لذلك في بروتوكولنا ، يؤدي التقطير داخل القولون من TNBS إلى التهاب عبر الجدارية في موقع التقطير والانتفاخ الميكانيكي في الجزء القريب من الالتهاب. لذلك هذا يحاكي مرض كرون الضيق. نظرا لأن الجزء القريب منتفخ ميكانيكيا ولكنه لا يظهر التهابا مرئيا ، فإن دراسة مقارنة للجزء القريب وموقع الالتهاب تساعد على تحديد ما إذا كان الإجهاد الميكانيكي يلعب دورا في التهاب القولون كرون.
تركز الدراسات السابقة على موقع الالتهاب فقط. يسلط بروتوكولنا الذي يعمل على مواقع مختلفة في النموذج الضوء على الدور الحاسم للإجهاد الميكانيكي في مرض كرون ، وخاصة في مرض كرون الضيق. للبدء ، ضع الفئران على طاولة التخدير في وضع ضعيف.
للحث على التهاب القولون ، أدخل قسطرة البولي يوريثين ذات المستوى الطبي المفتوح من خلال فتحة الشرج لمدة سبعة إلى ثمانية سنتيمترات تقريبا من حافة الشرج ، وغرس TNBS بلطف في القولون. إدارة الفئران السيطرة الوهمية مع 250 ميكرولتر من المياه المالحة. للمساعدة في توزيع TNBS أو المالحة وتجنب الانسكابات ، حافظ على الفئران في وضع ضعيف مع توجيه رأسها لأسفل بزاوية 30 درجة تقريبا ، مع إغلاق فتحة الشرج لمدة دقيقتين.
افتح بطن الفئران باستخدام مقص وملقط جراحي. قم بإزالة القولون بالكامل بعناية فوق القناة الشرجية ، وانقل القولون على الفور إلى المخزن المؤقت 1x HBSS البارد على الجليد. قم بتصويب القولون في المخزن المؤقت، وقم بقياس طول القولون باستخدام مسطرة.
خذ خيطا من النايلون ، وقم بتدويره حول القولون لقياس المحيط الخارجي لأجزاء القولون في السيطرة والفئران المعالجة ب TNBS. خذ أنسجة كاملة السماكة لعلم الأنسجة. اقطع القولون على طول لوح المساريقي ، ونظف القولون جيدا باستخدام المخزن المؤقت HBSS.
تقييم القولون للحصول على درجة الالتهاب العياني بناء على المعايير المحددة مسبقا مع الحد الأدنى من التعديلات. جمع عينات أنسجة القولون من الفئران المعالجة ب TNBS في المواقع P و I و D.Site P هو الجزء من سنتيمترين إلى ثلاثة سنتيمترات قبل الهامش الفموي لموقع الالتهاب. الموقع الأول هو موقع الالتهاب حيث يتم غرس TNBS ، وعادة ما يكون من أربعة إلى ستة سنتيمترات من نهاية القولون.
وأخيرا ، فإن الموقع D هو الجزء من واحد إلى سنتيمترين بعيدا عن الهامش الفموي لموقع الالتهاب. أدى التقطير داخل القولون ل TNBS في الفئران إلى التهاب موضعي عبر الجدارية يبلغ طوله حوالي سنتيمترين مع جدار الأمعاء السميك وضيق التجويف في موقع التقطير في القولون البعيد. تمت الإشارة إلى موقع تقطير TNBS باسم الموقع I.As نتيجة للالتهاب والتضيق عبر الجدارية ، وكان كل من الالتهاب والإجهاد الميكانيكي موجودين في الموقع I.أدى التضيق في الموقع الأول إلى انتفاخ ملحوظ في التجويف في الجزء القريب من موقع تقطير TNBS ، المشار إليه باسم الموقع P.زاد محيط القولون بشكل كبير في الموقعين P و I مقارنة بالقولون الوهمي.
على الرغم من انتفاخه ميكانيكيا ، إلا أن الموقع P لم يظهر التهابا مرئيا. على العكس من ذلك ، فإن الجزء الاستعماري البعيد عن تقطير TNBS المشار إليه باسم الموقع D لم يقدم أي التهاب أو انتفاخ ميكانيكي. زادت درجة الالتهاب العيانية في الموقع الأول في الفئران المعالجة ب TNBS بشكل كبير مقارنة بالضوابط الزائفة في الموقعين P و D لفئران التهاب القولون.
لم يتم زيادة درجات الالتهاب في المواقع P و D بشكل كبير مقارنة بالخدعة. لذلك من المهم دراسة ليس فقط الموقع الأول ولكن المواقع P و D في النموذج ، لأن هذا يساعد على التعرف على الأهمية المسببة للأمراض للإجهاد الميكانيكي في مرض كرون. لمزيد من التحديد ما إذا كان الإجهاد الميكانيكي عاملا مسببا للأمراض في التهاب الأمعاء ، قد يحاول المرء أيضا إطلاق الانتفاخ الميكانيكي عن طريق إطعام الحيوانات حصريا بنظام غذائي سائل ومعرفة ما إذا كان هذا يساعد في الالتهاب ووظيفة الأمعاء.
