Авторы хотели бы выразить признательность финансовой поддержке национального здравоохранения и медицинских исследований (NHMRC) Австралии (грантового проекта ID: 632512). Луиз Данн был поддержан NHMRC Ранняя карьера стипендий и Кристина Bursill по Национальной стипендий Фонда Сердца развития карьеры.

1. Подготовка шины и окклюзионные соусов <ol><li> Краткие сведения 10 мм круги на 0,5 мм листа толщиной от силикона и использовать ножницы или дерматома для создания силиконовых дисков. </li><li> Центр 5 мм биопсии удар в середине 10 мм круга и сильно прижать для создания отверстия в форме &quot;пончика&quot;, как диск, который будет использоваться в качестве шины. </li><li> Краткие сведения 10 мм круги на прозрачной герметичной повязкой, таких как Opsite и используйте ножницы, чтобы создать круговую повязку. </li></ol> 2. Экспериментальные животные <ol><li> Получить животных Комитета по этике утверждения для всех экспериментов, которые будут выполняться. </li><li> Использование 8-недельных (22-26 грамм) самцам мышей линии C57BL/6J с коммерческой заводчика (например, The Jackson Laboratories). </li><li> Держите мышей в стандартных условиях 21 ° С и 12 ч циклом свет-темнота со свободным доступом к пище и воде. </li><li> (Необязательно): Диабет может быть вызвано от 6 до 7 недель мышей путем болюсной внутрибрюшинного Injeие 165 мг / кг стрептозотоцин (цитрат в буфере, рН 4,5), с гипергликемией подтверждается регулярными мониторинга глюкозы в крови (глюкометр AccuChek). Диабетических мышей может иметь полиурия и так их залегания, возможно, потребуется менять чаще для устранения влажности и их веса следует пристально следить. </li></ol> 3. Анестезия и оперативную подготовку <ol><li> Общей анестезии с использованием 5% изофлуран в 100% кислорода (расход 1 л / мин) и поддерживают анестезии с использованием 1-3% изофлуран. </li><li> Убедитесь глубоких рефлексов педали мыши подавляются и поместите курсор в положении лежа. </li><li> Подготовка оперативного регионе путем удаления мех с садовыми ножницами от основания шеи до 3 см дальше вниз и назад между двумя лопатками. </li><li> Свет приложение для депиляции Крем можно наносить не более чем на 2 мин. Мокрый тампоны марли можно использовать, чтобы обеспечить все оставшиеся сливки и меха удаляются. </li><li> Протирать кожуспиртовым тампоном и двух приложений на 10% повидон-йод (Бетадин) и драп мыши. </li></ol> 4. Удаление и шинирование ран <ol><li> Схематическое изображение мышиного ранозаживляющим модель представлена ​​на рисунке 1. </li><li> С помощью стерильной 4 мм дерматома очертить две круглые образцы для ран по обе стороны от средней линии мыши на уровне плеч (см. фиг.2а-2b). </li><li> Использование зубчатые щипцы для подъема кожи в середине контура и диафрагмы ножницами, чтобы создать полную толщину раной, который проходит через подкожные ткани (фиг. 2c, 2d), в том числе подкожной клетчатки carnosus (рис. 2е), и акцизные круглый кусок ткани. </li><li> Повторите этот процесс для ран по другую сторону от средней линии (рис. 2е). </li><li> Удалить пластик защитного покрытия с каждой стороны шины силикона. </li><li> Применить cyanoacrylaТе клея (например, супер клей или клей Krazy) на одной стороне шины силикона. </li><li> Центр шины на рану (рис. 2 г) и якорь шину с прерван 6-0 швами нейлоном для обеспечения позиционирования (рис. 2 часа). </li><li> Повторите шинированием процесса на другие раны. </li><li> При необходимости в этот момент времени, применять терапевтический тестируемого соединения (до 100 мкл) в одну рану (рис. 2г) и управления транспортным средством в другой. </li><li> Закрыть рану с прозрачной герметичной повязкой (например, Opsite) (рис. 2j-2k). </li><li> Правителя находится ниже шины и микрофотография приняты (Рисунок 2 л). </li></ol> 6. Лечение послеоперационной <ol><li> Carprofen (5 мг / кг) вводят один раз в день с помощью подкожной инъекции для послеоперационной боли. </li><li> После операции животным индивидуально клетке и поддерживается на тепло мАТС до полного восстановления. </li><li> Монитор животных два раза в день для проявления боли и потеря веса. Мы не наблюдали валового поведенческие проявления боли или потери веса. </li></ol> 7. Измерение ран и лечение <ol><li> Рана может быть измерена в день. </li><li> Общей анестезии с использованием 5% изофлурана газа (скорость потока 1 л / мин), а затем обеспечить глубокую сенсорные рефлексы мыши подавляются использованием 1-3% изофлурана. </li><li> Аккуратно отогните окклюзионной повязки пинцетом. </li><li> Использование хирургических суппортами для измерения диаметра раны. Мы возьмем среднее из трех измерений по X, Y и Z оси (рис. 2а-2м), а также микрофотографии для дальнейшего использования (рис. 2р). </li><li> Дополнительно: В это время животное может быть оценена для перфузии крови с помощью лазерного доплеровского томографа (рис. 2д). </li><li> Повторное применение терапевтических соединения и управления транспортным средством, может быть перформансаМед в этой точке. </li><li> Чистой прозрачной герметичной повязкой затем применяются снова, и животных, содержащихся в тепле, пока полностью не восстановлено. </li><li> Обратите внимание: если шины не обеспечена должным образом рана будет легко договора (рис. 2г). </li></ol> 8. Гистологический анализ <ol><li> Эвтаназии мышей через 10 дней с передозировки наркоза. </li><li> Использование щипцов и лезвие скальпеля удалить швы и тщательно очистить от шины. </li><li> Использование диафрагмой ножницами, чтобы создать широкий, полное удаление вокруг и под области раны и инкубировать ткани в 4% параформальдегид в фосфатном буферном растворе (PBS) при 4 ° С в течение ночи. </li><li> Передача ткани до 17% сахарозы в растворе PBS в течение 24 ч при 4 ° С, затем удалите излишки раствора посредством легкого внимательно на ткани и место в ОСТ соединения и заморозить при температуре -80 ° C. </li><li> Гематоксилином и эозином может быть использован для визуализации структуры раны и эпителиального просвета. Neovascularisation можно оценить с помощью иммуногистохимического анализа, чтобы определить количество капилляров (с использованием фактор фон Виллебранда). </li></ol>

