Таким образом, в нашем протоколе внутриколониальная инстилляция TNBS приводит к трансмуральному воспалению в месте инстилляции и механическому растяжению в сегменте, близком к воспалению. Таким образом, это имитирует стенотическую болезнь Крона. Поскольку проксимальный сегмент механически растянут, но не показывает видимого воспаления, сравнительное исследование проксимального сегмента и места воспаления помогает определить, играет ли механическое напряжение роль в колите Крона.
Предыдущие исследования сосредоточены только на месте воспаления. Наш протокол, работающий на разных участках в модели, подчеркивает критическую роль механического стресса в болезни Крона, особенно при стенозирующей болезни Крона. Для начала поместите крыс на стол для анестезии в лежачем положении.
Чтобы вызвать колит, вставьте полиуретановый катетер медицинского класса с открытым концом через анус примерно на семь-восемь сантиметров от анальной грани и осторожно закапывайте TNBS в толстую кишку. Вводите фиктивный контроль крысам с 250 микролитрам физиологического раствора. Чтобы помочь распределению TNBS или физиологического раствора и избежать разливов, держите крыс в лежачем положении с головой, обращенной вниз примерно под углом 30 градусов, с закрытым анусом в течение двух минут.
Откройте брюшко крысы с помощью хирургических ножниц и щипцов. Осторожно удалите всю толстую кишку над анальным каналом и немедленно перенесите толстую кишку в ледяной буфер HBSS 1x. Выпрямите двоеточие в буфере и измерьте длину двоеточия с помощью линейки.
Возьмите нейлоновую нить и обведите ее вокруг толстой кишки, чтобы измерить внешнюю окружность сегментов толстой кишки у контрольных и обработанных TNBS крыс. Возьмите ткани полной толщины для гистологии. Разрежьте толстую кишку вдоль брыжеечной доски и тщательно очистите толстую кишку буфером HBSS.
Оцените оценку толстой кишки на основе макроскопического воспаления на основе предопределенных критериев с минимальными изменениями. Соберите образцы ткани толстой кишки у крыс, обработанных TNBS, в местах P, I и D.Site P - это часть за два-три сантиметра до орального края места воспаления. Участок I - это место воспаления, где закапывается TNBS, обычно в четырех-шести сантиметрах от конца толстой кишки.
Наконец, участок D представляет собой участок от одного до двух сантиметров дистальнее аборального края участка воспаления. Внутриколониальная инстилляция ТНБС у крыс вызывала локализованное трансмуральное воспаление длиной около двух сантиметров с утолщенной стенкой кишечника и суженным просветом в месте закапывания в дистальной части толстой кишки. Место инстилляции TNBS было названо участком I.As результатом трансмурального воспаления и стеноза, как воспаление, так и механическое напряжение присутствовали в месте I.Стеноз в месте I привел к выраженному растяжению просвета в сегменте, близком к месту инстилляции TNBS, называемом сайтом P. Окружность толстой кишки была значительно увеличена в сайтах P и I по сравнению с фиктивной контрольной толстой кишкой.
Несмотря на механическое растяжение, участок P не показывал видимого воспаления. Напротив, сегмент толстой кишки дистальнее инстилляции ТНБС, называемый участком D, не представлял ни воспаления, ни механического растяжения. Макроскопическая оценка воспаления в месте I у крыс, получавших TNBS, была резко увеличена по сравнению с фиктивной контрольной группой на участках P и D крыс с колитом.
Показатели воспаления в местах P и D не были значительно увеличены по сравнению с фиктивными. Поэтому важно изучать не только участок I, но и участки P и D в модели, так как это помогает распознать патогенное значение механического напряжения при болезни Крона. Чтобы дополнительно определить, является ли механическое напряжение патогенным фактором воспаления кишечника, можно также попытаться освободить механическое растяжение, кормя животных исключительно жидкой диетой, и посмотреть, помогает ли это с воспалением и функцией кишечника.
