Начните с открытия митохондриальных изображений на рисунке J2.1.0. Разделяйте стопки позиций в зависимости от поля зрения, перейдя в строку меню и нажав на «Изображение». Затем перейдите в раздел «Дублировать», «Введите фрагмент» или «Номер кадра» и нажмите «ОК». Далее, нарисуйте область интереса вокруг клетки с помощью инструмента «Свободное выделение».
Чтобы запустить макрос, откройте Image J, перейдите в строку меню и нажмите «Плагины», «Макросы» и «Выполнить». Затем выберите «Очистить фон» и «Сохранить макрос» изображения. Чтобы определить размер в пикселях и глубину вокселя, откройте Изображение J и выберите Изображение.
Откройте строку меню, выберите «Изображение» и нажмите «Свойства». Определив размер пикселя и глубину воксела, нарисуйте область интереса, охватывающую всю ячейку, с помощью инструмента «Свободное выделение», чтобы включить всю ячейку во все 15 кадров. Перейдите в строку меню, нажмите «Плагины», «Макросы», выберите «Очистить фон» и «Сохранить макрос изображения».
Выберите нужную папку для сохранения и нажмите «Сохранить», чтобы сохранить файл в формате TIFF. Затем создайте три основные папки под названием «Все дорожки», «Перинуклеарные дорожки» и «Телеядерные дорожки». Создайте пронумерованную подпапку для каждого изображения для обработки в каждой основной папке, начиная с одной.
Добавьте копию двух дополнительных файлов рутинной оптимизации в каждую папку с изображением. Чтобы определить или изменить версию файла коврика по умолчанию, перейдите на вкладку «Главная» в разделе «Окружающая среда» и нажмите «Настройки». Затем выберите MATLAB.
Откройте программное обеспечение MATLAB на компьютере, перейдите в строку меню, выберите приложения и откройте Mitometer. Выберите Start 3D и установите размер пикселя 0,1395089 микрометра, время между кадрами — 15 секунд, количество z-плоскостей — 8, а осевое расстояние между z-плоскостями — 0,418809 микрометра. Выберите изображения для ввода.
Теперь перейдите в боковое меню «Митометр», выберите «Изображение» и нажмите «Выбрать выделенное». Перейдите в строку меню митометра, выберите «Выбрать треки», а затем «Просмотры треков». Затем выберите один из вариантов «Все треки», «Телеядерный» или «Перинуклеарный».
Сохраните результаты в текстовый файл, выбрав Сохранить в txt, и распакуйте файлы результатов в созданные папки. Подготовьте файл randomization xlsx, в котором содержится ключ для кодирования изображения. Вставьте последовательность последовательных целых чисел, начиная с единицы, в столбец A, заполните столбец B буквенно-цифровыми символами, которые составляют аналитические переменные.
Дважды щелкните по исполняемому файлу mlx, введите количество папок, нажмите «Указать каталог папки» и выберите «Сохранить каталог». Выберите имя таблицы в выходном файле и нажмите кнопку Выполнить. После этого проведите необходимый статистический анализ.
Представлены репрезентативные изображения митохондрий после лечения, соответствующие поверхностные графики и автоматизированная сегментация. Значительное уменьшение средней длины митохондрий наблюдалось в клетках, обработанных AM580. Площадь митохондриальной поверхности значительно уменьшалась в клетках, обработанных AM580 и BMS493.
Нормализованная по объему митохондрий интенсивность ТМРМ показала достоверное снижение в клетках, обработанных ретиноевой кислотой и CH55.
