Как и у млекопитающих, количество мышечных волокон, основной детерминант конечной мышечной массы устанавливается во время эмбриогенеза птицы. Этот метод позволяет исследователям изучать домашнюю птицу при ово-миогенезе и манипуляциях с гиперплазией мышечных волокон. Эта методика требует небольших вложений в оборудование и является простым и относительно недорогим методом изучения манипуляций миогенеза.
Исследователи, новички в этой технике, могут бороться за правильную инкубацию яиц. Продемонстрировать эту технику будут я и Морган Грейвли, оба аспиранта магистра наук в нашей лаборатории. Перед началом эксперимента осмотрите и выбросьте яйца низкого качества.
Назначьте и запишите отдельные номера яиц выбранным яйцам, а затем взвесьте яйца. Затем поместите яйца в соответствующий инкубационный лоток и предварительно высиживайте их при 26,6 градусах Цельсия с относительной влажностью 40% в течение шести часов. После инкубации увеличивают и поддерживают температуру инкубатора на уровне 37 градусов Цельсия с относительной влажностью 40% до 18 дня инкубации.
Измеряйте температуру поверхности нескольких яиц по всему инкубатору два раза в день с помощью термометра тепловой поверхности, чтобы температура поверхности яиц составляла 37 градусов по Цельсию. Продолжайте перемещать яйца, вращаясь каждый час. Чтобы обеспечить потерю веса яиц от 10% до 12,5%, записывайте вес яиц ежедневно в течение первых 18,5 дней инкубации.
На 10-й день инкубации готовят раствор никотинамида рибозида, необходимый на каждые 100 микролитр в ово-инъекциях, как описано в рукописи, и выдерживают растворы при температуре 37 градусов Цельсия на водяной бане. После извлечения яиц по одному лотку за раз из инкубатора и накрыв теплым полотенцем, свечи на каждое яйцо, чтобы найти желточный мешок. Очистите область инъекции 70%-ным этанолом перед введением стерильной 20 калибра 2,54 см подкожной иглы на один сантиметр вглубь яичной скорлупы для введения назначенной дозы лечения никотинамидом рибозидом со 100 микролитрами стерильного физиологического раствора в желточный мешок.
Сразу же накройте место инъекции небольшим кусочком абсолютной водонепроницаемой ленты, чтобы избежать чрезмерной потери влаги. После того, как все яйца прошли обработку, поместите лоток обратно в инкубатор. На 18-й день инкубации выньте яйца из лотков, чтобы поместить их в назначенные инкубационные ящики в соответствии с их обработкой, затем поместите инкубационные ящики в инкубатор с увеличением влажности до 60%, пока не вылупятся все яйца или до 23-го дня инкубации.
Перед сбором проб определите длину темени до крестца усыпленных птенцов, положив птенца на бок с заправленной вниз головой и ногами под телом и измерив длину от верхней части головы до хвоста, затем измерите ширину головы от одного ушного отверстия до другого ушного отверстия в длине головы от задней части клюва до задней части черепа. Чтобы оценить окружность головы, оберните неэластичную струну вокруг черепа от одного ушного отверстия к другому, а затем получите измерение струны метрической линейкой. Точно так же определите окружность грудной клетки, обернув веревку вокруг груди, под которой крылья соприкасаются с телом, прежде чем поместить веревку на метрическую линейку, чтобы получить измерение.
Опрыскайте грудь цыпленка 70% этанолом, а пальцами потяните перья и кожу, чтобы выявить основные мышцы грудной клетки, а затем проведите измерения с помощью цифровых суппортов. Измерьте ширину груди по всей груди, где крылья соприкасаются с телом, и длину груди от нижней части ключицы до верхней части жировой подушки. Чтобы извлечь правую большую грудную мышцу, используйте хирургические ножницы или скальпель и щипцы, чтобы разрезать вдоль килевой кости, прежде чем освободить мышцу от стенки тела.
После удаления большой грудной мышцы положите мышцу плоско на палочку Popsicle, чтобы собрать измерения с помощью цифровых суппортов. Выясните длину мышцы от черепной до каудальной части мышцы и ширину мышцы в самой широкой части черепной части мышцы. Для определения толщины мышц подберите грудь щипцами и отмерьте на самом толстом участке черепного отдела мышцы.
Когда это сделано с измерениями, правая и левая большая мышца грудной клетки могут храниться для дальнейшего анализа при минус 80 градусах Цельсия в течение года. Эмбрионам вводили четыре дозы никотинамида рибозида или дозу для изучения эффекта при кормлении ово. Было отмечено, что не наблюдалось влияния дозы на массу тела эмбрионов 18-го дня и вылупившихся цыплят.
Аналогичным образом, не было обнаружено никаких эффектов дозы на основных мышечных измерениях грудной клетки для эмбрионов на весь день 18. Для вылупившихся цыплят не наблюдалось влияния дозы на большую длину и ширину грудной клетки. Тем не менее, доза действительно влияла на мышечную массу и глубину.
Птенцы развились из эмбрионов, которым не вводили никотинамид рибозид, имели основные грудные мышцы, которые весили меньше, чем птенцы из эмбрионов, которым вводили 501 000 миллимоляров никотинамид рибозида. Птенцы из эмбрионов, которым вводили нулевой и 250-миллимолярный никотинамид рибозид, имели меньшую глубину грудной клетки, чем цыплята из эмбрионов, которым вводили 501 000 миллимолярных никотинамид рибозидов. Ключом к проведению надежного эксперимента является выбор бездефектных и однородных яиц.
Это обеспечит катализацию всех эффектов. При сборе большой грудной мышцы гистология может быть использована для измерения морфометрии мышечных волокон, а общая РНК и белок могут быть извлечены для анализа экспрессии генов и белков. В настоящее время мы изучаем влияние этой технологии на показатели роста качества свежего мяса обработанных птиц.