<ol>
	<li>Sen, C. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Human+skin+wounds:+a+major+and+snowballing+threat+to+public+health+and+the+economy.">Human skin wounds: a major and snowballing threat to public health and the economy.</a> Wound Repair. 17, 763-771 (2009).</li><li>Sen, C. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+healing+essentials:+let+there+be+oxygen.">Wound healing essentials: let there be oxygen.</a> Wound Repair Regen. 17, 1-18 (2009).</li><li>Gurtner, G. C., Werner, S., Barrandon, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound+repair+and+regeneration.">Wound repair and regeneration.</a> Nature. 453, 314-321 (2008).</li><li>Lindblad, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Considerations+for+selecting+the+correct+animal+model+for+dermal+wound-healing+studies.">Considerations for selecting the correct animal model for dermal wound-healing studies.</a> J. Biomater. Sci. Polym. Ed. 19, 1087-1096 (2008).</li><li>Grose, R., Werner, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Wound-healing+studies+in+transgenic+and+knockout+mice.">Wound-healing studies in transgenic and knockout mice.</a> Mol. Biotechnol. 28, 147-166 (2004).</li><li>Reid, R. R., Said, H. K., Mogford, J. E., Mustoe, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+future+of+wound+healing:+pursuing+surgical+models+in+transgenic+and+knockout+mice.">The future of wound healing: pursuing surgical models in transgenic and knockout mice.</a> J. Am. Coll. Surg. 199, 578-585 (2004).</li><li>Fang, R. C., Mustoe, T. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+wound+healing:+utility+in+transgenic+mice.">Animal models of wound healing: utility in transgenic mice.</a> J. Biomater. Sci. Polym. Ed. 19, 989-1005 (2008).</li><li>Wong, V. W., Sorkin, M., Glotzbach, J. P., Longaker, M. T., Gurtner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Surgical+approaches+to+create+murine+models+of+human+wound+healing.">Surgical approaches to create murine models of human wound healing.</a> J. Biomed. Biotechnol. 2011, 969618 (2011).</li><li>Galiano, R. D., Michaels, J. t., Dobryansky, M., Levine, J. P., Gurtner, G. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Quantitative+and+reproducible+murine+model+of+excisional+wound+healing.">Quantitative and reproducible murine model of excisional wound healing.</a> Wound Repair. 12, 485-492 (2004).</li><li>Galiano, R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Topical+vascular+endothelial+growth+factor+accelerates+diabetic+wound+healing+through+increased+angiogenesis+and+by+mobilizing+and+recruiting+bone+marrow-derived+cells.">Topical vascular endothelial growth factor accelerates diabetic wound healing through increased angiogenesis and by mobilizing and recruiting bone marrow-derived cells.</a> The American Journal of Pathology. 164, 1935-1947 (2004).</li><li>Thangarajah, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+molecular+basis+for+impaired+hypoxia-induced+VEGF+expression+in+diabetic+tissues.">The molecular basis for impaired hypoxia-induced VEGF expression in diabetic tissues.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 106, 13505-13510 (2009).</li><li>Raza, A., Bayles, C., Biebel, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Investigation+of+Bacterial+Growth+and+Moisture+Handling+Properties+of+Transparent+Dressings:+3M+Tegaderm+Transparent+Dressing,+3M+Tegaderm+HP+Transparent+Dressing,+and+Opsite+IV3000+Transparent+Dressing.">Investigation of Bacterial Growth and Moisture Handling Properties of Transparent Dressings: 3M Tegaderm Transparent Dressing, 3M Tegaderm HP Transparent Dressing, and Opsite IV3000 Transparent Dressing.</a> Smith and Nephew Report. , (1998).</li><li>Chung, T. Y., Peplow, P. V., Baxter, G. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Testing+photobiomodulatory+effects+of+laser+irradiation+on+wound+healing:+development+of+an+improved+model+for+dressing+wounds+in+mice.">Testing photobiomodulatory effects of laser irradiation on wound healing: development of an improved model for dressing wounds in mice.</a> Photomed. Laser Surg. 28, 589-596 (2010).</li></ol>

