Для начала возьмите заранее приготовленную формулу и фиксированный и залитый парафином образец ткани рака легких. Выдерживайте его при температуре 65 градусов Цельсия в течение пяти минут. Выполните обезвоживание путем погружения предметного стекла в ксилол, а затем в растворы этанола с уменьшающейся концентрацией.
Затем погрузите горки в стерилизованную воду три раза по одной минуте каждый. Для извлечения антигена поместите предметное стекло в коробку для окрашивания и ремонта. Заполните его иммуногистохимическим буфером восстановления антигена рабочим раствором pH шесть или девять.
Накройте коробку крышкой, и разогрейте ее в микроволновой печи в течение восьми минут на 100% мощности. Затем охладите горку до комнатной температуры. Накройте ткань блокирующим раствором, а затем выдержите во влажной камере при комнатной температуре в течение 10 минут.
После удаления блокирующего раствора накройте предметное стекло рабочим раствором первичного антитела, и поместите его во увлажненную камеру. Затем инкубируйте эту камеру в течение одного часа при температуре 37 градусов Цельсия. Далее промойте предметное стекло промывочным буферным рабочим раствором в течение двух минут.
Добавьте полимерную пероксидазу хрена непосредственно по капле на предметное стекло и инкубируйте его в течение 15 минут при комнатной температуре. После промывки предметного стекла добавьте рабочий раствор флуорофора непосредственно по капле на предметное стекло и выдержите его в течение 10 минут при комнатной температуре. После того, как предметное стекло будет вымыто, проведите лечение в микроволновой печи, как было показано ранее.
Когда предметное стекло остынет до комнатной температуры, промойте его три раза двойной дистиллированной водой по одной минуте каждый. Затем опустите предметное стекло в рабочий раствор промывочного буфера на две минуты и выполните инкубацию антител, пероксидазу хрена и добавление флуорофора, как показано на рисунке. Для окрашивания ядра клетки накройте предметное стекло рабочим раствором DAPI и выдержите его во влажной камере в течение пяти минут при комнатной температуре.
Затем промойте горки дважды дистиллированной водой три раза, по одной минуте каждый. Удалите капли воды с горки. Добавьте от 10 до 20 микролитров антифлуоресцентного гасителя на предметное стекло и закройте его покровным стеклом микроскопа.
