אז בפרוטוקול שלנו, הטמעה תוך-מעיונית של TNBS מובילה לדלקת טרנסמולרית באתר ההחדרה וההתנפחות המכנית במגזר הקרוב לדלקת. אז זה מחקה מחלת קרוהן קצרנית. כמו קטע פרוקסימלי הוא נפוח מכנית אבל לא מראה דלקת גלויה, מחקר השוואתי של קטע הפרוקסימלי ואתר הדלקת מסייע לקבוע אם מתח מכני ממלא תפקיד קוליטיס של קרוהן.
מחקרים קודמים מתמקדים באתר הדלקת בלבד. הפרוטוקול שלנו עובד על אתרים שונים במודל מדגיש תפקיד קריטי של מתח מכני במחלת קרוהן, במיוחד במחלת קרוהן סטנוטית. כדי להתחיל, מניחים את החולדות על שולחן ההרדמה בתנוחה סופית.
כדי לגרום קוליטיס, להכניס כיתה רפואית, פתוחה, קטטר פוליאוריטן דרך פי הטבעת במשך כשבעה עד שמונה סנטימטרים מן הסף אנאלי, בעדינות להחדיר TNBS לתוך המעי הגס. נהל את חולדות הבקרה המזויפות עם 250 מיקרוליטרים של תמיסת מלח. כדי לסייע בהפצת TNBS או מלוחים ולהימנע מדליפות, לשמור על החולדות בתנוחה עלובה עם הראש שלהם פונה כלפי מטה בזווית של כ 30 מעלות, עם פי הטבעת סגור במשך שתי דקות.
פתח את בטן החולדה באמצעות מספריים ומלקחיים בדרגה כירורגית. הסר בזהירות את המעי הגס כולו מעל התעלה האנאלית, והעבר את המעי הגס מיד למאגר HBSS קר כקרח 1x. יישר את נקודתיים במאגר ומדוד את אורך המעי הגס באמצעות סרגל.
קח חוט ניילון, והקף אותו סביב המעי הגס כדי למדוד את ההיקף החיצוני של מקטעי המעי הגס בשליטה וחולדות שטופלו ב- TNBS. קח רקמות בעובי מלא להיסטולוגיה. חותכים את המעי הגס לאורך הלוח המזנטרי, ולנקות את המעי הגס ביסודיות עם מאגר HBSS.
להעריך את המעי הגס עבור ציון דלקת מקרוסקופית בהתבסס על הקריטריונים המוגדרים מראש עם שינויים מינימליים. לאסוף דגימות רקמה המעי הגס מחולדות שטופלו TNBS באתרים P, I, ו- D.Site P הוא החלק שניים עד שלושה סנטימטרים לפני השוליים האוראליים של אתר הדלקת. אתר I הוא אתר הדלקת שבו TNBS הוא החדיר, בדרך כלל ארבעה עד שישה סנטימטרים מקצה המעי הגס.
לבסוף, אתר D הוא החלק אחד עד שני סנטימטרים דיסטלי לשוליים של ביטול של אתר הדלקת. הטמעה תוך-מעיונית של TNBS בחולדות גרמה לדלקת טרנסמורלית מקומית באורך של כשני ס"מ עם דופן מעי מעובה ולומן מצומצם באתר ההחדרה במעי הגס הדיסטלי. האתר של הטמעת TNBS כונה אתר I.As תוצאה של דלקת טרנסמולרית והיצרות, הן דלקת והן מתח מכני היו נוכחים באתר I.The היצרות באתר I.The היצרות באתר אני הובילה להתנפחות לומן ניכרת במגזר הקרוב לאתר של הטמעת TNBS, המכונה אתר P.The היקף המעי הגס גדל באופן משמעותי באתרים P ואני השווה נקודתיים שליטה מזויפת.
בעוד נפוח מכנית, אתר P לא הראה דלקת גלויה. להיפך, קטע המעי הגס דיסטלי להחדרת TNBS המכונה אתר D הציג לא דלקת ולא התנפחות מכנית. הציון המקרוסקופי של דלקת באתר I בחולדות שטופלו ב- TNBS גדל באופן דרמטי בהשוואה לבקרות מזויפות באתרים P ו- D של חולדות קוליטיס.
ציוני הדלקת באתרים P ו- D לא גדלו באופן משמעותי בהשוואה לזיוף. לכן חשוב ללמוד לא רק אתר I אלא אתרים P ו- D במודל, שכן זה עוזר לזהות את המשמעות הפתוגנית של מתח מכני במחלת קרוהן. כדי לקבוע עוד יותר אם מתח מכני הוא גורם פתוגניים בדלקת המעיים, אפשר גם לנסות לשחרר נפיחות מכנית על ידי האכלת בעלי החיים אך ורק עם דיאטה נוזלית ולראות אם זה עוזר עם דלקת ותפקוד המעיים.
