Ортотопическая трансплантация почек крыс является важной моделью для исследования механизма отторжения почечного аллотрансплантата в доклинических исследованиях и может помочь в разработке нового подхода к улучшению долгосрочной выживаемости почечных аллотрансплантатов. Сквозной анастомоз почечных сосудов при этой операции позволяет избежать ишемии нижней части тела и тромбоза нижней полой вены, в то время как анастомоз мочеточника сквозным туннельным методом уменьшает послеоперационное подтекание мочи и скручивание мочеточника. Этот метод дает представление об исследовании механизмов иммунного отторжения и повреждения почечных аллотрансплантатов после трансплантации почки.
Начните с разрезания живота с помощью хирургических ножниц вдоль средней линии от симфиза лобка до субксифоида. Затем откройте разрез с помощью втягивающего устройства. Выньте кишечник с правой стороны разреза и оберните их смоченной марлей, чтобы они не высохли.
Затем обнажите левую почку. Диссоциируют левую почечную артерию и вену с помощью микрощипцов и ватных тампонов под 20-кратным увеличением. При необходимости лигировать и трансектировать надпочечниковую вену и генитальную вену.
Диссоциируют мочеточник с помощью микрощипцов, сохраняя периферические соединительные ткани для обеспечения кровоснабжения мочеточника. Диссоциируют и клипируют или связывают аорту примерно на пять миллиметров выше левой почечной артерии с помощью сосудистого зажима или 4-0 полиамидного монофиламентного шва. Затем трансецировать левую почечную вену дистально к соединению левой генитальной вены и надпочечниковой вены.
Используя иглу скальпеля 24 калибра, промывайте почку от аорты ниже левой почечной артерии ледяным холодным раствором UW, дополненным 100 единицами на миллилитр гепарина до тех пор, пока кровь не исчезнет в цвете. Трансекция левой почечной артерии рядом с аортой, затем трансекция мочеточника рядом с мочевым пузырем и диссоциация почки с помощью микрощипцов и ножниц. Сохраняют донорскую левую почку в ледяном растворе UW.
При 20-кратном увеличении диссоциируют левую почечную артерию и почечную вену крысы-реципиента с помощью ватных тампонов и микрощипцов. При необходимости разжижайте надпочечниковую вену и генитальную вену. Обрежьте левую почечную артерию и почечную вену у корня с помощью микрососудистых зажимов, затем трансектируйте почечную артерию и почечную вену на расстоянии трех миллиметров от микрососудистого зажима.
Диссоциировать и лигировать левый мочеточник примерно на два-три сантиметра ниже почки с 8-0 полиамидный монофиламентный шов и перерезание его при перевязке. Резецировать родную левую почку реципиентов путем диссоциации почки с помощью микрощипцов и ножниц. Имплантировать донорскую почку в левую почечную ямку крысы-реципиента и положить лед вокруг имплантированной донорской почки.
Переключают на 45-кратное увеличение, затем анастомозируют доноров почечной артерии и почечной вены реципиентов почечной артерии и почечной вены по сквозной схеме с использованием 10-0 полиамидных монофиламентных швов. Чтобы анастомозировать почечную артерию прерванными швами, наложите стопочные швы в 12 и шестичасовых положениях анастомоза. Равноудаленно зашивают одну сторону анастомоза между двумя остающимися швами с двумя-тремя швами.
Переверните оставшиеся швы и аналогично зашить другую сторону анастомоза между двумя оставшимися швами с двумя-тремя швами. Чтобы анастомозировать почечную вену непрерывными швами, наложите оставшиеся швы в шести- и 12-часовом положениях анастомоза. Зашить одну сторону анастомоза из положения «12 часов» четырьмя-пятью швами с помощью бегущих швов.
Переверните оставшиеся швы и аналогично зашить другую сторону анастомоза из положения «шесть часов». Реперфузируйте донорскую почку, выпустив неинвазивный микрососудистый зажим почечной вены, определите места кровотечения и при необходимости сделайте дополнительные швы. Далее отпустите неинвазивный микрососудистый зажим почечной артерии, определите места кровотечения и при необходимости сделайте дополнительные швы.
Под 20-кратным увеличением перевязать или сшить конец донорского мочеточника 4-0 полиамидным монофиламентным швом в качестве буксировки, чтобы протащить конец через туннель мочевого пузыря реципиентов. Зафиксируйте донорский мочеточник с мочевым пузырем реципиентов путем сшивания адвентиции донорского мочеточника мышечным слоем мочевого пузыря реципиентов снаружи в четырех равноудаленных положениях с использованием 8-0 полиамидный монофиламентный шов. После этого переведите конец донорского мочеточника швом за пределы мочевого пузыря реципиентов и позвольте донорскому мочеточнику сжиматься обратно в мочевой пузырь реципиентов.
Поместите кишечник обратно в брюшную полость и закройте брюшной разрез непрерывными швами в мышечном слое, а затем слой кожи с помощью 4-0 полиамидного монофиламентного шва. Через десять недель после трансплантации окрашивание гематоксилина и эозина и периодическое окрашивание кислотным сдвигом выявили клубочковый склероз, интерстициальный фиброз, трубчатую атрофию и интерстициальный артериальный склероз в почечном аллотрансплантате в отличие от изотрансплантата почки. Серебряное окрашивание показало утолщение клубочковой базальной мембраны в почке аллотрансплантата по сравнению с изотрансплантатной почкой, что указывает на успех модели ортотопической трансплантации почки крыс.
Поскольку сосудистое отверстие почки очень тонкое, чтобы избежать неправильного наложения швов, не забудьте выполнить анастомоз на поле высокого увеличения.
