В данном докладе представлен уникальный подход к индукции инфаркта миокарда у мышей. Нынешний метод прост, экономит время и использует хирургические трубки и оборудование, которые можно найти в большинстве лабораторий. Создание моделей инфаркта миокарда обеспечивает предпосылку для изучения прошлых механизмов постинфаркта миокарда и вариаций новых терапевтических средств.
Нанесите крем для депиляции на грудь мыши и подождите одну минуту. Затем аккуратно сотрите крем для депиляции и волосы влажной марлей. Закрепите мышь на операционной платформе в положении лежа на спине.
Продезинфицируйте операционную область, как описано в тексте. Затем накройте продезинфицированный участок стерильной простыней. Сделайте 0,5-сантиметровый разрез кожи по линии, соединяющей мечевидный и подмышечный впадины, и тупо разделите большую грудную и малую грудные мышцы с помощью щипцов.
Откройте четвертое межреберье с помощью гемостата Micro-Mosquito. Экстернализируйте сердце, подталкивая его указательным пальцем левой руки к четвертому межреберью. Зафиксируйте сердце левой рукой и перевяжите левую переднюю нисходящую ветвь швом 6/0 в трех миллиметрах от ее начала.
Быстро поместите сердце обратно в грудную полость. Выпустите воздух из грудной полости, слегка надавливая на грудную полость. Для послеоперационного обезболивания вводите бупренорфин подкожно каждые четыре-шесть часов в течение семидесяти двух часов после операции.
Положите мышь на грелку, чтобы прийти в себя после анестезии. Закрепите усыпленную мышь на операционной платформе в положении лежа на спине. Сделайте вентральный разрез примерно на три-четыре сантиметра в верхней части живота.
Отрежьте ребра с обеих сторон грудной полости, а затем удалите диафрагму. Перфузии сердца 10 миллилитрами холодного четырехградусного по Цельсию 1X PBS через внутрижелудочковую инъекцию. Затем соберите сердце, отрезав корень аорты, и сразу же храните его при температуре минус 80 градусов по Цельсию.
Нарежьте замороженное сердце на кусочки толщиной в один миллиметр на льду с помощью бритвенных лезвий. Подготовленные срезы сердца инкубируют в 1%-ном растворе ТТС, растворенном в 1X PBS при температуре 37 градусов Цельсия, в течение 10-15 минут. Затем сфотографируйте срезы с помощью цифровой камеры.
После перевязки коронарных артерий анализ окрашивания ТТС показал успешную индукцию инфаркта миокарда и временные изменения размера рубца после инфаркта миокарда. Результаты анализа выживаемости показали явную смертность в течение семи дней после инфаркта миокарда у самцов и самок мышей C57BL/6J. Разрыв желудочка был частой причиной смерти после инфаркта миокарда.
Эхокардиографическая оценка после инфаркта миокарда продемонстрировала успешную индукцию сократительной дисфункции и ремоделирование желудочков. Когда вы пытаетесь экстернализировать сердце, не давите сначала на грудную полость, а после нашего сопротивления это указывает на необходимость скорректировать направление против взвешенной похвалы. После этой процедуры может быть выполнена интрамиокардиальная инъекция вирусных векторов или клеток для проверки эффективности генной терапии или клеточной терапии при заболеваниях сердца.