Авторы не имеют ничего раскрывать.

Это экспериментальный мышиной модели заживления кожной раны. Важной особенностью данной модели является использование силиконовых шин, чтобы предотвратить сокращение раны, так что реэпителизация и новообразование ткани может происходить, что делает его похож на процесс, который про...

Ухудшение заживления ран отвечает за значительной заболеваемости и смертности во всем мире, это особенно актуально для страдающих сахарным диабетом 1,2. В организме человека, заживление ран континуум процессов, в которых имеется значительное перекрытие 3. Сразу же после ранения, воспалительные процессы инициируются. Воспалительные клетки высвобождают факторы, которые стимулируют процессы клеточной пролиферации, миграции и ангиогенез. После повторной эпителизации и формирования новых тканей есть фазы ремоделирования, что влечет за собой как апоптоз и реорганизации матрицы белки, такие как коллаген. Сложность заживления ран в настоящее время невозможно воспроизвести в пробирке, и это требует использования животных моделях. К настоящему времени заживления ран исследований были ограничены больших моделей животных, таких как свиньи, чтобы гарантировать, что процесс заживления эквивалентны и сравнимы с человека. Тем не менее, с использованием больших AnimaLs для таких исследований может быть трудно дома и не всегда практичны 4. Мышь лаборатории представляет собой экономичный животной модели, которые могут быть легко генетически модифицированных для механистической исследование 5-7. Тем не менее, мышиный раны заживают по-разному к человеку, в первую очередь в связи с процессом сжатия 8. Это отчасти, в связи с обширным подкожным слоем поперечно-полосатых мышц называется подкожной клетчатки carnosus, что в значительной степени отсутствует в организме человека. У мышей этой мышцы слой позволяет коже перемещаться независимо от глубоких мышц и отвечает за быстрое сжатие кожи ранения следующее. Чтобы преодолеть это ограничение, мышиных заживление раны может быть адаптирован для репликации человеческих заживление раны за счет использования шины (рис. 1) 8,9. В этом видео нам демонстрируют шинируются мышиной модели рану, которая устраняет контракции раны и более тесно приближает человека процессы повторного epithelializaния и формирования новой ткани. В этой модели два полную толщину вырезами, которые включают в подкожной клетчатки carnosus создаются на тыльной поверхности, по одному с каждой стороны от средней линии мыши. Шина помещается силиконовый вокруг раны с помощью клея и шину затем фиксируется узловыми швами. Каждая мышь действует как свой собственный контроль, с одной раны, получающих лечение и другие управления транспортным средством, тем самым сокращения численности животных. После местного применения прозрачный окклюзионной повязки. Повязка может быть удален, если требуется дальнейшая местного применения и / или измерение области раны 10,11. По завершении экспериментов закрытия раны, морфологические архитектуры и степень неоваскуляризации может быть оценена с помощью иммуногистохимии. Этот экономичный и легко выполнить модель также может быть использована для оценки заживления ран в контексте сахарный диабет или другие pathophysiologies.

