Подготовка плюрипотентных стволовых клеток мышей (мПСК) к трансфекции

Для приготовления покрытой желатином 24-луночной пластины добавьте 200 микролитров 0,2%-ного раствора желатина в каждую лунку. Аккуратно встряхните пластину, чтобы равномерно распределить раствор и дать лункам покрыться при комнатной температуре. Через 15 минут с помощью вакуумного аспиратора осторожно удалите остатки желатина из лунок.

Добавьте в каждую лунку по 0,5 миллилитра свежеприготовленной среды NBIL. И поместите тарелку в инкубатор для тканевых культур для предварительного прогревания. Выложите 30 миллилитров промывочного материала в коническую трубку объемом 50 миллилитров.

Отсадите среду из чашки для культивирования тканей мЭСК и добавьте необходимое количество среды для отслоения клеток. Через три-пять минут проводите пипетку вверх и вниз от 15 до 20 раз с помощью пипетки P1 000. Понаблюдайте за клетками под микроскопом.

Чтобы получить одноклеточную суспензию, перенесите клеточную суспензию в 50-миллилитровую пробирку, содержащую промывочный материал. Центрифугируйте суспензию при 300G в течение пяти минут при комнатной температуре и отсасывайте промывочную среду. Суспендируйте гранулу примерно в 300 микролитрах промывочного материала.