mechanisms of brain injury resulting from perinatal hypoxia-ischemia 2 and to test potential therapeutic interventions 3,4. The HIE model is a two step process and involves the ligation of the left common carotid artery followed by exposure to a hypoxic environment. Cerebral blood flow (CBF) in the hemisphere ipsilateral to the ligated carotid artery does not decrease because of the collateral blood flow via the circle of Willis; however with lower oxygen tension, the CBF in the ipsilateral hemisphere decreases significantly and results in unilateral ischemic injury. The use of 2,3,5-triphenyltetrazolium chloride (TTC) to stain and identify ischemic brain tissue was originally developed for adult models of rodent cerebral ischemia 5, and is used to evaluate the extent of cerebral infarctin at early time points up to 72 hours after the ischemic event 6. In this video, we demonstrate the hypoxic-ischemic injury model in postnatal rat brain and the evaluation of the infarct size using TTC staining.

The postnatal rat model for hypoxic-ischemic brain injury is a well-established model of human neonatal hypoxic ischemic encephalopathy (HIE). In this article, we describe the model of HIE in post-natal rat pups.

Гипоксически-ишемической энцефалопатии Модель перинатальной ишемии

Hypoxic-Ischemic Encephalopathy (HIE) is the consequence of systemic asphyxia occurring at birth. Twenty five percent of neonates with HIE develop severe ...

Embryonic Stem Cell-Derived Endothelial Cells for Treatment of Hindlimb Ischemia

Peripheral arterial disease (PAD) results from narrowing of the peripheral arteries that supply oxygenated blood and nutrients to the legs and feet, This pathology causes symptoms such as intermittent claudication (pain with walking), painful ischemic ulcerations, or even limb-threatening gangrene. It is generally believed that the vascular endothelium, a monolayer of endothelial cells that invests the luminal surface of all blood and lymphatic vessels, plays a dominant role in vascular homeostasis and vascular regeneration. As a result, stem cell-based regeneration of the endothelium may be a promising approach for treating PAD.In this video, we demonstrate the transplantation of embryonic stem cell (ESC)-derived endothelial cells for treatment of unilateral hindimb ischemia as a model of PAD, followed by non-invasive tracking of cell homing and survival by bioluminescence imaging. The specific materials and procedures for cell delivery and imaging will be described. This protocol follows another publication in describing the induction of hindlimb ischemia by Niiyama et al.1

The surgical procedure for delivery of embryonic stem cell-derived endothelial cells to the ischemic hindlimb is demonstrated, with non-invasive tracking by bioluminescence imaging.

Эмбриональных стволовых клеток-производных эндотелиальных клеток для лечения ишемии задней конечности

Peripheral arterial disease (PAD) results from narrowing of the peripheral arteries that supply oxygenated blood and nutrients to the legs and feet, This ...

LAD-Ligation: A Murine Model of Myocardial Infarction

Research models of infarction and myocardial ischemia are essential to investigate the acute and chronic pathobiological and pathophysiological processes in myocardial ischemia and to develop and optimize future treatment.
Two different methods of creating myocardial ischemia are performed in laboratory rodents. The first method is to create cryo infarction, a fast but inaccurate technique, where a cryo-pen is applied on the surface of the heart (1-3). Using this method the scientist can not guarantee that the cryo-scar leads to ischemia, also a vast myocardial injury is created that shows pathophysiological side effects that are not related to myocardial infarction. The second method is the permanent ligation of the left anterior descending artery (LAD). Here the LAD is ligated with one single stitch, forming an ischemia that can be seen almost immediately. By closing the LAD, no further blood flow is permitted in that area, while the surrounding myocardial tissue is nearly not affected. This surgical procedure imitates the pathobiological and pathophysiological aspects occurring in infarction-related myocardial ischemia.
The method introduced in this video demonstrates the surgical procedure of a mouse infarction model by ligating the LAD. This model is convenient for pathobiological and pathophysiological as well as immunobiological studies on cardiac infarction. The shown technique provides high accuracy and correlates well with histological sections.

This video demonstrates how to use a fast and reliable model to study pathobiological and pathophysiological processes of myocardial ischemia.

Лад-Лигирование: мышиной модели инфаркта миокарда

Research models of infarction and myocardial ischemia are essential to investigate the acute and chronic pathobiological and pathophysiological processes ...