<table border="0">
<tbody>
 <tr>
 <td>Name of Reagent/Material</td>
 <td>Company</td>
 <td>Catalog Number</td>
 <td>Comments</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Press-to-seal silicone sheeting 0.5 mm thick</td>
 <td>Invitrogen</td>
 <td>P18178</td>
 <td>Cut into "donuts" with external diameter of 1cm external, 0.5 cm internal diameter</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Biopsy punch 5 mm</td>
 <td>Steifel</td>
 <td>BC-B1-0500</td>
 <td>To outline wound area to be excised</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Vannas scissors 8.5 cm curved</td>
 <td>World Precision Instruments </td>
 <td>501232</td>
 <td>For wound incision and excision</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Dumonte #7b forceps, 11 cm</td>
 <td>World Precision Instruments</td>
 <td>501302</td>
 <td>To grip skin when creating incision and excising skin </td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Graefe forceps, serrated 10cm</td>
 <td>World Precision Instruments</td>
 <td>14142</td>
 <td>To help attach silicone splint to skin</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Needle holder, smooth jaws, curved, 12.5 cm</td>
 <td>World Precision Instruments</td>
 <td>14132</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Malis forceps, smooth, straight, 12 cm</td>
 <td>Codman and Shurtleff, Inc (J&amp;J)</td>
 <td>80-1500</td>
 <td>To suture the silicon rings to the skin</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Ruler, 0.5 mm gradation</td>
 <td>n/a</td>
 <td></td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Calipers 0.25 mm gradation</td>
 <td>Duckworth and Kent</td>
 <td>9-653</td>
 <td>To measure wound area</td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Opsite FlexiFix transparent adhesive film. 10 cm x 1 m</td>
 <td>Smith &amp; Nephew</td>
 <td>66030570</td>
 <td></td>
 </tr>
 <tr>
 <td>Rimadyl (Carprofen)</td>
 <td>Pfizer</td>
 <td>462986</td>
 <td></td>
 </tr>
 </tbody>
</table>

murine model of wound healing

Заживление ран и ремонта наиболее сложных биологических процессов, происходящих в жизни человека. После травмы, множественные биологические пути активизируются. Ухудшение заживления ран, которое происходит у больных сахарным диабетом, например, может привести к серьезным неблагоприятным последствиям, например, ампутации. Существует, следовательно, все большее толчком для развития новых препаратов, которые способствуют заживлению ран. Тестирование этих была ограничена большой модели на животных, таких как свиньи, которые часто являются непрактичными. Мыши являются идеальным доклинической модели, так как они экономичны и поддается генетической манипуляции, что позволяет механистической расследования. Тем не менее, заживления ран у мышей в корне отличается от людей, как это в первую очередь происходит через сокращение. Наши мышиной модели преодолевает это путем включения шины вокруг раны. По шинированием раны, процесс восстановления, то в зависимости от эпителизации, клеточную пролиферацию и ангиогенез, которая тесно зеркалобиологические процессы человека заживление ран. Несмотря на то, требующих согласованности и заботы, это мышиной модели не задействованы сложные хирургические методы и позволяет надежное тестирование перспективных агентов, которые могут, например, стимулировать ангиогенез или подавлять воспаление. Кроме того, каждая мышь действует как своим собственным контролем в виде двух ран готовят, позволяя применение обоих тестируемого соединения и управления транспортным средством на том же животном. В заключение мы демонстрируем практичный, легкий в освоении и надежная модель заживления раны, которая сопоставима с человека.

