Основным преимуществом этой культовой техники является то, что вы можете получить девственные copepods, контролируя их опыт сопряжения и отслеживания их развития. Следующий метод анализа поведения может помочь контролируемых и воспроизводимых экспериментов на мат-охраны поведение Tigriopus copepods, которые являются общими зоопланктона в скалистых бассейнов прилива. Хотя эти методы могут дать представление о репродуктивном поведении Tigriopus, они также могут быть использованы, чтобы посмотреть, как генетические и экологические факторы влияют на физиологию и поведение этих copepods.
Для начала используйте пипетку Pasteur для сбора гравидных самок, несущих чистые оранжевые яйца из фондовой культуры. Промыть самок с чистой среде культуры через нежный пипетки. Далее поместите каждую самку в индивидуальный колодец из шести хорошо пластины клеточной культуры с чистой среде культуры.
Затем поместите тарелку в инкубатор, чтобы культуры женщин, пока они не выпустят яичные мешки. После того, как яичные мешки будут освобождены, используйте пипетку Pasteur, чтобы удалить самок из колодцев пластины. Как только животные на первой стадии copepodid или CI начинают появляться, использовать P-10 micropipette для их сбора.
Каждые два-три дня, контролировать скважины для расплавленных exuviae. После этого, секс животных, изучая их антенной морфологии. Чтобы правильно идентифицировать взрослых самок, убедитесь, что они уже расплавили пять exuviae в культуре колодцы, потому что различия в форме антенн между взрослыми женщинами и несовершеннолетними не являются заметно значительными в некоторых популяциях.
Выбрав животных соответствующей стадии и пола, кормите отобранных особей мелко молотой рыбной пищей. Пока животные едят, подготовьте 2 плиты культуры нижних клеток 48-наилучшим образом как камеры испытания. После 30 минут прошло, промыть каждое животное путем трубопроводов его в последовательности из четырех скважин 24-хорошо пластины заполнены чистой искусственной морской воды.
Затем поместите промытые особи в колодцы пластин А и В на светодиодную световую площадку. Разрешить животным акклиматизироваться в течение 30 минут, а затем использовать пастер пипетку для передачи целей от пластины B к пластине A.Allow мужчины и цели взаимодействовать в каждой хорошо в течение назначенного времени наблюдения перед остановкой видеозаписи. Во-первых, изучить видео для времени, когда каждая цель была передана в колодец на пластине A.Next, определить начало защиты попытка мужчины, как контакт антенны мужчины с любой части тела цели.
Определите прекращение попытки охраны самцом как точку, когда обе антенны самца отделяются от тела цели. Затем определите начало совокупления спинным изгибом тела самца, а затем повторяющимся прессом уросом против женского. Во-первых, создать видеоклип с участием эпизод интереса путем обрезки фильма с программным обеспечением для редактирования фильмов.
Затем откройте ImageJ и импортируем видеоклип. Выберите скрытый 8-битный параметр серой шкалы, чтобы уменьшить память, необходимую для обработки изображений. Далее выберите инструмент выбора прямой линии для калибровки спациальных отношений и нарисуйте линию отбора по диаметру колодеца.
Откройте меню сет-шкалы и введите известную длину в известную коробку расстояния и устройство в блоке длины коробки. После этого откройте меню свойств и введите интервал кадра в интервальную коробку кадра. Откройте плагин MTrackJ, выбрав плагины и MtrackJ.
Затем нажмите кнопку отслеживания в окне диалога, чтобы открыть меню конфигурации отслеживания. Проверьте применить локальный курсор привязки во время трека и выберите темный центроид в качестве оснастки функции. Затем нажмите кнопку добавления в диалоговое окно MTrackJ, чтобы начать отслеживание.
Распоистите курсор для покрытия лиц в видеоклипе, который будет отслеживаться. Затем нажмите, чтобы обнаружить темную центроиду объекта в квадрате. Чтобы создать таблицу данных, нажмите таблицу мер в окне диалога MTrackJ, а затем нажмите кнопку фильма, чтобы создать фильм с отслеживаемой траекторией, нарисованной в виде цветной линии.
Наконец, нажмите кнопку сохранения в диалоговом окне MTrackJ, чтобы сохранить результаты, включая данные в отслеживаемой двумерной траектории. В этом эксперименте было зафиксировано и наблюдаемо поведение tigriopus copepods. Анализ показывает разницу в средней продолжительности попыток охраны между мужскими и женскими парами и мужскими парами Tigriopus californicus, где самцы в мужских и мужских парах проявляли относительно более короткую продолжительность попыток, чем в мужских и женских парах.
Два измерения пространственного отслеживания вновь сформированных охраняющих пар Tigriopus californicus показали, что пары мужчин и мужчин, как правило, показывают более высокую скорость, чем пары мужчин и женщин в первые три секунды попыток охраны. После своего развития, этот метод проложил путь для исследователей в области этиологии, биохимии и эволюционной генетики, чтобы исследовать уникальную систему спаривания этих типов copepods.
