Wir präsentieren ein zuverlässiges und reproduzierbares operationsmodell der heterotopen Hinterbeinemtransplantation bei Ratten. Diese Technik ist ideal für Kurzzeitstudien zur Konservierung oder Immunabstoßung bei VCA. Die Schritt-für-Schritt-Beschreibung ermöglicht es den Auszubildenden, die Operation schnell zu meistern.
Machen Sie zunächst einen umlaufenden Schnitt auf der Haut oberhalb des Knöchels am distalen Drittel des Beins. Skelettieren und kauterisieren Sie die Arteria saphenöses arterie und den terminalen Ast der Arteria poplitea mit einer bipolaren Pinzette. Kauterisieren und schneiden Sie die Muskeln Gastrocnemius, Soleus, Tibialis anterior und Bizeps femoris, bis der Tibiaknochen freigelegt ist.
Machen Sie einen 2,5 Zentimeter einschnitt an der rechten Leistenfalte und sezieren Sie das Leistenfettpolster. Verwenden Sie einen Angelhakenretraktor, um das Leistenband zu greifen. Halten Sie das Leistenfettpolster distal mit einer Klemmzange und ziehen Sie das Fettpolster zurück, um die Oberschenkelgefäße freizulegen.
Sezieren Sie die Oberschenkelgefäße, individualisieren Sie die Murphy-Äste und ligatieren Sie mit 8/0 Nylonbindern. Heparinisieren Sie die Spenderratte, indem Sie das Heparin mit einer 27,5-Gauge-Nadel in die Penisvene injizieren. Vervollständigen Sie den Hautschnitt um die Hüfte.
Verwenden Sie die bipolare Pinzette, um die Muskeln Bizeps femoris und Gluteus superficialis zu kauterisieren, dann kauterisieren und schneiden Sie den Ischiasnerv in mittlerer Femurlänge. Legen Sie den Femur proximal auf Höhe des hinteren Oberschenkelkamms frei und ligaieren Sie die Oberschenkelgefäße mit Nylonbindern auf Höhe des Leistenbandes. Führen Sie eine Arteriotomie an der Oberschenkelarterie direkt unterhalb der Ligatur durch und erweitern Sie sich, um den 24-Gauge-Angiokatheter einzuführen.
Kauterisieren und schneiden Sie den verbleibenden Muskel unter dem Pedikel, um die vordere Seite des Femurs freizulegen. Verwenden Sie den Knochenschneider, um die Tibia proximal zu schneiden und den Femur so distal wie möglich zu schneiden. Spülen Sie die partielle Hinterbeine mit zwei Millilitern Heparinsalzlösung, um einen klaren venösen Abfluss zu erhalten.
Legen Sie die Hinterbeine bis zum mikrovaskulären Transfer in eine sterile Gaze auf Eis. Sezieren Sie das Leistenfettpolster und lehnen Sie das Leistenfettpolster distal zurück, um die Femurgefäße freizulegen. Verwenden Sie einen Haken, um das Leistenband und eine Klemmzange zurückzuziehen, um das Leistenfettpolster distal zu halten.
Sezieren Sie die Oberschenkelgefäße, individualisieren Sie die Murphy-Äste und ligatieren Sie mit Nylonbindern, wie gezeigt. Ligatieren Sie beide Gefäße über den epigastrischen Gefäßen mit Nylonbindern. Setzen Sie die Approximatorklemmen proximal ein, erweitern Sie die Gefäßlinse und spülen Sie sie mit Heparin-Kochsalzlösung ab.
Machen Sie einen Schnitt an der linken Flanke oberhalb der Hüfte und erstellen Sie eine subkutane Tasche mit einem subkutanen Tunnel zur Leistenfalte. Legen Sie den proximalen Teil der partiellen Extremität und das Leistenfettpolster durch den subkutanen Tunnel für den mikrovaskulären Transfer. Führen Sie die venösen und arteriellen Anastomosen mit Nylonnähten durch.
Entfernen Sie beide Approximatorklemmen und beobachten Sie die Revaskularisierung der Extremität. Führen Sie einen Melktest an beiden Gefäßen durch, um die Durchgängigkeit jeder Anastomose zu beurteilen. Machen Sie einen Längsschnitt auf der medialen Seite der transplantierten Extremität und führen Sie das Transplantat ein.
Entfernen Sie die überschüssige Haut des Transplantats und schließen Sie die Wunde mit separaten Nähten und einer laufenden Naht mit resorbierbaren 4/0-Nähten. Nähen Sie die Leistenfettpolster der transplantierten Extremität und des Empfängers mit zwei separaten resorbierbaren Nähten zusammen und schließen Sie die Leistenfalte nach der letzten Untersuchung der mikrovaskulären Anastomose. Die Entwicklung des heterotopen Hinterbeinemodells wurde bis zum Ende der Studie beobachtet.
Das Nachwachsen der Haare wurde während der ersten postoperativen Woche beobachtet, und der kutane Rückzug trat nach zwei Wochen auf. Vaskularisierte zusammengesetzte Allotransplantationsversagen kann in der ersten postoperativen Woche aufgrund einer mikrovaskulären Thrombose auftreten. Venenthrombosen waren in 20% der Fälle die Ursache für die frühe Euthanasie, die alle vor dem fünften Tag der Postoperativen auftraten.
Die Haut erschien blau und wurde jeden Tag dunkler. Selbstverstümmelung ist ein ernstes Problem bei unsinnigen Transplantaten und tritt oft zwischen dem zweiten und siebten Tag der Postoperativen auf. Wenn sie auf weniger als ein Drittel der Transplantatoberfläche beschränkt sind und nur die Haut betreffen, können chirurgisches Debridement und Naht mit nicht resorbierbaren Nähten mit dem Tierarzt besprochen werden.
Die Verhinderung der Selbstverstümmelung beruht auf der Verwendung eines E-Kragens, der bis zum siebten Tag der Postoperation am Hals genäht ist, und der Reinigung von Blut oder Kruste an den chirurgischen Wunden des Tieres. Schwere Autophagie mehrerer Schichten des Transplantats führt zur Euthanasie des Tieres. Dermale Zysten traten nach dem postoperativen Tag 14 auf, manchmal mit einem kutanen nekrotischen Zentrum vor der Fistel.
Es ist wichtig sicherzustellen, dass die Platzierung des Transplantats das Tier nicht daran hindert, ambulant zu sein, und dass der Pedikel während des Transplantateinsatzes nicht geknickt oder fest ist. Unser Team führte konservierungsstudien an den beschafften Gliedmaßen vor der Transplantation durch. Die Auswirkungen unterschiedlicher Dauer der statischen Kühllagerung wurden ebenso bewertet wie verschiedene Perfusionsprotokolle für Gliedmaßen.