Кривая закрытия раны определяется путем вычисления среднего диаметра раны и выражения результатов в виде процента, т.е. 100 - (день 0 диаметр / диаметр день X). В этом эксперименте терапевтического соединения (или контрольный носитель) наносили ежедневно к ране. Терапевтического соеди...

Watch this Scientific Journal Video about Murine Model of Wound Healing at JoVE.com

Murine Model of Wound Healing

Мышиной модели кожной заживление ран, которые могут быть использованы для оценки терапевтических соединений в физиологических и патофизиологических условиях.

Мышиной модели заживления ран

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

Research

JoVE Journal

Medicine

63.1K Views.  The Heart Research Institute. Мышиной модели кожной заживление ран, которые могут быть использованы для оценки терапевтических соединений в физиологических и патофизиологических условиях.

Video: Murine Model of Wound Healing

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions preclinically. However, valid assessment of pathological alterations often requires histological analysis, and when performed ex vivo, necessitates death of the animal. Therefore in conventional experimental settings, intra-individual follow-up examinations are rarely possible. Thus, development of murine endoscopy in live mice enables investigators for the first time to both directly visualize the gastrointestinal mucosa and also repeat the procedure to monitor for alterations. Numerous applications for in vivo murine endoscopy exist, including studying intestinal inflammation or wound healing, obtaining mucosal biopsies repeatedly, and to locally administer diagnostic or therapeutic agents using miniature injection catheters. Most recently, molecular imaging has extended diagnostic imaging modalities allowing specific detection of distinct target molecules using specific photoprobes. In conclusion, murine endoscopy has emerged as a novel cutting-edge technology for diagnostic experimental in vivo imaging and may significantly impact on preclinical research in various fields.

Murine Endoscopy for In Vivo Multimodal Imaging of Carcinogenesis and Assessment of Intestinal Wound Healing and Inflammation

Small animal imaging techniques allow serial diagnostic examinations and therapeutic interventions in vivo. Recently, the scope of applications has significantly widened and currently includes assessment of colonic tumor development, wound healing and monitoring of inflammation. This protocol illustrates these diverse potential applications of murine endoscopy.

Мышиный Эндоскопия для<em&gt; В Vivo</em&gt; Мультимодальные изображений канцерогенеза и оценки кишечной заживления ран и воспаления

Mouse models are widely used to study pathogenesis of human diseases and to evaluate diagnostic procedures as well as therapeutic interventions ...

Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model

The propensity for chronic wounds in humans increases with ageing, disease conditions such as diabetes and impaired cardiovascular function, and unrelieved pressure due to immobility. Animal models have been developed that attempt to mimic these conditions for the purpose of furthering our understanding of the complexity of chronic wounds. The model described herein is a rat ischemic skin flap model that permits a prolonged reduction of blood flow resulting in wounds that become ischemic and resemble a chronic wound phenotype (reduced vascularization, increased inflammation and delayed wound closure). It consists of a bipedicled dorsal flap with 2 ischemic wounds placed centrally and 2 non-ischemic wounds lateral to the flap as controls. A novel addition to this ischemic skin flap model is the placement of a silicone sheet beneath the flap that functions as a barrier and a splint to prevent revascularization and reduce contraction as the wounds heal. Despite the debate of using rats for wound healing studies due to their quite distinct anatomic and physiologic differences compared to humans (i.e., the presence of a panniculus carnosus muscle, short life-span, increased number of hair follicles, and their ability to heal infected wounds) the modifications employed in this model make it a valuable alternative to previously developed ischemic skin flap models.

The rat, due to its size, availability, and rather docile behavior, has been utilized as a research model for many years. The goal of this protocol is to utilize the rat as an ischemic skin wound healing model to provide valuable insight into the pathophysiology of chronic wounds.

