Три клинических эксперимента показали, что трансплантация фекальной микробиоты несет в себе терапевтический потенциал для ряда заболеваний человека. Дальнейшие механистические исследования помогут перенести FMT со скамейки на кровать. Этот метод использует пероральный обход для маршрута доставки, что позволяет более точную объемную доставку и быстрое поглощение.
Для этого требуются лишь умеренные технические навыки. Продемонстрировать процедуру будет Сиоин Чжун, старший научный сотрудник нашей лаборатории. Начните с подготовки стерильных бумажных полотенец, тупых концевых щипцов и конических трубок по 50 миллилитрам.
Поместите несколько бумажных полотенец и щипцов в отдельные пакеты автоклава и автоклавируйте их при температуре 180 градусов Цельсия на сухом огне в течение 30 минут. Взвесьте стерильные конические трубки и запишите их вес на трубках. Включите шкаф биобезопасности в комнате для животных.
Возьмите автоклавную чистую клетку для мыши без подстилки и поместите ее в шкаф биобезопасности. Снимите крышку и стойку для еды и поместите их внутрь шкафа. Поместите несколько стерильных бумажных полотенец на дно клетки и поместите металлическую стойку обратно поверх клетки.
Определите подходящих по возрасту доноров фекалий и поместите клетку мыши в шкаф биобезопасности. Откройте клетку и осторожно схватите мышь-донора за хвост и поместите ее на металлическую стойку поверх чистой клетки. Поместите крышку клетки поверх стойки и подождите, пока животное испражняется.
Соберите фекальные гранулы и поместите их в стерильную коническую трубку объемом 50 миллилитров. Потяните гранулы по полу. Еще раз взвесьте трубку и рассчитайте вес фекальных гранул.
Приготовьте стерильный раствор, добавив 10% раствор глицерина к обычному физиологическому раствору. Добавьте 10 миллилитров этого раствора в коническую трубку на каждый грамм фекальных гранул. Гомогенизируйте эту смесь на низкой скорости три раза в течение 30 секунд, используя настольный гомогенизатор внутри вытяжного шкафа, чтобы повторно суспендировать фекалии.
Процедить фекальную суспензию через два слоя стерильной ватной марли. Храните фильтрат временно в холодильнике до шести часов или упаковывайте его в стерильные криогенные флаконы и храните в морозильной камере под минус 80 градусов. Тщательно очистите гомогенизатор или блендер в соответствии со стандартной процедурой.
Разморозьте замороженную фекальную суспензию на льду при использовании замороженных образцов. Смешайте размороженную фекальную суспензию путем вихря. Переложить свежую или размороженную фекальную суспензию на один миллилитр шприцев.
Взвесьте мышей и выберите правильный размер иглы и максимальный объем дозировки. Проверьте иглу, измерив длину от кончика носа мыши до нижней части грудины. Наполните шприц 10% глицерином в физиологической или фекальной суспензии и удалите пузырьки воздуха внутри шприца и иглы.
Поместите одну клетку для мыши в шкаф для биобезопасности. Снимите пластиковую крышку клетки и оставьте металлическую стойку на месте. Откройте металлическую стойку одной рукой.
Возьмите одну мышь за хвост и положите ее на металлическую стойку. Держите мышь за хвост одной рукой и используйте большой и средний пальцы другой руки, чтобы сдерживать животное, захватывая кожу через плечи. Осторожно вытяните голову животного назад и одной рукой держите голову на месте.
Поместите иглу на верхнюю часть языка внутри рта. Осторожно продвигайтесь вдоль верхнего поддона, пока игла не достигнет пищевода. Проведите иглу плавно одним движением.
Как только игла будет правильно помещена и проверена, медленно вводите материал, толкая шприц, прикрепленный к игле. После дозирования аккуратно вытащите иглу наружу. Отметьте мышь и верните ее в домашнюю клетку.
Наблюдайте за животным в течение пяти-10 минут, ища признаки затрудненного дыхания или дистресса. Снова наблюдайте за мышами через 12-24 часа после трансплантации фекальной микробиоты. Иммуноферментный анализ показал, что натрийуретический пептид типа В был заметно повышен в плазме мышей с дефицитом интерлейкина 10.
Трансплантация здоровой донорской фекальной микробиоты значительно смягчила увеличение уровня натрийуретических пептидов типа В. Эхокардиография обнаружила значительное снижение фракции выброса левого желудочка у мышей с дефицитом интерлейкина 10 по сравнению с мышами дикого типа. Снижение было значительно отменено трансплантацией фекальной микробиоты.
Эти данные свидетельствуют о том, что трансплантация здоровой донорской фекальной микробиоты смягчила сердечные нарушения, вызванные колитом. При попытке протокола, выбор правильной иглы gavage имеет важное значение. Гибкие пластиковые питательные трубки могут быть лучшим выбором для начинающих.
Также важно практиковать обращение с животными перед посещением.
