Разработка и применение рапамицин-регулируемых тирозинфосфатаз

Наша работа сосредоточена на разработке средств, регулирующих активность тирозинфосфатаз. Мы применили регулируемую рапамицином систему к нескольким фосфатазам и показали, что она обеспечивает специфическую и временную регуляцию нашего белка, представляющего интерес. Мы стремились определить морфологические изменения, индуцированные активацией фосфатазы SHIP-2.

Инструмент RapR позволил нам определить переходные эффекты активации фосфатазы в клетках, и мы определили сложные специфические последующие эффекты фосфатазы, участвующей в распространении и миграции клеток. Кроме того, мы определили доменно-обусловленное поведение одной и той же фосфатазы. Это способствовало нашему пониманию механизмов фосфатазы в регуляции морфодинамики клеток и передачи сигналов вниз по потоку.

Наш инструмент RapR предлагает возможность специфической и временной регуляции интересующей фосфатазы. После встраивания в фосфатазу домен iFKBP действует как аллостерический переключатель, который, будучи связанным с рапамицином, восстанавливает активность фосфатазы, действуя как переключатель. Мы также можем использовать систему, регулируемую рапамицином, для реконструкции сигнальных комплексов.

Наши результаты с использованием инструмента RapR открыли дверь к определению влияния интерактатома SHIP-2 на его способность регулировать активность клеток. Мы обнаружили, что SHIP-2 в связывании с доменом SH2 имеет решающее значение для ретракции клеток. С помощью инструмента RapR мы можем дополнительно выяснить, какие связывающие партнеры могут нести ответственность за этот регламент.