Этот метод обеспечивает доклинический поведенческий суррогат светобоязни, которая является основной жалобой пациентов с мигренью. Основным преимуществом этой техники является то, что обнаружение происходит автоматически, поэтому очень удобно. Также легкое отвращение и беспокойство можно отличить, проведя эти тесты.
В первый день включите прибор для анализа света/темноты. Установите интенсивность света на 27 000 люкс. Поместите темную вставку в светлую/темную камеру.
Откройте программное обеспечение для отслеживания и настройте новый протокол. В новом параметре протокола установите продолжительность 30 минут. В новом параметре анализа установите для корзин данных по длительности значение 300 секунд.
В новом параметре зоны выберите предопределенные зоны. Выберите два, а затем горизонтально. Проверьте, разделена ли камера на две зоны одинакового размера горизонтально для записи.
Перед тестированием приучайте мышей к комнате для тестирования в течение одного часа, поддерживая в комнате свет, чтобы не нарушить циркадный ритм мыши. Убедитесь, что все оборудование для анализа света / темноты включено, что позволяет мышам полностью акклиматизироваться в условиях испытательной комнаты. Выберите получить данные, введите идентификаторы мыши и запустите протокол.
Вытащите ящик за пределы кабины, ослабляющей звук, чтобы получить доступ к светло-темной камере и темной вставке. Аккуратно поместите мышь в зону освещения камеры и протолкните ящик внутрь кабинки. Убедитесь, что программное обеспечение немедленно обнаруживает мышь и начинает записывать активность.
Подождите, пока запись автоматически прекратится через 30 минут. Верните мышь в ее домашнюю клетку. Очистите камеру и темную вставку, используя одноразовые салфетки с запахом спирта, чтобы искоренить любые обонятельные сигналы, оставленные предыдущей мышью.
На четвертый день повторите все шаги, которые были выполнены в первый день. На седьмой день повторите шаги, выполненные на первый день, но только до привыкания мышей. После привыкания вводят мышам CGRP внутрибрюшинно.
Затем верните мышей в их домашние клетки. Через 30 минут возобновите протокол и запустите мышь в светло-темной камере, как упоминалось ранее. Очистите камеру и темную вставку, как описано выше.
На 10-й день повторите все шаги, выполненные в первый день. Включите аппарат и установите интенсивность света на 27 000 люкс. Откройте программное обеспечение для отслеживания и настройте новый протокол, как показано ранее.
В новых настройках зоны выберите параметр, за которым следует параметр по центру. Установите периферию как 3,97 сантиметра, а центр как 19,05 на 19,05 сантиметра. Приучите мышей к испытательной комнате, как было продемонстрировано ранее.
Вводят мышам с CGRP внутрибрюшинной. Верните мышей в их домашние клетки. Через 30 минут запустите протокол.
Вытащите выдвижной ящик за пределы кабины, ослабляющей звук, и осторожно поместите мышь в середину камеры открытого поля. Протолкните ящик внутрь кабинки. Отслеживайте поведение мыши в течение 30 минут, затем верните мышей в их домашние клетки.
Очистите аппарат, как показано ранее. Результаты показали, что внутрибрюшинная инъекция CGRP значительно уменьшала продолжительность времени, проведенного в светлой зоне в светло-темном анализе у черных мышей CD1 и C57 6J, но не влияла на время, проведенное мышами в центре в анализе открытого поля у мышей CD1 и C57 черных 6J. Лечение CGRP также увеличило количество времени, в течение которого мыши отдыхали в темной зоне, но не в светлой зоне как у CD1, так и у C57 черных мышей 6J.
Оптическая стимуляция нейронов в задних таламических ядрах, приводила к соответствующему уменьшению продолжительности пребывания мышей в светлой зоне в светло-темном анализе у мышей, которым вводили каналродопсин-2, по сравнению с контрольными вирусными введенными мышами. Увеличение времени отдыха в темной зоне, но не в светлой зоне наблюдалось также в случае каналродопсина-2, введенных мышами, по сравнению с контрольным вирусом, введенным мышами. Важно помнить, что при помещении мыши в светлую / темную камеру с мышью следует обращаться осторожно, чтобы избежать как можно большего стресса.
Этот метод проложит путь к изучению механизмов, лежащих в основе мигрени и других расстройств, связанных с светобоязнью, и проверит доклиническую эффективность потенциальных терапевтических средств.