Демонстрация Крыса ишемической кожной раны модели

The propensity for chronic wounds in humans increases with ageing, disease conditions such as diabetes and impaired cardiovascular function, and ...

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell (ASC) Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients with impeded blood flow or with large wounds might be prolonged. Cell-based therapies have appeared as a new technique for the treatment of diabetic ulcers, and cell-sheet engineering has improved the efficacy of cell transplantation. A number of reports have suggested that adipose-derived stem cells (ASCs), a type of mesenchymal stromal cell (MSC), exhibit therapeutic potential due to their relative abundance in adipose tissue and their accessibility for collection when compared to MSCs from other tissues. Therefore, ASCs appear to be a good source of stem cells for therapeutic use. In this study, ASC sheets from the epididymal adipose fat of normal Lewis rats were successfully created using temperature-responsive culture dishes and normal culture medium containing ascorbic acid. The ASC sheets were transplanted into Zucker diabetic fatty (ZDF) rats, a rat model of type 2 diabetes and obesity, that exhibit diminished wound healing. A wound was created on the posterior cranial surface, ASC sheets were transplanted into the wound, and a bilayer artificial skin was used to cover the sheets. ZDF rats that received ASC sheets had better wound healing than ZDF rats without the transplantation of ASC sheets. This approach was limited because ASC sheets are sensitive to dry conditions, requiring the maintenance of a moist wound environment. Therefore, artificial skin was used to cover the ASC sheet to prevent drying. The allogenic transplantation of ASC sheets in combination with artificial skin might also be applicable to other intractable ulcers or burns, such as those observed with peripheral arterial disease and collagen disease, and might be administered to patients who are undernourished or are using steroids. Thus, this treatment might be the first step towards improving the therapeutic options for diabetic wound healing.

Creation and Transplantation of an Adipose-derived Stem Cell ASC Sheet in a Diabetic Wound-healing Model

Adipose-derived stem cells (ASCs) are easily isolated and harvested from the fat of normal rats. ASC sheets can be created using cell-sheet engineering and can be transplanted into Zucker diabetic fatty rats exhibiting full-thickness skin defects with exposed bone and then covered with a bilayer of artificial skin.

Создание и пересадку жировой производные стволовых клеток (ASC) листа в диабетической заживление модели

Artificial skin has achieved considerable therapeutic results in clinical practice. However, artificial skin treatments for wounds in diabetic patients ...

Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice

Dental pulp is a vital organ of a tooth fully protected by enamel and dentin. When the pulp is exposed due to cariogenic or iatrogenic injuries, it is often capped with biocompatible materials in order to expedite pulpal wound healing. The ultimate goal is to regenerate reparative dentin, a physical barrier that functions as a "biological seal" and protects the underlying pulp tissue. Although this direct pulp-capping procedure has long been used in dentistry, the underlying molecular mechanism of pulpal wound healing and reparative dentin formation is still poorly understood. To induce reparative dentin, pulp capping has been performed experimentally in large animals, but less so in mice, presumably due to their small sizes and the ensuing technical difficulties. Here, we present a detailed, step-by-step method of performing a pulp-capping procedure in mice, including the preparation of a Class-I-like cavity, the placement of pulp-capping materials, and the restoration procedure using dental composite. Our pulp-capping mouse model will be instrumental in investigating the fundamental molecular mechanisms of pulpal wound healing in the context of reparative dentin in vivo by enabling the use of transgenic or knockout mice that are widely available in the research community.

We describe a step-by-step method of performing direct pulp capping on mice teeth for the evaluation of pulpal wound healing and reparative dentin formation in vivo.

Развитие прямого Pulp-укупорки модель для оценки пульпозного ранозаживляющим и Репаративная дентина Формирование у мышей

Dental pulp is a vital organ of a tooth fully protected by enamel and dentin. When the pulp is exposed due to cariogenic or iatrogenic injuries, it is ...

