Quindi, nel nostro protocollo, l'instillazione intra-colonica di TNBS porta all'infiammazione transmurale nel sito di instillazione e alla distensione meccanica nel segmento prossimale all'infiammazione. Quindi questo imita la malattia di Crohn stenotica. Poiché il segmento prossimale è meccanicamente disteso ma non mostra un'infiammazione visibile, uno studio comparativo del segmento prossimale e del sito di infiammazione aiuta a determinare se lo stress meccanico svolge un ruolo nella colite di Crohn.
Studi precedenti si concentrano solo sul sito di infiammazione. Il nostro protocollo che lavora su diversi siti del modello evidenzia un ruolo critico dello stress meccanico nella malattia di Crohn, in particolare nella malattia di Crohn stenotica. Per iniziare, posizionare i ratti sul tavolo dell'anestesia in posizione supina.
Per indurre la colite, inserire un catetere poliuretanico di grado medico, aperto, attraverso l'ano per circa sette-otto centimetri dal bordo anale e instillare delicatamente TNBS nel colon. Somministrare i ratti di controllo fittizi con 250 microlitri di soluzione salina. Per aiutare la distribuzione di TNBS o soluzione salina ed evitare fuoriuscite, mantenere i ratti in posizione supina con la testa rivolta verso il basso con un angolo di circa 30 gradi, con l'ano chiuso per due minuti.
Aprire l'addome del ratto usando forbici e pinze chirurgiche. Rimuovere con attenzione l'intero colon sopra il canale anale e trasferire immediatamente il colon in un tampone HBSS 1x ghiacciato. Raddrizzare i due punti nel buffer e misurare la lunghezza dei due punti utilizzando un righello.
Prendi un filo di nylon e giralo intorno al colon per misurare la circonferenza esterna dei segmenti del colon in controllo e dei ratti trattati con TNBS. Prendi tessuti a tutto spessore per l'istologia. Tagliare il colon lungo la tavola mesenterica e pulire accuratamente il colon con il tampone HBSS.
Valutare il colon per il punteggio di infiammazione macroscopica in base ai criteri predefiniti con modifiche minime. Raccogliere campioni di tessuto del colon da ratti trattati con TNBS nei siti P, I e D.Site P è la porzione da due a tre centimetri prima del margine orale del sito di infiammazione. Il sito I è il sito di infiammazione in cui viene instillato il TNBS, in genere da quattro a sei centimetri dalla fine del colon.
Infine, il sito D è la porzione da uno a due centimetri distale al margine aborale del sito di infiammazione. L'instillazione intra-colonica di TNBS nei ratti ha indotto un'infiammazione transmurale localizzata di circa due centimetri di lunghezza con parete intestinale ispessita e lume ristretto nel sito di instillazione nel colon distale. Il sito di instillazione di TNBS è stato indicato come sito I.As risultato di infiammazione transmurale e stenosi, sia l'infiammazione che lo stress meccanico erano presenti nel sito I.La stenosi nel sito I ha portato a una marcata distensione del lume nel segmento prossimale al sito di instillazione di TNBS, indicato come sito P.La circonferenza del colon era significativamente aumentata nei siti P e I rispetto al colon di controllo fittizio.
Mentre meccanicamente disteso, il sito P non ha mostrato infiammazione visibile. Al contrario, il segmento del colon distale all'instillazione di TNBS indicato come sito D non presentava né infiammazione né distensione meccanica. Il punteggio macroscopico dell'infiammazione nel sito I nei ratti trattati con TNBS è stato notevolmente aumentato rispetto ai controlli fittizi nei siti P e D dei ratti colite.
I punteggi di infiammazione nei siti P e D non sono stati significativamente aumentati rispetto alla finzione. Quindi è importante studiare non solo il sito I ma i siti P e D nel modello, in quanto ciò aiuta a riconoscere il significato patogeno dello stress meccanico nella malattia di Crohn. Per determinare ulteriormente se lo stress meccanico è un fattore patogeno nell'infiammazione intestinale, si può anche provare a rilasciare la distensione meccanica alimentando gli animali esclusivamente con una dieta liquida e vedere se questo aiuta con l'infiammazione e la funzione intestinale.
