Этот протокол нацелен на ограниченный вопрос о поставках органов трансплантации, облегчая оценку различных кардиопротекторных стратегий кондиционирования, чтобы позволить использовать сердца, пожертвованные после смерти кровообращения. Поместите животное на грелку, установленную на средний. После подтверждения отсутствия ответа на щепотку нота в анестезированной взрослой крысы, вставьте ректальный зонд температуры.
Прикрепите датчик оксиметра трансдермального импульса к задней лапе и накройте крысу абсорбциальной прокладкой для поддержания температуры тела. Сделать три-четыре сантиметра средней линии кожи разрез в шее, и использовать тупой кончик изогнутые ножницы, чтобы тупой вскрыть подкожной ткани, чтобы разоблачить правой стернохиоидной мышцы. Используя нетравматические миппы, двигайте мышцы с боковой стороны до тех пор, пока не будут выявлены правая сонная артерия, яремная вена и блуждающий нерв.
Используйте ножницы, чтобы тщательно отделить блуждающий нерв от сонной артерии. Ввините 2 000 международных единиц на килограмм гепарина в правую яремную вену, применяя давление на место инъекции после опрокидывания иглы, чтобы избежать утечки крови. Используйте изогнутые типсы, чтобы пройти два 5-0 шелковых швов вокруг сонной артерии.
Твердо приложите дистальный шов, чтобы окклюдить сонной артерии на верхний аспект открытой артерии, сохраняя проксимальный шов развязали, и место крысы под стерео микроскопом. Затем используйте ножницы микрохирургии, чтобы тщательно сделать один миллиметр разреза над передней стенкой сонной артерии, и вставить 22-го калибра, один дюйм закрыты внутривенного катетера к аорты арки. Для этих шагов настоятельно рекомендуется использовать инструменты увеличения и микроперегибательки.
Чистое поле может быть достигнуто путем натяжения проксимального шва, чтобы избежать кровотечения. Сердечное пожертвование необходимо для сборки бывшего кардиоплегии аппарата vivo. Чтобы инициировать протокол DCD, сначала обыкновить животное, а затем использовать комаров тиски для зажима трахеи, начиная агональной фазы.
Начните считать функциональный WIT, когда пик систолического кровяного давления падает ниже 30 миллиметров ртути или асистола или фибрилляции желудочков появляется, в зависимости от того, что на первом месте. В конце WIT, выполнить медиальной стернотомии, сохраняя грудную клетку открытой с альм ретрактора, если это необходимо. Отделяйте сердце от легочных вен и других грудных структур для завершения кардиэктомии.
Немедленно погрузите сердце в ледяной раствор Krebs для быстрой транспортировки в систему ex vivo. Используйте 2-0 шелковый шов, чтобы плотно исправить аорту в аппарат Langendorff, а затем открыть стопкок. Теперь полностью откройте поток к канюле и начните начальное время перепроверки и стабилизации.
Поверните сердце так предсердие сталкивается датчик давления, и вскрыть легочные вены, чтобы расширить левый желудочковый предсердие открытия в случае необходимости. Затем вставьте латексный шарик, подключенный к датчику давления, убедившись, что воздушный шар полностью расположен внутри желудочка. Медленно заполните воздушный шар солевым раствором, пока конец диастолического давления не достигнет 15 миллиметров ртути.
Вставьте развивающийся электрод в переднее лицо сердца, не прокалыв коронарные сосуды. После того, как спонтанное избиение наблюдается, установить ходить до 300 ударов в минуту. После 10 минут стабилизации, инициировать непрерывную внутрижелудочковую запись измерения давления, чтобы начать фазу восстановления и оценки.
Через час удалите сердце из аппарата Лангендорфа и используйте прямое высокоуглеродное стальное лезвие для удаления атрии. С правом желудочка лицом вниз, сократить от одного до двух миллиметров толщиной поперечных желудочков ломтиками. Акциз правого желудочка из третьего ломтика ткани, и оснастки заморозить левый желудочек для вниз по течению биохимических анализов.
Погрузите оставшиеся секции в свежеприготовленный раствор 5%TTC в PBS в течение 10 минут при 37 градусах Цельсия. На следующее утро, мыть образцы два раза в свежем PBS и погрузить образцы в свежем PBS для визуализации. Жизнеспособные ткани будут выглядеть кирпично-красного цвета.
После экстубации, кровяное давление быстро падает в предсказуемой картине и ожидаемое время до смерти составляет менее пяти минут. Здесь показано среднее давление по сравнению с кривыми времени в начале восстановления после нуля, 10 и 15 минут WIT. Со временем контрактная функция улучшится, использование коротких периодов ВИТ позволит вернуться к нормальной работе, а морфологический ущерб обнаружить не будут.
Использование кондиционирующим агентом, добавленным с кардиоплегией и на этапе стабилизации, показало, что повреждения, генерируемые 15 минутами WIT в этой модели, податливы к модуляции кардиопротекторными агентами. Этот метод позволяет полностью контролировать все соответствующие переменные и фармакологические и нефармакологические испытания вмешательства и может быть воспроизведен в более крупных моделях, облегчая клинический перевод.