Microscopy Based Methods for the Assessment of Epithelial Cell Migration During In Vitro Wound Healing

Cell migration is a mandatory aspect for wound healing. Creating artificial wounds on research animal models often results in costly and complicated experimental procedures, while potentially lacking in precision. In vitro culture of epithelial cell lines provides a suitable platform for researching the cell migratory behavior in wound healing and the impact of treatments on these cells. The physiology of epithelial cells is often studied in non-confluent conditions; however, this approach may not resemble natural wound healing conditions. Disrupting the epithelium integrity by mechanical means generates a realistic model, but may impede the application of molecular techniques. Consequently, microscopy based techniques are optimal for studying epithelial cell migration in vitro. Here we detail two specific methods, the artificial wound scratch assay and the artificial migration front assay, that can obtain quantitative and qualitative data, respectively, on the migratory performance of epithelial cells.

Microscopy Based Methods for the Assessment of Epithelial Cell Migration During  In Vitro Wound Healing

This manuscript describes how incision-like lesions made on cultured epithelial cell monolayers conveniently model wound healing in vitro, allowing for imaging by confocal or laser scanning microscopy, and which can provide high-quality quantitative and qualitative data for studying both cell behavior and the mechanisms involved in migration.

Микроскопия на основе методов для оценки миграции эпителиальных клеток во время в Vitro заживление ран

Cell migration is a mandatory aspect for wound healing. Creating artificial wounds on research animal models often results in costly and complicated ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

Изометрические сократимости измерение верхней брыжеечной артерии мыши, с помощью проволоки миография

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

Corneal Epithelial Abrasion with Ocular Burr As a Model for Cornea Wound Healing

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to injury. In fact, the most common type of eye injury found in clinic is a corneal abrasion. Here, we utilize an ocular burr to induce an abrasion resulting in removal of the corneal epithelium in vivo on anesthetized mice. This method allows for targeted and reproducible epithelial disruption, leaving other areas intact. In addition, we describe the visualization of the abraded epithelium with fluorescein staining and provide concrete advice on how to visualize the abraded cornea. Then, we follow the timeline of wound healing 0, 18, and 72 h after abrasion, until the wound is re-epithelialized. The epithelial abrasion model of corneal injury is ideal for studies on epithelial cell proliferation, migration and re-epithelialization of the corneal layers. However, this method is not optimal to study stromal activation during wound healing, because the ocular burr does not penetrate to the stromal cell layers. This method is also suitable for clinical applications, for example, pre-clinical test of drug effectiveness.

This protocol describes a method to inflict an abrasion to the ocular surface of the mouse, and to follow the wound healing process thereafter. The protocol takes advantage of an ocular burr to partially remove the surface epithelium of the eye in anaesthetized mice.

Роговицы эпителиальных истиранию с глазной заусенцев, как модель для роговицы заживление ран

The murine cornea provides an excellent model to study wound healing. The cornea is the outermost layer of the eye, and thus is the first defense to ...

Ex Vivo Corneal Organ Culture Model for Wound Healing Studies

The cornea has been used extensively as a model system to study wound healing. The ability to generate and utilize primary mammalian cells in two dimensional (2D) and three dimensional (3D) culture has generated a wealth of information not only about corneal biology but also about wound healing, myofibroblast biology, and scarring in general. The goal of the protocol is an assay system for quantifying myofibroblast development, which characterizes scarring. We demonstrate a corneal organ culture ex vivo model using pig eyes. In this anterior keratectomy wound, corneas still in the globe are wounded with a circular blade called a trephine. A plug of approximately 1/3 of the anterior cornea is removed including the epithelium, the basement membrane, and the anterior part of the stroma. After wounding, corneas are cut from the globe, mounted on a collagen/agar base, and cultured for two weeks in supplemented-serum free medium with stabilized vitamin C to augment cell proliferation and extracellular matrix secretion by resident fibroblasts. Activation of myofibroblasts in the anterior stroma is evident in the healed cornea. This model can be used to assay wound closure, the development of myofibroblasts and fibrotic markers, and for toxicology studies. In addition, the effects of small molecule inhibitors as well as lipid-mediated siRNA transfection for gene knockdown can be tested in this system.

A protocol for an ex vivo corneal organ culture model useful for wound healing studies is described. This model system can be used to assess the effects of agents to promote regenerative healing or drug toxicity in an organized 3D multicellular environment.

