Для начала разжижайте собранные образцы человеческой спермы и тщательно гомогенизируйте их с помощью пипетки Пастера. Затем переложите 100 микролитров образца спермы в центрифужную пробирку. В эту пробирку добавьте 900 микролитров красящего раствора.
Многократно перемешайте пипеткой и тщательно гомогенизируйте реагент. Поместите пробирку на двухмерный шейкер для непрерывного перемешивания при 200 об/мин в течение 30 минут при комнатной температуре. В ожидании реакции окрашивания приступают к анализу концентрации сперматозоидов с помощью системы CASA.
После включения системы дважды щелкните значок SCAscope, чтобы открыть прикладное программное обеспечение. Затем тщательно перемешайте образец спермы с помощью пипетирования и перенесите до 10 микролитров образца в счетную камеру SCA. Подождите 60 секунд, пока образец спермы не перестанет дрейфовать.
Затем поместите счетную камеру SCA на держатель образца системы CASA. В прикладном программном обеспечении введите информацию о пациенте в диалоговом окне. Нажмите кнопку «Пуск», чтобы записать концентрацию сперматозоидов в сперме.
Затем остановите шейкер, когда 30-минутная реакция окрашивания завершится. Перед анализом перемешайте содержимое центрифужной пробирки с помощью пипетирования. Перелейте до 10 микролитров реагента в камеру для подсчета сперматозоидов и накройте ее специальной стеклянной крышкой.
Поместите камеру для подсчета сперматозоидов на микроскопический столик и включите оптический микроскоп. Затем подождите 60 секунд, пока образец реагента не прекратит дрейфовать. Под объективом с 10-кратным увеличением отрегулируйте курс и ручки точной регулировки для выбора поля зрения.
Затем переключитесь на объектив 40x и наблюдайте за сперматозоидами и пероксидазными положительными лейкоцитами. Используйте электронную систему счетчика, чтобы отсчитать не менее 200 сперматозоидов и количество пероксидазных положительных лейкоцитов коричневого цвета. С помощью этой методики в образце спермы окрашивали пероксидазные положительные лейкоциты.
Пероксидазоположительные лейкоциты имели коричневый оттенок, контрастирующий с неокрашенными, обычными, круглыми клетками.
