Presentiamo un modello chirurgico affidabile e riproducibile di trapianto di arti posteriori eterotopici nei ratti. Questa tecnica è ideale per studi a breve termine sulla conservazione o sul rigetto immunitario in VCA. La descrizione passo-passo consentirà ai tirocinanti di padroneggiare rapidamente l'intervento chirurgico.
Per iniziare, fai un'incisione circonferenziale sulla pelle sopra la caviglia al terzo distale della gamba. Scheletrare e cauterizzare l'arteria safena e il ramo terminale dell'arteria poplitea usando una pinna bipolare. Cauterizzare e tagliare i muscoli gastrocnemio, soleo, tibiale anteriore e bicipite femorale fino a quando l'osso tibiale è esposto.
Fai un'incisione di 2,5 centimetri nella piega inguinale destra e seziona il cuscinetto di grasso inguinale. Utilizzare un divaricatore dell'amo da pesca per afferrare il legamento inguinale. Tenere il cuscinetto di grasso inguinale distalmente con pinza di serraggio e ritrarre il cuscinetto di grasso per esporre i vasi femorali.
Seziona i vasi femorali, individualizza i rami di Murphy e ligate con fascette di nylon 8/0. Eparinare il ratto donatore iniettando l'eparina nella vena dorsale del pene usando un ago calibro 27,5. Completare l'incisione cutanea intorno all'anca.
Utilizzare la pinna bipolare per cauterizzare i muscoli bicipite femorale e gluteo superficiale, quindi cauterizzare e tagliare il nervo sciatico a metà lunghezza del femore. Esporre il femore prossimalmente a livello della cresta femorale posteriore e legare i vasi femorali con legami di nylon a livello del legamento inguinale. Eseguire un'arteriotomia sull'arteria femorale appena sotto la legatura e dilatarsi per inserire l'angiocatetere calibro 24.
Cauterizzare e tagliare il muscolo rimanente sotto il peduncole per esporre il lato anteriore del femore. Usa il tagliaosse per tagliare la tibia prossimalmente e tagliare il femore nel modo più distale possibile. Lavare l'arto posteriore parziale con due millilitri di eparina salina per ottenere un chiaro deflusso venoso.
Posizionare l'arto posteriore sul ghiaccio in una garza sterile fino al trasferimento microvascolare. Sezionare il cuscinetto di grasso inguinale e reclinare il cuscinetto di grasso inguinale distalmente per esporre i vasi femorali. Utilizzare un gancio per ritrarre il legamento inguinale e una pinza di serraggio per tenere il cuscinetto di grasso inguinale distalmente.
Seziona i vasi femorali, individualizza i rami di Murphy e ligate con cravatte di nylon come dimostrato. Ligate entrambi i vasi sopra i vasi epigastrici usando fascette di nylon. Posizionare i morsetti dell'approssimante prossimamente, dilatare la lente del vaso e risciacquare con eparina salina.
Fai un'incisione sul fianco sinistro sopra l'anca e crea una tasca sottocutanea con un tunnel sottocutaneo alla piega inguinale. Posizionare la parte prossimale dell'arto parziale e il cuscinetto di grasso inguinale attraverso il tunnel sottocutaneo per il trasferimento microvascolare. Eseguire le anastomosi venose e arteriose utilizzando suture di nylon.
Rimuovere entrambi i morsetti dell'approssimante e osservare la rivascolarizzazione dell'arto. Eseguire un test di mungitura su entrambi i vasi per valutare la pervietà di ciascuna anastomosi. Fare un'incisione longitudinale della pelle sul lato mediale dell'arto trapiantato e inserire l'innesto.
Rimuovere la pelle in eccesso dell'innesto e chiudere la ferita con suture separate e una sutura in esecuzione utilizzando suture 4/0 assorbibili. Suturare insieme i cuscinetti di grasso inguinale dell'arto trapiantato e del ricevente utilizzando due suture assorbibili separate e chiudere la piega inguinale dopo l'ultimo controllo dell'anastomosi microvascolare. L'evoluzione del modello di arto posteriore eterotopico è stata monitorata fino alla fine dello studio.
La ricrescita dei capelli è stata osservata durante la prima settimana postoperatoria e la retrazione cutanea è apparsa dopo due settimane. Il fallimento dell'allotrapianto composito vascolarizzato può verificarsi durante la prima settimana postoperatoria a causa della trombosi microvascolare. La trombosi venosa è stata la causa dell'eutanasia precoce nel 20% dei casi, tutti avvenuti prima del quinto giorno postoperatorio.
La pelle appariva blu e diventava più scura ogni giorno. L'automutilazione è una seria preoccupazione negli innesti senza senso e spesso si verifica tra il secondo e il settimo giorno postoperatorio. Se limitato a meno di un terzo della superficie dell'innesto e riguarda solo la pelle, lo sbrigliamento chirurgico e la sutura con suture non assorbibili possono essere discussi con il veterinario del personale.
La prevenzione dell'automutilazione si basa sull'uso di un collare elettronico cucito al collo fino al settimo giorno postoperatorio e sulla pulizia di qualsiasi sangue o crosta sulle ferite chirurgiche dell'animale. Grave autofagia di più strati dell'innesto porta all'eutanasia dell'animale. Le cisti dermiche sono apparse dopo il giorno 14 postoperatorio, a volte con un centro necrotico cutaneo prima della fistola.
È fondamentale assicurarsi che il posizionamento dell'innesto non impedisca all'animale di essere ambulatoriale e che il peduncole non sia attorcigliato o stretto durante l'inserto dell'innesto. Il nostro team ha eseguito studi di conservazione negli arti procurati prima del trapianto. Sono stati valutati gli effetti delle diverse durate della conservazione statica a freddo e diversi protocolli di perfusione degli arti.
