Наш протокол важен тем, что обеспечивает чистоту в качестве проверки качества. Это также способствует сильной производительности ферментации и консистенции выхода при ферментации молочнокислых бактерий. Основным преимуществом этого метода является то, что он может повысить производительность ферментации молочнокислых бактерий за счет чистоты клеток, жизнеспособности и функциональности.
Данная методика удобна в использовании и может быть легко выполнена любым человеком благодаря использованию только базового оборудования без многих технических требований. Филип Йебоа является нашим аспирантом-исследователем, и он продемонстрирует процедуру. Для начала возьмите подготовленный глицериновый запас молочнокислых бактерий, или штаммов LAB, в двух миллилитрах центрифужных пробирок из сверхнизкой морозильной камеры при минус 80 градусах Цельсия.
Не позволяйте им оттаивать перед использованием. Очистите и продезинфицируйте отверстие трубок центрифуги 70% спиртом и осторожно вихрь перед использованием. Пипетка около 250 микролитров запасной культуры LAB от центрифужных пробирок до свежих двух миллилитровых пробирок MRS.
Осторожно вращайте пробирки, парафильмируйте их и анаэробно инкубируйте их в течение ночи при температуре 42 градуса Цельсия в течение 12-16 часов. Затем возьмите около 500 микролитров из выращенных за ночь культур из двух миллилитровых пробирок MRS в свежие семимиллилитровые пробирки MRS, вихрь их и анаэробно инкубируйте их в течение ночи при 42 градусах Цельсия в течение 12-16 часов. Оцените рост микробов путем измерения оптической плотности или роста культур на 610 нанометрах с помощью УФ-видимого спектрофотометра и запишите приемлемые результаты между 0,7 и 0,9.
Проведите ночные культуры из семимиллитровых трубок MRS на агаровые пластины MRS и MRCMPYR и инкубируйте их анаэробно в течение 72 часов при 42 градусах Цельсия. Соберите изолированные колонии из агаровых пластин, переложите их в свежие семимиллилитровые пробирки MRS, осторожно вихрь и анаэробно инкубируйте их в течение ночи при 42 градусах Цельсия в течение 12-16 часов. Храните агаровые пластины, содержащие изолированные штаммы при четырех градусах Цельсия, в холодильнике в течение недели.
Затем измерьте и подтвердите оптическую плотность из семимиллилитровных пробирок MRS культур LAB, выделенных из полосатых пластин на 610 нанометров, и используйте их в качестве рабочих культур для всех связанных экспериментов. Используйте девять миллилитров пептоновой воды для выполнения десятикратного загрязнения выращенных культур LAB из последних семи миллилитровых пробирок MRS для получения соотношения 1 к 10. Возьмите около 250 микролитров из соответствующих серийных заблуждений для всех экспериментов по ферментации и активируйте бульон, содержащий штаммы, переместив их в свежий семимиллилитровой бульон MRS и инкубируя их анаэробно при 42 градусах Цельсия в течение 16 часов.
Повторите шаги, чтобы обеспечить жизнеспособный и превосходный рост клеток из культур LAB. Здесь показан рост клеточной морфологии штаммов S9 и LB6 lactobacillus bulgaricus, культивируемых по протоколу контроля качества, и штаммов S9 lactobacillus bulgaricus, культивируемых без протокола контроля качества. Штаммы были растянуты в трипликатах и анаэробно инкубировались при 42 градусах Цельсия в течение 72 часов.
При попытке этой процедуры обязательно дезинфицируйте трубки для культуры запасов из морозильной камеры 70% спиртом, чтобы предотвратить перекрестное загрязнение. Измерение оптической плотности культур роста всегда должно составлять от 0,7 до 0,9. Следуя этому протоколу, могут быть достигнуты эффективные лабораторные ферментации или операции биообработки с превосходным использованием культуры.
