Этот протокол имеет важное значение, поскольку он производит наилучшие возможные модели для легочной артериальной гипертензии. Никакая другая модель не производит плексиформных поражений, найденных у пациентов с ПАУ человека. Основным преимуществом является то, что мы удваиваем поток крови в правом легком и легочной артерии, вызывая эндотелиальный ущерб и заставляя легкие работать в два раза больше.
Наша группа разработала высокоэффективную модель легочной артериальной гипертензии для разработки терапевтических средств. Помимо легочной артерии гипертонии, этот метод может быть полезным в регенеративной медицине и может дать представление о других заболеваний с увеличением легочного потока, как врожденные пороки сердца или после пневмонэктомии пациентов. Для тех, кто никогда не выполнял эту технику, мой совет заключается в том, чтобы следовать протоколу точно и убедиться, что хирург может видеть именно то, что они делают.
После анестезии крысы с 4%isoflurane, животное интубировано с помощью волоконно-оптического гусиного света для освещения трахеи. Вставьте катетер 16-го калибра в гортань и используйте холодное зеркало для наблюдения за конденсацией влажности в выдыхаемом дыхании от катетера для подтверждения итонации. Подключите крысу к аппарату искусственной вентиляции легких и поместите крысу под микроскоп в правом положении декубита на 37-градусную грелку По Цельсию.
Закрещите передние конечности лентой и используйте клиперы, чтобы побрить левую грудную клетку из-за передней ноги до конца грудной клетки. Очистите открытые кожи с тремя последовательными 10%povidone йода раствора и 70% этанола салфетки, и место пульс-оксиметр на ногу крысы для мониторинга сердечного ритма и насыщения кислородом на протяжении всей операции. Теперь отрегулируйте микроскоп и сосредоточьте хирургический вид.
Затем поместите стерильную драпировку над телом крысы и поднос для инструментов, чтобы создать стерильную среду. И, наконец, поместите стерильные инструменты на стерильный лоток инструмента. Для выполнения левой пневмонэктомии используйте ножницы Кули-Майо и ткани Джеральда, чтобы вырезать двух-три сантиметра отверстия в хирургической драпировке, и использовать хирургическое лезвие, чтобы сделать двухметровый боковой разрез в левой грудной клетке.
Используйте ножницы Кули-Майо, чтобы сократить каждый слой ткани до тех пор, пока ребра и межреберные мышцы подвергаются воздействию. Используйте комара, чтобы сделать отверстие через мышцы третьего межреберных пространстве. Используя двойной зонд, переместить легкие, чтобы визуализировать легочную артерию, и использовать McPherson-Vannas Iris ножницы, чтобы открыть межреберные мышцы примерно на один-два сантиметра шириной.
Поместите небольшой самоудержимый втягивающий в левую плевру, чтобы держать ребра и мышцы открытыми, и переместить левое легкое ниже в брюшной полости, чтобы обеспечить доступ к легочной артерии и бронхов. Для перевязки левого основного бронха и легочной артерии, во-первых, загрузить средний гемоклип в перевязку клип аппликатора и использовать Wangensteen атравматические миппы тщательно поднять верхнюю часть левого легкого подвергать легочной артерии. Закройте клип и аппликатор вокруг артерии, заботясь, чтобы не закрыть или разорвать левую вену azygos.
И открыть разрез далее с помощью миндалин, чтобы отделить мышечные волокна. После загрузки другого среднего гемоклипа в лигатинг клип аппликатор, использовать атрауматические жимы и стандартные ткани миппы, чтобы поднять нижнюю часть легкого из разреза, пока левый основной бронх и левой легочной вены визуализированы. Тщательно ligate левой основной бронхов и легочной вены вместе со вторым гемоклип, и использовать ножницы, чтобы удалить легкое без резки или разрыв клипа.
Затем используйте небольшой кусочек стерильной марли, чтобы поглощать любую кровь и остановить кровотечение. Используйте держатель иглы и 4-0 пролен шов, чтобы закрыть ребра и межреберные мышцы. Перед закрытием межреберных мышц вставьте катетер 16-го калибра в грудную полость вдали от хирургического разреза и в седьмое межреберное пространство и немедленно удалите иглу, оставив катетер на месте.
Поместите 5-0 шва в кожу и вокруг грудной трубки, так что, когда грудная трубка удаляется, отверстие будет связано закрыты, и связать швы, чтобы закрыть ребра. Закройте кожу и подкожное пространство с запуском 5-0 шва, и использовать три миллилитров шприца для эвакуации воздуха из плевральной полости через катетер, чтобы восстановить нормальное негативное давление в грудной клетке. Используйте держатель иглы, чтобы немедленно зажать катетер, чтобы предотвратить воздух от обратно в грудной полости.
Снимите катетер и завяжут шов, чтобы закрыть отверстие. В группе пневмонэктомии и монокроталина тяжелая легочная гипертензия развивается к 21-му дню, о чем свидетельствует повышение среднего давления легочной артерии по сравнению с контролем необработанных фиктивных животных. В пневмонэктомии плюс группа Sugen среднее давление легочной артерии в три раза выше, чем в контрольной группе.
Правое желудочковое систолическое давление также гораздо выше как у монокроталинов, так и у суген-обработанных животных, по сравнению с контрольной группой. В гематоксилин и эозин окрашенных нормальных крыс легочной ткани разделов, пространства между альвеолами и альвеолярных структур очевидны, и сосуды ясны и нормальной толщины. В легочной артерии гипертонии легких, есть признаки ремоделирования, утолщение стенок сосудов, сильное сужение сосудов, а также воспаление и координационный легочный артерит.
Зверь должен компенсировать потерю легкого, поэтому важно быть терпеливым в период восстановления. Мониторинг жизненно важных признаков и дать дополнительный объем кислорода или легких по мере необходимости. Сюген создает эндотелиальный апоптоз, который является клиническим соответствующим признаком легочной артериальной гипертензии.
Левая модель пневмонэктомии у грызунов проложила путь для ученых для изучения аномалий потока и разработки новых методов лечения легочной артериальной гипертензии. Благодаря использованию изофлюрана, сугена и/или MCT в этой модели, средства индивидуальной защиты должны носиться в обязательное время.