Ex Vivo роговицы орган культуры модель для заживления ран исследований

The cornea has been used extensively as a model system to study wound healing. The ability to generate and utilize primary mammalian cells in two ...

Targeting Gray Rami Communicantes in Selective Chemical Lumbar Sympathectomy

Chemical lumbar sympathectomy (CLS) is a commonly used, minimally invasive procedure for the treatment of conditions including ischemic diseases of the lower extremities, hyperhidrosis, etc. It is commonly practiced to position the puncture needle tip in front of the anterior fascia of the psoas major muscle and inject the inactivating agent around the sympathetic trunk, which is defined as conventional CLS. Although relatively rare, ureteropelvic damage is the most frequently reported complication of conventional CLS and can cause serious harm to patients. We found that injecting the inactivating agent behind the anterior fascia, which only targets gray rami communicantes, helped achieve therapeutic efficacy in&#160;vasodilation, sweat reduction, and pain relief comparable to conventional CLS, and serious complications were largely reduced. We define this procedure as selective CLS. Here, we present a protocol of selective CLS. The precise needle tract and accurate evaluation of the spreading of the contrast agent are critical to ensure that the drug is injected behind the anterior fascia of the psoas major muscle. The needle tip is at approximately one-third the dividing line of the vertebral body in the lateral view of a lumbar X-ray. The contrast is mainly confined around the needle tip and spreads outward and downward along the psoas muscle fibers. In this way, the anterior fascia provides a natural barrier for the ureteropelvic area, and the psoas major muscle provides a natural barrier for the lumbar nerve root. There are several highlights of this article, including 1) a detailed description of the selective CLS procedures, 2) an explanation of the anatomical basis for the implementation of selective CLS, and 3) an explanation of the differences between selective and conventional CLS.

We present a protocol for selective chemical lumbar sympathectomy (CLS), which inactivates only gray rami communicantes and not the sympathetic trunk. Selective CLS can help achieve therapeutic efficacy in vasodilation, sweat reduction, and pain relief that are comparable to conventional CLS, and serious complications, particularly ureteropelvic damages, can be reduced.

Ориентация серый Рами Communicantes в выборочного химического поясничная симпатэктомия

Chemical lumbar sympathectomy (CLS) is a commonly used, minimally invasive procedure for the treatment of conditions including ischemic diseases of the ...

An Epithelial Abrasion Model for Studying Corneal Wound Healing

The cornea is critical for vision, accounting for about two-thirds of the refractive power of the eye. Crucial to the role of the cornea in vision is its transparency. However, due to its external position, the cornea is highly susceptible to a wide variety of injuries that can lead to the loss of corneal transparency and eventual blindness. Efficient corneal wound healing in response to these injuries is pivotal for maintaining corneal homeostasis and preservation of corneal transparency and refractive capabilities. In events of compromised corneal wound healing, the cornea becomes vulnerable to infections, ulcerations, and scarring. Given the fundamental importance of corneal wound healing to the preservation of corneal transparency and vision, a better understanding of the normal corneal wound healing process is a prerequisite to understanding impaired corneal wound healing associated with infection and disease. Toward this goal, murine models of corneal wounding have proven useful in furthering our understanding of the corneal wound healing mechanisms operating under normal physiological conditions. Here, a protocol for creating a central corneal epithelial abrasion in mouse using a trephine and a blunt golf club spud is described. In this model, a 2 mm diameter circular trephine, centered over the cornea, is used to demarcate the wound area. The golf club spud is used with care to debride the epithelium and create a circular wound without damaging the corneal epithelial basement membrane. The resulting inflammatory response proceeds as a well-characterized cascade of cellular and molecular events that are critical for efficient wound healing. This simple corneal wound healing model is highly reproducible and well-published and is now being used to evaluate compromised corneal wound healing in the context of disease.

Here, a protocol for creating a central corneal epithelial abrasion wound in the mouse using a trephine and a blunt golf club spud is described. This corneal wound healing model is highly reproducible and is now being used to evaluate compromised corneal wound healing in the context of diseases.

Модель истирания эпителия для изучения заживления ран роговицы

The cornea is critical for vision, accounting for about two-thirds of the refractive power of the eye. Crucial to the role of the cornea in vision is its ...