Общей целью этого видео является создание мышиной модели острого панкреатита путем ретроградной инъекции таурохолата натрия в билиопанкреатический проток. Все эксперименты с участием животных были одобрены Комитетом по этике животных Университета Сучжоу. Все хирургические процедуры проводились под полным наркозом.
Анальгетики не использовались для того, чтобы не мешать естественному течению болезни, о чем свидетельствуют предыдущие литературы и одобрены Комитетом по этике животных Университета Сучжоу. Голодайте мышь за восемь-12 часов до операции. Приготовить 5% раствор таурохолата натрия фильтруют через 0,22 микрофильтра.
Автоклав хирургических инструментов и материалов, включая щипцы, ножницы, держатель лезвия, держатель иглы, гемостатический зажим, сосудистые зажимы и стерильные шторы. Микрошприц стерилизовали путем облучения. У мыши индуцируют общую анестезию внутрибрюшинной инъекцией 1% пентобарбитала раствором натрия в дозировке 50 миллиграмм на килограмм.
Зафиксируйте мышь в положении лежа на спине на облученной пенопластовой плоской пластине с лентой. Удалить шерсть мыши кремом для депиляции с уровня мечевидного отростка вниз до соединительной линии двустороннего переднего верхнего подвздошного отдела позвоночника, причем левая и правая стороны параллельны передней подмышечной линии. Протрите кожу два-три раза 0,5% йодофором и каждый раз давайте высохнуть в течение одной-двух минут.
Накройте мышь стерильными шторами. Разрежьте открытый слой кожи, а затем откройте подкожно. Сделайте приблизительно два-три сантиметра в длину срединный разрез брюшной полости.
Расположите двенадцатиперстную кишку слева направо вдоль желудка. Осторожно вытяните двенадцатиперстную кишку наружу и в левую сторону, используя хирургические щипцы и пропитанный дезинфицирующим средством ватный тампон, чтобы обнажить поджелудочную железу, билиопанкреатический проток и дуоденальный сосочек. Использование 8-0 Швы проходят через соединение между двенадцатиперстной кишкой и поджелудочной железой вокруг сосочка, натягивают шов на левую сторону тела мыши, чтобы зафиксировать двенадцатиперстную кишку.
Аккуратно оттяните кожу и нижний край печени в сторону. Зажмите общий печеночный проток. Ретроградно проткните микроинъектор в дистальный билиопанкреатический проток.
Зафиксируйте кончик иглы возле двенадцатиперстной кишки с помощью зажима. Вводят 10 микролитров 5% таурохолата натрия в билиопанкреатический проток со скоростью 5 микролитров в минуту. Держите билиопанкреатический проток закрытым в течение 5 минут для достижения стабильного давления.
Снимите зажимы. Вытащите микроинжектор, снимите другой зажим и зафиксируйте шов. Восстановить двенадцатиперстную кишку до исходного анатомического положения и проверить кровотечение.
Закройте рану 6-0 швами. Снимите стерильную драпировку. Продезинфицируйте разрез 0,5% йодофором.
Извлеките животных из анестезии на термопрокладке с температурой 37 градусов цельсия. Вводят 0,8 миллилитра 0,9% физиологического раствора подкожно для приема жидких добавок. Через 24 часа после операции обезболивают мышь пентобарбиталом натрия, используя ту же дозу и инъекционный путь.
Соберите цельную кровь из брюшной аорты и вращайтесь при 1 500 х г в течение 15 минут, чтобы изолировать сыворотку для серологического тестирования. Соберите поджелудочную железу и легочную ткань для оценки гистологии. Погрузить поджелудочную железу в 4%-образный раствор параформальдегида на 24 часа.
Обезвоживают в серии концентраций алкоголя и встраивают в парафин. Используйте микротом для подготовки 5 микротолщинных участков ткани поджелудочной железы. Выполните окрашивание H&E для гистологической оценки поджелудочной железы.
Мыши были слегка неактивны и имели вес, потерянный через 24 часа после операции по сравнению с предоперационным периодом. Выживаемость контрольных мышей и мышей SAP составила 100% и 72,7% соответственно через 72 часа после операции. Согласно результатам окрашивания H&E из участков поджелудочной железы, пульпальный некроз ткани поджелудочной железы можно было наблюдать у мышей SAP, в то время как у контрольных мышей не было обнаружено никаких существенных изменений.
Кроме того, значительно повышенные уровни амилазы, липазы, поджелудочной железы и активности MPO легких были обнаружены у мышей SAP по сравнению с контрольными мышами. Кроме того, были также обнаружены значительно повышенные уровни индексов печени и почек, включая АЛТ, АСТ, БУН и креатинин. Используя ретроградную инъекцию таурохолата натрия в билиопанкреатический проток, тяжелый острый панкреатит может быть вызван у мышей.
Хорошая экспозиция билиопанкреатического протока для обеспечения успешной пункции. Во время пункции обеспечьте соответствующий угол и силу, чтобы избежать прокола билиопанкреатического протока. TC-индуцированная модель SAP, описанная здесь, является подходящей моделью для изучения механизмов, участвующих в тяжелом остром панкреатите.
Это экономичная модель с использованием менее дорогих реагентов, и это видео помогает быстрее обучать начинающего хирурга.