An Alternant Method to the Traditional NASA Hindlimb Unloading Model in Mice

The Morey-Holton hindlimb unloading (HU) method is a widely accepted National Aeronautics and Space Administration (NASA) ground-based model for studying disuse-atrophy in rodents 4-6. Our study evaluated an alternant method to the gold-standard Morey-Holton HU tail-traction technique in mice. Fifty-four female mice (4-8 mo.) were HU for 14 days (n=34) or 28 days (n=20). Recovery from HU was assessed after 3 days of normal cage ambulation following HU (n=22). Aged matched mice (n=76) served as weight-bearing controls.
Prior to HU a tail ring was formed with a 2-0 sterile surgical steel wire that was passed through the 5th, 6th, or 7th inter-vertebral disc space and shaped into a ring from which the mice were suspended. Vertebral location for the tail-ring was selected to appropriately balance animal body weight without interfering with defecation.
We determined the success of this novel HU technique by assessing body weight before and after HU, degree of soleus atrophy, and adrenal mass following HU. Body weight of the mice prior to HU (24.3 &plusmn; 2.9g) did not significantly decline immediately after 14d of HU (22.7 &plusmn; 1.9g), 28d of HU (21.3 + 2.1g) or after 3 days recovery (24.0 &plusmn; 1.8g). Soleus muscle mass significantly declined (-39.1%, and -46.6%) following HU for 14 days and 28 days respectively (p&lt;0.001). Following 3 days of recovery soleus mass significantly increased to 74% of control values. Adrenal weights of HU mice were not different compared to control mice.
The success of our novel HU method is evidenced by the maintenance of animal body weight, comparable adrenal gland weights, and soleus atrophy following HU, corresponding to expected literature values 2, 7, 8. The primary advantages of this HU method include: 1) ease of tail examination during suspension; 2) decreased likelihood of cyanotic, inflamed, and/or necrotic tails frequently observed with tail-taping and HU; 3) no possibility of mice chewing the traction tape and coming out of the suspension apparatus; and 4) rapid recovery and normal cage activity immediately after HU.

We developed an alternant hindlimb unloading model in mice. The primary advantage of our hindlimb unloading tail-ring method over the conventional Morey-Holton tail-traction technique is a simple straightforward procedure that minimizes stress upon the animal.

Альтернантных Метод Традиционные НАСА задних конечностей Выгрузка модели у мышей

The Morey-Holton hindlimb unloading (HU) method is a widely accepted National Aeronautics and Space Administration (NASA) ground-based model for studying ...

An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

Protocols for anoxia/starvation in the genetic model organism C. elegans simulate ischemia/reperfusion. Worms are separated from bacterial food and placed under anoxia for 20 hr&#160;(simulated ischemia), and subsequently moved to a normal atmosphere with food (simulated reperfusion). This experimental paradigm results in increased death and neuronal damage, and techniques are presented to assess organism viability, alterations to the morphology of touch neuron processes, as well as touch sensitivity, which represents the behavioral output of neuronal function. Finally, a method for constructing hypoxic incubators using common kitchen storage containers is described. The addition of a mass flow control unit allows for alterations to be made to the gas mixture in the custom incubators, and a circulating water bath allows for both temperature control and makes it easy to identify leaks. This method provides a low cost alternative to commercially available units.

An Anoxia-starvation Model for Ischemia/Reperfusion in C. elegans

A protocol is described that uses anoxia/starvation in C. elegans to model ischemia/reperfusion. Functional outcomes include increased mortality, visible abnormalities in GFP-labeled neuronal processes, and impaired behavioral responses that require neuronal function.

Аноксия-голодание модель ишемии / реперфузии в<em&gt; С. Элеганс</em

Protocols for anoxia/starvation in the genetic model organism C. elegans simulate ischemia/reperfusion. Worms are separated from bacterial food and placed ...

