Биобанки являются важными ресурсами для фундаментальных трансляционных и клинических исследований, но они также выступают в качестве ключевых игроков, связывающих академические исследования и фармацевтическо-биотехнологическую промышленность. В этом протоколе представлены стандартные операционные процедуры биобанка в IAO, полностью сертифицированного биобанка, работающего в соответствии с новейшим стандартом биотехнологии, биобанкинга и общими требованиями к биобанкам. Наличие высококачественных биообразцов от больных раком имеет решающее значение для разработки диагностических инструментов следующего поколения, и терапевты адаптируют его к отдельным пациентам.
Биобанкинг биологического материала от онкологического больного требует специализированного персонала и многочисленных сертификаций. Персонал должен постоянно обучаться и обновляться. Поэтому этот протокол должен быть отправной точкой для тех, кто желает создать биобанк.
Для начала транслируем образовательный мультфильм в залах ожидания, чтобы проинформировать пациентов о важности воздействия РПА. Предоставьте закладки гаджетов всем пациентам. Используйте программное обеспечение LIMS для отслеживания всех биологических образцов.
Идентифицируйте пациентов с помощью кодов. Назначьте каждому человеку уникальный код, который соответствует номеру медицинской карты. Проверьте, включен ли пациент в клиническое исследование или в определенный утвержденный исследовательский проект, правильно заполнив поле исследовательского проекта в каждом профиле пациента.
Сообщите техническим специалистам, если риск заражения неизвестен. Выбрасывайте образцы с положительными результатами или неизвестными рисками. Для свежих образцов зарегистрируйте образцы крови в программном обеспечении биобанка.
Пометьте вакутайнеров идентификационным кодом биобанка и доставьте их авторизованным пользователям. Для замороженных образцов, хранящихся в биобанке, подготовьте две криобанковские 2D-трубки с покрытием каждая из 900 микролитров крови. Зарегистрируйте аликвоты в программном обеспечении биобанка.
Поместите их на указанную табличку со штрих-кодом и храните при температуре минус 80 градусов по Цельсию, чтобы обеспечить постоянную температуру. Перелейте кровь из пробирок для сбора ЭДТА в пустую стерильную коническую трубку объемом 50 миллилитров и разбавьте ее с помощью стерильного 1X PBS. Используйте PBS для промывания кровяной трубки.
Центрифугируйте трубки при 400 RCF в течение 30 минут при 20 градусах Цельсия и обработайте трубки под капотом биологической опасности. Восстановите средний белый слой, содержащий МПК, с помощью пипетки Пастера и поместите его в новую стерильную коническую трубку объемом 50 миллилитров. Добавьте до 45 миллилитров PBS для мытья PBMC.
Смешайте и центрифугируйте при 400 RCF в течение 10 минут при четырех градусах Цельсия. Извлеките гранулу и повторно суспендируйте ее в PBS. Затем подсчитайте ячейки с помощью одноразовых камер Буркера.
Повторите промывку PBS для PBMC, как описано в текстовой рукописи. Разбавьте PBMCs в морозильной среде и подготовьте криобанковые трубки с 2D-покрытием, переместив один миллилитр повторно суспендированных клеток в каждую криотрубку. Поместите образцы в специальную криобоксу и храните их при минус 80 градусах Цельсия как можно скорее.
Центрифугируйте вакутайнер, содержащий образцы цельной крови по 2000 г в течение 10 минут при четырех градусах Цельсия. Удалите верхний слой плазмы с помощью трехмиллилитровой пипетки Пастера и переложите его в стерильную коническую трубку объемом 15 миллилитров. Затем центрифугируют при 16 000 RCF в течение 10 минут при четырех градусах Цельсия, чтобы устранить загрязняющие клетки крови.
Переведите плазму в один миллилитр криобанк с 2D-покрытием. Зарегистрируйте аликвоты в программном обеспечении биобанка. Поместите их на специальную табличку со штрих-кодом и храните при минус 80 градусах, чтобы обеспечить постоянную температуру.
Проведите экспертизу образцов тканей патологоанатомом, чтобы определить, достаточен ли материал, который не является необходимым для диагностических процедур, для исследовательских целей. По возможности соберите даже непатологический аналог патологической ткани. Поместите образцы в стерильные клеточные культуры чашки Петри с маркировкой P и NP. Держите ткань на льду при четырех градусах Цельсия и разделите ее на три части каждая.
A, B и C, если имеется достаточно материала. Для образцов свежих тканей, помеченных как A, поместите свежие аликвоты ткани P и NP в пробирки с соответствующей питательной средой, определенной в каждом конкретном протоколе, и отправьте их во внешние исследовательские подразделения. Для образцов тканей OCT, помеченных как B, заполните их ОКТ-смолой и немедленно поместите их в аппарат для замораживания вспышки при минус 80 градусах Цельсия.
Для образцов тканей, помеченных как C, поместите оставшиеся образцы тканей в криобанковские 2D-трубки с покрытием в аппарате флэш-замораживания. Храните пластины при минус 80 градусах Цельсия. В общей сложности 38 446 аннотированных биологических жидких биопсий и 10 205 образцов тканей были собраны с апреля 2012 года по декабрь 2021 года.
Количество собранных образцов, особенно тканей с 2020 по 2021 год, сократилось из-за пандемии COVID-19 и связанного с этим сокращения онкологических процедур. Подробно проанализированы собранные образцы, полученные из отделений урологии, гинекологии, сонологии, а также отделов хирургии головы и шеи, брюшной полости, таза и торакальной хирургии. Наибольшее количество образцов тканей было собрано из опухолей молочной железы.
Коллекция других биологических образцов, таких как моча, стул и щечные мазки, значительно увеличилась после спроса на протяжении многих лет. Этот вариант обеспечивает фундаментальную платформу для хранения биологического образца и улучшает воспроизводимость программ исследования рака. Эти образцы могут быть использованы для различных исследовательских приложений, таких как секвенирование следующего поколения или масс-спектрометрия.
Наша платформа способна внедрять новые алгоритмы искусственного интеллекта в трансляционные исследования с потенциалом изменить способ лечения больных раком.
