Пошаговое руководство по посеву и дифференцировке культур мезенхимальных стволовых клеток для характеризации

Для начала поместите мезенхимальные стволовые клетки в колбы Т-75, чашки диаметром 100 мм и два 48-луночных планшета для всех экспериментов. Добавьте 200 микролитров 10%-ной питательной среды MSC в лунки 48-луночных планшетов. Когда монослой клеток достигнет 90% конфлюенции, замените существующие среды обозначенных контрольных лунок на 2%-ную сыворотку.

Добавьте дифференцировочные среды адипогенной или остеогенной линии в последние две лунки, помеченные как Test. В тот же день трипсинизируйте сливающуюся 100 мм чашку и переложите клеточную суспензию в две помеченные 15-миллилитровые пробирки. Центрифугируйте пробирки при давлении 300 x g в течение шести минут.

Затем нанесите пипетку по 2 миллилитра соответствующей среды в контрольную и пробирки. Поместите пробирки со свободными крышками в инкубатор при температуре 37 градусов Цельсия под содержанием углекислого газа 5% на 21 день с заменой среды каждые три дня. SHED были охарактеризованы с помощью стандартных иммунофлуоресцентных анализов, показывающих экспрессию виментина, актиновых филаментов и ядер, окрашенных DAPI.

Краткосрочные анализы роста клеток показали увеличение скорости пролиферации со второго по восьмой день. Анализ колониеобразующих единиц и окрашивание кристаллическим фиолетовым цветом подтвердили колониеобразующую способность SHED через 14 дней.