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented (CDE) Diet Model of Chronic Liver Injury

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual inflammation, progressive destruction and regeneration of the hepatic parenchyma, liver progenitor cell proliferation, and fibrosis. The end-stage of every chronic liver disease is cirrhosis, a major risk factor for the development of hepatocellular carcinoma. To study processes regulating disease initiation, establishment, and progression, several animal models are used in laboratories. Here we describe a six-week time course of the choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) mouse model, which involves feeding six-week old male C57BL/6J mice with choline-deficient chow and 0.15% DL-ethionine-supplemented drinking water. Monitoring of animal health and a typical body weight loss curve are explained. The protocol demonstrates the gross examination of a CDE-treated liver and blood collection by cardiac puncture for subsequent serum analyses. Next, the liver perfusion technique and collection of different hepatic lobes for standard evaluations are shown, including liver histology assessments by hematoxylin and eosin or Sirius Red stainings, immunofluorescent detection of hepatic cell populations as well as transcriptome profiling of the liver microenvironment. This mouse model is suitable for studying inflammatory, fibrogenic, and liver progenitor cell dynamics induced through chronic liver disease and can be used to test potential therapeutic agents that may modulate these processes.

The Murine Choline-Deficient, Ethionine-Supplemented CDE Diet Model of Chronic Liver Injury

Here we describe a common method to induce chronic liver injury in mice by feeding of a choline-deficient and ethionine-supplemented (CDE) diet. We demonstrate health monitoring, liver perfusion, isolation, and preservation. A time course of six weeks can inform about liver injury, pathohistology, fibrosis, inflammatory, and liver progenitor cell responses.

Мышиных холин недостаточным, дополнены Ethionine (CDE) модель хронической травмы печени диета

Chronic liver diseases, such as viral hepatitis, alcoholic liver disease, or non-alcoholic fatty liver disease, are characterized by continual ...

A Murine Model of Vertical Sleeve Gastrectomy

Bariatric surgery, such as vertical sleeve gastrectomy (VSG), is a surgery of the gastrointestinal tract that is performed for the purpose of weight loss. Bariatric surgery is currently the most effective long-term treatment for obesity. In addition to weight loss, bariatric surgery produces additional health benefits such as remission of type 2 diabetes, remission of hypertension, and decreased risk of developing certain types of cancer. The mechanisms beyond weight loss for these benefits remain incompletely defined. Therefore, animal models of bariatric surgery are being developed and validated to identify the mechanisms leading to these benefits, with the goal of improving understanding of gastrointestinal physiology and identifying new therapeutic targets. VSG has become the most commonly performed bariatric procedure in the clinic in the United States because it is highly effective at producing weight loss and metabolic improvement, and is simpler to perform than other bariatric procedures. Therefore, we have developed and validated a murine model of VSG. This murine VSG model recapitulates many of the effects of VSG seen in humans, including improved glucose and blood pressure regulation. The method is based on isolation of the stomach, ligation of gastric vessels, and removal of 70% of the stomach by transecting along the greater curvature of the stomach. We have successfully applied this surgical protocol to various genetically modified mouse lines to define the mechanistic contributors to the benefits of VSG. Furthermore, this murine VSG model has been combined with other surgical techniques, to achieve deeper mechanistic insight. Therefore, this is a simple and versatile model for studying gastrointestinal physiology and the health benefits of bariatric surgery.

The following describes the performance of vertical sleeve gastrectomy in mice. This is a type of weight-loss surgery that involves removal of approximately 70% of the stomach.

Мышиных модель вертикальная рукавная резекция желудка

Bariatric surgery, such as vertical sleeve gastrectomy (VSG), is a surgery of the gastrointestinal tract that is performed for the purpose of weight loss. ...

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer progression. How the chromosomal location and function of a centromere (i.e., centromere identity) are determined and participate in accurate chromosome segregation is a fundamental question. CENP-A is proposed to be the non-DNA indicator (epigenetic mark) of centromere identity, and CENP-A ubiquitylation is required for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability.
Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-CENP-A K124R mutant suggesting that ubiquitylation at a different lysine is induced because of the EYFP tagging in the CENP-A K124R mutant protein. Lysine 306 (K306) ubiquitylation in EYFP-CENP-A K124R was successfully identified, which corresponds to lysine 56 (K56) in CENP-A through mass spectrometry analysis. A caveat is discussed in the use of GFP/EYFP or the tagging of high molecular weight protein as a tool to analyze the function of a protein. Current technical limit is also discussed for the detection of ubiquitylated bands, identification of site-specific ubiquitylation(s), and visualization of ubiquitylation in living cells or a specific single cell during the whole cell cycle.
The method of mass spectrometry analysis presented here can be applied to human CENP-A protein with different tags and other centromere-kinetochore proteins. These combinatory methods consisting of several assays/analyses could be recommended for researchers who are interested in identifying functional roles of ubiquitylation.

