该协议是重要的,因为它产生肺动脉高血压的最佳模型。没有其他模型产生在人类PAH患者中发现的胸膜病变。主要优点是,我们双倍的血液流在右肺和肺动脉,造成内皮损伤,迫使肺工作两倍的辛勤工作。
我们组已开发出一种高效的肺动脉高血压模型,以开发治疗方案。除了肺动脉高血压,这种方法可能有助于再生医学,并可以见解其他疾病与增加的肺流量,如先天性心脏缺陷或肺切除术后患者。对于从未执行过这种技术的人,我的建议是完全遵循协议,并确保外科医生能够确切地看到他们在做什么。
用4%等值的异丙醇麻醉大鼠后,用光纤鹅灯对大鼠进行插管,以照亮气管。将 16 量的导管插入喉部,并使用冷镜观察导管呼出的呼吸中湿度的凝结,以确认插管。将大鼠连接到呼吸机,将大鼠置于显微镜下,在 37 摄氏度加热垫上的右侧下落位置。
用胶带固定前肢,并使用剪子将左胸从前腿后面剃到肋骨的端。使用三种连续的 10% povidone 碘溶液和 70% 乙醇湿巾清洁暴露的皮肤,并在大鼠的脚上放置脉搏血氧计,以在整个手术过程中监测心率和氧饱和度。现在,调整显微镜,使手术视图成为焦点。
然后,在大鼠的身体和仪器托盘上放置一个无菌窗帘,以创建一个无菌环境。最后,将无菌仪器放在无菌仪器托盘上。要进行左肺切除术,请使用 Cooley-Mayo 剪刀和杰拉尔德组织钳在手术窗帘上切割一个两到三厘米的孔,并使用手术刀片在左胸做两厘米长的横向切口。
使用 Cooley-Mayo 剪刀切割每层组织,直到肋骨和骨骼间肌肉暴露。用蚊子在第三个间空间的肌肉中打个洞。使用双端探针,移动肺动脉以可视化肺动脉,并使用麦克弗森-范纳斯虹膜剪刀将骨质间肌肉打开至大约一到两厘米的宽度。
将一个小的自固定缩回器放入左胸膜,使肋骨和肌肉保持开放,并在腹部将左肺下部移动,以便进入肺动脉和支气管。对于左主支气管和肺动脉的结扎,首先,将一个中等血夹加载到连接夹施用器中,并使用旺森特创伤钳小心地抬起左肺上部以暴露肺动脉。关闭动脉周围的夹子和施用器,注意不要关闭或破裂左酶静脉。
并打开切口进一步使用扁桃体分离肌肉纤维。将另一个中等血球加载到连接夹施用器后,使用创伤钳和标准组织钳将肺的下部从切口中抬出,直到左主支气管和左肺静脉被可视化。小心地将左主支气管和肺静脉与第二个血球一起夹住,并使用剪刀取出肺,而不会切割或撕裂夹子。
然后,使用一小块无菌纱布来吸收任何血液并止血。使用针架和4-0的针线缝合关闭肋骨和间关节肌肉。在关闭腹间肌肉之前,将一个 16 量的导管插入胸腔,远离手术切口,插入第七个腹腔空间,并立即取出针头,将导管留在位。
将 5-0 缝合线放入皮肤和胸管周围,以便取出胸管时,将孔系上,并系上缝合线以关闭肋骨。用运行 5-0 缝合关闭皮肤和皮下空间,并使用三毫升注射器通过导管从胸腔中排空,以恢复胸部的正常负压。使用针架立即夹紧导管,以防止空气回到胸腔。
拆下导管并系上缝合线以关闭孔。在肺切除术和单胸科组,严重的肺高血压在第21天发展,与控制未经治疗的假动物相比,平均肺动脉压力增加就证明了这一点。在肺切除术加苏根组,平均肺动脉压力是对照组的三倍。
与对照组相比,单轴线和苏根治疗的动物的右心室收缩压也高得多。在血氧素和 eosin 染色的正常大鼠肺组织部分,肺活体和肺骨结构之间的空间是明显的,并且容器是清晰和正常的厚度。在肺动脉高血压肺,有证据表明重塑,血管壁变厚,血管严重收缩,炎症和焦点肺动脉炎。
动物必须补偿失去肺,所以在恢复期间保持耐心是重要的。监测生命体征,并提供必要的氧气或肺体积。Sugen产生内皮凋亡,这是肺动脉高血压的临床相关迹象。
啮齿动物的左肺切除术模型为科学家研究水流异常和开发治疗肺动脉高血压的新疗法铺平了道路。由于在此型号中使用异氟兰、苏根和/或 MCT,必须时刻佩戴个人防护设备。