Винилхлорид усугубляет повреждение печени, вызванное другими факторами, такими как диета в концентрациях ниже нынешних ограничений безопасности. Таким образом, необходимо пересмотреть параметры использования средних популяций. Основным преимуществом этого метода является то, что он использует хронический, неинвазивный протокол ингаляции, который тесно имитирует воздействие человека, вызывая при этом минимальный стресс для животного.
Демонстрация процедуры будет Анна Ланг, пост-док, и Регина Шнегельбергер, аспирант, как из моей лаборатории. За неделю до начала ингаляционных экспериментов взвесим всех экспериментальных животных и взвесим количество низкой или жирной диетической пищи, которая будет предоставлена на клетку. Обеспечить пищу и воду ad libitum, заменив регулярный чау для каждой группы воздействия с низким или высоким содержанием жира диеты чау, по мере необходимости.
Взвесить оставшуюся пищу в конце каждого дня кормления и контролировать мышей на протяжении всего эксперимента, чтобы убедиться, что здоровье животных поддерживается. Для настройки виниловой системы ингаляционного воздействия хлорида убедитесь, что разгрунтованный воздух как в экспериментальных, так и в контрольных камерах является высокореабиционным твердым воздухом и активированным углеродом, фильтруемым, высушенным и регулируемым давлением перед входом в соответствующие измерительные приборы потока. Подтвердите, что температура и относительная влажность контролируются из экспериментальных и контрольных камер, что выхлопные газы камеры передаются через фильтр HEPA, зонд двуокиси углерода и активированный углеродный фильтр, прежде чем войти в выхлопную зону химического капота, чтобы гарантировать, что мыши получают приемлемую вентиляцию.
Пользовательское программное обеспечение может быть использовано для изменения, мониторинга и записи экологических переменных, представляющих интерес во время ингаляционных экспозиций. Чтобы подготовить камеру к ингаляционной экспозиции, начните с выключа всех воздушных потоков в экспериментальных и контрольных камерах. Откройте каждую камеру дверь и поместите абсорбент постельных принадлежностей материал, абсорбент вверх, на верхней части кастрюли экскрементов.
Затем, мокрый абсорбент материала, чтобы обеспечить комфортный уровень влажности около 40 до 60% относительной влажности в течение всего периода воздействия и установить желаемый уровень воздействия хлорида винила в экспериментальной камере. Когда камеры будут готовы, передать мышей в отдельных клетках в ингаляционной камере клетки стойки, рандомизации размещения каждой мыши в стеллажах ежедневно, чтобы убедиться, что каждая мышь подвергается однородно в камерах. Затем поместите каждую стойку клетки в свою камеру и закройте двери камеры.
Для проведения эксперимента по ингаляционной экспозиции подтвердите, что клапан для винилхлоридного газового баллона находится в открытом положении, и установите разбоменциальный поток для экспериментальной камеры до 25 литров в минуту. Подтвердите, что ротометр на камере управления установлен на 25 литров в минуту и убедитесь, что все датчики работают правильно и отображения ожидаемых результатов как в экспериментальных и контрольных камер. На протяжении всего воздействия, контролировать и записывать время экспозиции, разгрунтный поток, поток хлорида винила, температура, влажность, камерное давление, уровень углекислого газа, и теоретическая концентрация хлорида винила в экспериментальной камере.
Подтвердите, что температура и влажность для контрольной камеры также отображаются, отображаются и регистрируются. Примерно на полпути через каждую экспозицию, разбить стеклянные наконечники на винил хлорид детектор трубки и предварительной обработки трубки и прикрепить поток из конца винилового хлорида детектор трубки насоса. Используйте короткий кусок трубки, чтобы прикрепить поток в конце виниловой трубки детектор хлорида к потоку из конца предварительной трубки и прикрепить короткий кусок трубки к потоку в конце предварительной обработки.
Удалите вилку из одного из портов отбора проб вблизи дыхательной зоны и прикрепите трубку из потока в конце предварительной обработки трубки к порту отбора проб. Из полного положения, расширить ручку на поршне насоса трубки детектора в полном положении, чтобы вытащить 100 миллилитров пробуемого газа из камеры в трубку детектора винил хлорида. Через 90 секунд нажмите рукоятку обратно.
После получения последнего образца газа удалите трубку из порта отбора проб камеры и переустановите вилку в порту. Осмотрите изменение цвета в трубке детектора хлорида винила для того чтобы установить концентрацию хлорида винила внутри камера и записать чтение пробки детектора для сравнения к теоретической стоимости. Если какие-либо проблемы возникают во время экспозиции, установите поток хлорида винила до нуля и увеличьте разминотельный поток до максимального значения, чтобы быстро очистить камеру.
После того, как продолжительность экспозиции была достигнута, программное обеспечение автоматически выключит поток винилхлорида. 15-минутный таймер безопасности затем начнет отсчитывает продолжительность экспериментальной камеры для очищения винилового хлорида. Как только это безопасно, чтобы удалить животных, нажмите нормально.
В конце периода экспозиции поверните виниловый хлоридный газовый клапан стопкок в закрытое положение и выключите все потоки воздуха в камере экспозиции. Поверните ротометр до тех пор, пока воздух не протекет через камеру управления и не удалите дверь из каждой камеры. Удалите стеллажи клетки из камер и передать мышей обратно в свои домашние клетки под капотом ламинарного потока.
Затем утилизировать любые отходы из экскрементной кастрюли в соответствии с институциональными правилами здоровья и безопасности и очистить двери камеры, кастрюлю, экспозицию стойки, и камеры. Здесь показаны еженедельный вес тела и двухнедельное потребление пищи в течение 12 недель эксперимента. Все мыши набрали вес на протяжении всего этого исследования.
Однако, в то время как мыши в группах с высоким содержанием жира диеты получили больший вес по сравнению с мышами в группах с низким содержанием жира диеты, мышей, подвергшихся воздействию винилхлорида не получить больше веса, чем мыши в соответствующих контрольных групп. Потребление продовольствия также не отличалось между группами. В этих представителях фотомикрографы H и E окрашенных секций печени, винилхлорид не вызвало никаких явных патологических изменений в группе с низким содержанием жира диеты.
Диета с высоким содержанием жира, питаясь значительно повышенным стеатозом, еще больше усугублялась воздействием винилхлорида. Кроме того, воздействие винилхлорида в группе с высоким содержанием жира привело к некоторым воспалительным очагам. В обезжиренной диете животных, винилхлорид не увеличить уровень трансаминазы, в то время как с высоким содержанием жира диета только немного увеличилось трансаминазы выражение, со значительным повышением этого эффекта наблюдается в группе с высоким содержанием жира диеты подвергаются винил хлорида.
Кроме того, диета с высоким содержанием жира значительно увеличила соотношение веса печени и тела, хотя винилхлорид не сильно повлиял на этот эффект. При реализации этого протокола, всегда заботиться о том, что надлежащие меры предосторожности принимаются так, что непреднамеренное воздействие хлорида винила людьми избежать. Эта процедура может ответить на вопросы о краткосрочном, долгосрочном и кумулятивном воздействии воздействия винилхлорида на здоровье, благополучие и повреждение органов.
Эти исследования влияют на область нашей экологической и профессиональной оценки рисков. Например, наша группа сейчас изучает механистическое взаимодействие между винилхлоридом и диетой.