Mass Spectrometry Analysis to Identify Ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A EYFP-CENP-A

CENP-A ubiquitylation is an important requirement for CENP-A deposition at the centromere, inherited through dimerization between cell division, and indispensable to cell viability. Here we describe mass spectrometry analysis to identify ubiquitylation of EYFP-tagged CENP-A (EYFP-CENP-A) protein.

Анализ масс-спектрометрии для выявления повсеместного ания метеоуожего тега CENP-A (EYFP-CENP-A)

Studying the structure and the dynamics of kinetochores and centromeres is important in understanding chromosomal instability (CIN) and cancer ...

A Murine Model of a Burn Wound Reconstructed with an Allogeneic Skin Graft

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and require surgical debridement and skin grafting. Successful integration of the donor graft into a recipient wound bed depends on timely recruitment of immune cells, robust angiogenic response and new extracellular matrix formation. The development of novel therapeutic agents, which target some key processes involved in wound healing, are hindered by the lack of reliable preclinical models with optimized objective assessment of wound closure. Here, we describe an inexpensive and reproducible model of experimental full thickness burn wound reconstructed with an allogeneic skin graft. The wound is induced on the dorsum surface of anaesthetized inbred wild type mice from the BALB/C and SKH1-Hrhr backgrounds. The burn is produced using a brass template measuring 10 mm in diameter, which is preheated to 80 &#176;C and delivered at a constant pressure for 20 s. Burn eschar is excised 24 hours after the injury and replaced with a full thickness graft harvested from the tail of a genetically similar donor mouse. No specialized equipment is required for the procedure and surgical techniques are straightforward to follow. The method may be effortlessly implemented and reproduced in most research settings. Certain limitations are associated with the model. Due to technical difficulties, the harvest of thinner split thickness skin grafts is not possible. The surgical method we describe here allows for the reconstruction of burn wounds using full thickness skin grafts. It may be used to carry out preclinical therapeutic testing.

The aim of this study was to develop a murine model of burn wound healing. A thermal burn was induced on the dorsal skin of mice using a preheated brass template. Burned tissue was debrided and overlaid with a skin graft harvested from the tail of a genetically similar donor mouse.

Мурин Модель ожога раны реконструирована с аллогенной кожи трансплантата

Trivial superficial wounds heal without complications by primary intention. Deep wounds, such as full thickness burns, heal by secondary intention and ...

A Modified Surgical Model of Hind Limb Ischemia in ApoE-/- Mice using a Miniature Incision

The purpose of this study is to introduce and evaluate a modified surgical approach to induce acute ischemia in mice that can be implemented in most animal laboratories.&#160;Contrary to the conventional approach for double ligation of the femoral artery (DLFA), a smaller incision on the right inguinal region was made to expose the proximal femoral artery (FA) to perform DLFA. Then, using a 7-0 suture, the incision was dragged to the knee region to expose the distal FA. Magnetic resonance imaging (MRI) on bilateral hind limbs was used to detect FA occlusion after the surgery. At 0, 1, 3, 5, and 7 days after the surgery, functional recovery of the hind limbs was visually assessed and graded using the Tarlov scale. Histologic evaluation was performed after euthanizing the animals 7 days after DLFA. The procedures were successfully performed on the right leg in ten ApoE-/- mice, and no mice died during subsequent observation. The incision sizes in all 10 mice were less than 5 mm (4.2 &#177; 0.63 mm). MRI results showed that FA blood flow in the ischemic side was clearly blocked. The Tarlov scale results demonstrated that hind limb function significantly decreased after the procedure and slowly recovered over the following 7 days. Histologic evaluation showed a significant inflammatory response on the ischemic side and reduced microvascular density in the ischemic hind limb. In conclusion, this study introduces a modified technique using a miniature incision to perform hind limb ischemia (HLI) using DLFA.

A Modified Surgical Model of Hind Limb Ischemia in ApoE-/- Mice using a Miniature Incision

This article demonstrates an efficient surgical approach to establish acute ischemia in mice with a small incision. This approach can be applied by most research groups without any laboratory upgrades.

Модифицированная хирургическая модель ишемии задних конечностейу мышей с использованием миниатюрного разреза

The purpose of this study is to introduce and evaluate a modified surgical approach to induce acute ischemia in mice that can be implemented in most ...