Eine standardisierte Methodik zur Identifizierung und Zerlegen von Fettdepots im ganzen Körper ist entscheidend für die Untersuchung von Unterschieden im Charakter und der Funktion von Adipozyten in diskreten anatomischen Nischen. Der Hauptvorteil dieser Technik ist, dass es sich um eine zuverlässige und genaue Methode zur Identifizierung und Exzisierung sowohl gemeinsamer als auch weniger untersuchter Nagetier-Fettdepots handelt. Für die Identifizierung und Isolierung der interskaporären BAT verwenden Sie Irisschere horizontal entlang der unteren Kante des vorderen Unterhautgewebes einer eingeschläferten Maus nach dem natürlichen Rand des Depots zu schneiden.
Machen Sie zwei vertikale Einschnitte entlang der seitlichen Ränder des Depots nach den natürlichen Grenzen des Gewebes. Verwenden Sie Zangen, um das Depot vorsichtig aufzuklappen, um das schmetterlingsförmige interscapuläre braune Fettgewebe zu enthüllen, das in das weiße Fettgewebe eingebettet ist. Dann sezieren Sie die BVT vorsichtig weg vom umliegenden WAT.
Bewahren Sie Fettgewebe in geeigneten Behältern für die nachgelagerte Analyse auf. Zur Identifizierung und Isolierung von posterior subkutanen WAT, legen Sie die Maus in die Supine-Position und sichern Sie die Gliedmaßen des Tieres. Verwenden Sie Zangen, um die Haut an der Basis des Brustbeins zu heben und einen ein Millimeter Hautschnitt zu machen.
Legen Sie eine Klinge der Irisschere in den Schnitt und machen Sie einen vier bis fünf Zentimeter großen Mittellinien-Hautschnitt, der an der Basis des Brustbeins beginnt und zur Basis des Schwanzes aufsteigt. Als nächstes machen Sie zwei einen Zentimeter horizontale Einschnitte an der Oberseite des anfänglichen vertikalen Schnitts, der sich seitlich von der Mittellinie erstreckt. Verwenden Sie die Zange, um die Haut vorsichtig von der Peritonealhöhle zurückzuziehen, verwenden Sie das Bein, um die nachträgene subkutane WAT zu lokalisieren, die mit der Haut assoziiert bleiben sollte.
Pin die ausgestreckte Haut und vollständig verbrauchen die dreieckige Leisten WAT Depot von der Basis des Hinterglieds ventral über die Leistengegend. Für die viszerale WAT-Depot-Identifikation und -Isolierung verwenden Sie Zangen, um die dünne Peritonealhohlraumwand an der Basis des Brustbeins zu heben und einen ein Millimeter Schnitt im Zeltgewebe zu machen. Legen Sie eine Klinge der Irisschere in den Schnitt ein und machen Sie einen vier bis fünf Zentimeter hohen vertikalen Schnitt von der Oberseite der Peritonealhöhle zum Rektum.
Machen Sie zwei ein Zentimeter horizontale Einschnitte an der Ober- und Unterseite des vertikalen Schnitts, der sich seitlich von der Mittellinie erstreckt, und verwenden Sie die Zange, um das Peritoneum zurückzuschälen, um den Bauchhöhleninhalt freizulegen. Stecken Sie dann das ausgestreckte Peritoneum an die Sezierpfanne, um die WAT-Depots in der Peritonealhöhle zu ernten. Für die Identifizierung und Isolierung von viszeralen Gonaden WAT, lokalisieren Sie die Gonaden und verwenden Zangen, um den zugehörigen Gonaden WAT zu heben, und verwenden Sie dann iris Schere, um die WAT sorgfältig aus den Gonaden zu verbrauchen.
Um das Perirenaldepot zu verbrauchen, lokalisieren Sie die Niere und verwenden Sie Zangen, um das Nierengewebe zu heben. Ziehen Sie die Niere an die Mittellinie, um eine klare Trennung zwischen den perirenalen und retroperitonealen Depots zu sehen und verbrauchen Sie die WAT, die direkt mit den Nieren verbunden ist. Entfernen Sie dann die Nebennieren oberhalb der Nieren aus dem WAT.
Zur retroperitonealen WAT-Identifikation und -Isolierung heben Sie die Niere wieder an die Mittellinie und sezieren Sie die retroperitoneale WAT sorgfältig von der hinteren Peritonealwand. Um den poplitealen WAT zu isolieren, legen Sie die Patella gegen die Sezierpfanne und achten Sie darauf, dass die popliteale Fossa am Hinterrücken des Knies nach oben zeigt. Verwenden Sie die Irisschere, um die Haut vorsichtig von der Basis des Hinterglieds zum Fuß zu entfernen.
Verwenden Sie die Irisschere, um einen Schnitt an der unteren Grenze der medialen und seitlichen Köpfe des Magen-Darm-Muskels zu machen, verwenden Sie die Zange, um den Muskel zu heben, um das dreieckige popliteale Depot zu offenbaren. Verwenden Sie dann eine Irisschere, um das Depot entlang der natürlichen Gewebegrenzen zu verbrauchen. Hier werden die groben anatomischen Positionen von maussubkutanen, braunen, viszeralen und poplitealen Depots dargestellt.
Die histologischen Eigenschaften der subkutanen, braunen, viszeralen, poplitealen, konstitutiven und regulierten Markfett-, intramuskulären und infrapatellaren Fettdeponien können mit Standard-Hematoxylin- und Eosin-Färbeprotokollen bewertet werden. Die mit diesem Protokoll isolierten Fettgewebe können für eine Vielzahl experimenteller Endpunkte verwendet werden, einschließlich histologischer Analysen, molekularer Studien sowie Gen- und Proteinexpressionsanalyse. Die feldweite Standardisierung der Identifizierung verschiedener Fettdepots wird uns zweifellos dabei helfen, ihre molekularen und metabolischen Eigenschaften und ihre unterschiedlichen Beiträge zu lokalen und systematischen pathologischen Zuständen besser zu verstehen.
