Крыса ортопедической модели трансплантации печени является мощным инструментом для изучения нескольких аспектов трансплантации печени. От иммунного ответа на инфекцию до технических аспектов процедуры. Основными преимуществами этого метода является то, что он может уменьшить осложнения, лучше представляющих комей трансплантации печени, и улучшить выживание реципиента.
Этот модифицированный протокол трансплантации крысиной ортопедической печени тесно имитирует аспекты трансплантации печени человека и будет служить переменной и клинически актуальной моделью исследования. Мы надеемся, что благодаря визуальной демонстрации зрители смеются со всеми деталями и сократят кривую обучения для освоения навыков микрохирургии, необходимых для этой техники. После введения 300 международных единиц гепарина натрия в внутригепатической нижней вены кавы анестезированной 12 до 14 недель крысы, сделать пять миллиметров разрез ниже бифуркации желчного протока, и вставить стент желчного протока в общий желчный проток.
Закрепте стент одной шелковой лигатурой 7-0, на один миллиметр выше разреза и одной лигатурой на 10 миллиметров ниже бифуркации. Вырезать желчный проток между двумя связями и подвергать надлежащей печеночным артерии. Разделите гастродуодерную артерию между двумя 7-0 шелковыми лигатурами и обнажите левую желудочную артерию, спленовую артерию и целиакию ствола.
Затем вырезать левую желудочную артерию, splenic артерии, и целиакия ствол между артерии связей. Используйте 20 миллилитров шприц оснащен 21,5 калибровочных иглы медленно вводить 20 миллилитров четырех градусов по Цельсию Ringer в лактат раствор в портале вены. Чтобы подготовить донорскую печень, разрежьте бифуркацию ствола целиакии, сплениковой артерии и левой желудочной артерии, чтобы сформировать большую артериальную манжету рукава и вставьте 1,5-миллиметровый артериальный стент 24 калибра в общую печеночную артерию донора через манжету.
Затем закрете стент с 8-0 полипропиленовая лигатура и промыть стент лактатным раствором Ringer. После разоблачения портала вены от 12 до 14 недель получателя крысы, разделить получателя желчного протока на 0,5 сантиметра ниже плитки бифуркации, и вставить стент желчного протока в дистальный общий желчный проток. Выставить левую, среднюю и правую печеночную артерии и связать сосуды дистальной к бифуркации печеночным артериям.
Вырезать артерии близко к печени выше связей и место длинный тонкий кусок марли за супер печеночной нижней кавы. Поместите 3D печатных внутрипечепатических кава держатель за внутрипечепатической кавы вены и использовать Tenno неаспасаемый монофизамент шов шить концы 3D печатной ручкой вместе. Свободно связать 7-0 шелковой лигатуры ниже как 3D печатных держатель между внутрицепатической вены кавы и портал вены, и зажим интрагепатической вены вены чуть выше правой почечной вены ниже 3D печатных держатель кавы.
Зажим портала вены чуть выше пилорийской вены и ниже 3D печатных. держатель. Используя трехмиллилитровый шприц с 27 калибровочной иглой прилагается, флеш два миллилитров 37 градусов по Цельсию Ringer в лактат решение через бифуркацию портвейна вены, и зажим супер печеночной вены кавы над печенью с зажимом Kitzmiller. Затем вырезать ниже зажима как можно ближе к печени, как это возможно, и вырезать выше 3D печатных держателей как для портала вены и меж печеночной вены кавы, чтобы удалить печень получателя.
Для трансплантации донорской печени тщательно ориентируйте донорскую печень в полость тела реципиента таким образом, чтобы можно было создать верхний мощеный анатомоз. Вставьте манжету вены портала от донора в вену портала реципиента и затяните шелковый галстук 7-0. Удалите атрауматический зажим из супер печеночной ены кавы и удалите микрососудистый зажим для вены портала.
После повторного perfusing печени с теплой кровью, вставьте донора внутриэпатической вены кава манжеты в реципиента интрагепатической вены кавы и обеспечить сосуд с 7-0 шелковый галстук. Затем удалите донорский внутрицепатический клип vena cava перед удалением клипа реципиента. Для выполнения артериального анатомоза, отрезать часть ствола целиакии от донора, который простирается за стент, и зажать надлежащей печеночные артерии реципиента.
Отрежьте галстук в конце и любые дополнительные ткани, окружающие сосуд. И используйте лактатное решение Ringer, чтобы промыть люмены как донора, так и сосуда-реципиента. Используя изогнутую иглу, поместите 10-0 этилоновый шов через левый аспект донорской печеночным артерии, на 2,5 миллиметра выше дистальной отверстия стента, и через конец стента.
Замирает реципиент надлежащей печеночным артерии 0,5 миллиметра ниже отверстия сосуда с левой стороны сосуда, на правую сторону артерии. Поместите следующий шов через правую стенку донорской печеночных артерий изнутри на улицу, на расстоянии от стентового отверстия, идентичного первоначальному стежку, и подтяните на двух концах 10-0 неабсорбируемого монофиламента, чтобы проскользнуть реципиента надлежащей печеночных артерий вверх, и в стент печеночных артерий. Затем свяжите 10-0 неабсорбируемых монофиламент с собой над донорской печеночным артерией.
Промыть как реципиента и донора желчных протоков, и вставить донор желчных протоков стент в реципиент желчного протока. Затем затяните галстук, который ранее был помещен вокруг желчного протока получателя. В этом репрезентативном эксперименте, не печеночной артерии анатомоз крысы ортопедической модели пересадки печени продемонстрировали 50 и 37,5% выживаемости, на 21 дней и 60 дней, после операции соответственно.
В отличие от этого, оптимизированная процедура повторного подключения печеночным артериям значительно увеличила долгосрочное выживание. Гистологический анализ репрезентативного подмножества пересаженных животных без воссоединения печеночной артерии выявил признаки гипоксической травмы печени с центральным лобкулярным некрозом, на шестой и тринадцатый день после трансплантации. Обширный некроз печени был связан с чрезвычайно повышенным уровнем аланина иммуно трансферов и аспарта аминокислотной трансферазы у этих животных.
В отличие от этого, пересаженные крысы с воссоединением печеночной артерии не проявляли никаких признаков повреждения печени, а гистологический анализ выявил нормальную структуру печеночной паренхимы, с организованными ачини, лобулами, артериями и желчными протокими. Кроме того, гистологический анализ печени из не печеночной артерии воссоединения модели крыс показали реактивные изменения после гипоксической травмы печени. В том числе пролиферации рыночных желчных протоков, фиброз пери портала и воспаление, а также искаженная печеночная паренхима.
Этот протокол может быть адаптирован для изучения многих иммунологических и хирургических аспектов трансплантации печени и может служить моделью для тестирования новых терапевтических вмешательств, имеющих отношение к трансплантации.
