Этот протокол может обеспечить новую стратегию для эффективной идентификации подлинных материалов Clematidis armandii caulis и его фальсификаторов. Этот метод может быть использован в исследованиях качества лекарственного материала и является справочным материалом для изучения стандартов качества других китайских лекарственных материалов. Для начала пробоподготовки сырье измельчают до однородного размера частиц, пропуская их через нейлоновую сетку с соответствующим внутренним диаметром.
При переносе точно взвешивали два грамма молотого сырья в закупоренную коническую колбу объемом 50 миллилитров перед добавлением в колбу 50 миллилитров метанола. Поставьте пробку на колбу в ультразвуковом нагреве при 600 Вт и 40 килогерцах в течение 30 минут. В конце инкубации процедите раствор лекарственного экстракта через фильтровальную бумагу.
После процеживания переложите четыре миллилитра раствора метанола, содержащего лекарственные экстракты, в объемную колбу объемом 10 миллилитров. Затем добавьте в него шесть миллилитров воды и перемешайте раствор. Дайте раствору отстояться в течение 10 минут.
Для ВЭЖХ-анализа образцов. Начните с подготовки подвижных фаз и установите программу градиента ВЭЖХ, как описано в рукописи. Отфильтруйте образец через 0,45-микропористую фильтрующую мембрану и подвергните его анализу ВЭЖХ.
Для каждого образца выполняйте анализ шесть раз в день. Чтобы оценить стабильность пробного раствора, анализируют тот же образец раствора, хранящегося при комнатной температуре в течение 0, 2, 4, 6, 8, 12 и 24 часов после приготовления. Возьмите шесть реплик одного и того же образца и обнаружите его отпечаток пальца в ВЭЖХ.
Импортируйте соответствующие данные в программное обеспечение под названием «Система оценки сходства хроматографических отпечатков пальцев традиционной китайской медицины» или SESCF TCM версии 2012 года. Импортируйте время хранения и пиковую зону для всех 10 партий подлинных образцов Chuanmutong, а также пяти партий фальсификатов в SESCF TCM для анализа. В главном меню нажмите на заданный эталонный спектр и перейдите в окно настроек параметров, чтобы установить эталонный хроматографический отпечаток аутентичного вида Chuanmutong в качестве эталона.
Затем установите метод генерации контрольного спектра в качестве медианного метода с шириной временного окна 0,5. Затем щелкните многоточечную калибровку в главном меню, выберите пики, а затем выберите опцию сопоставления пиков как отмеченные пики. Наконец, нажмите «Рассчитать сходство», чтобы выполнить анализ сходства образцов на основе отпечатков пальцев эталонной хроматограммы Chuanmutong.
Для выполнения системного кластерного анализа откройте соответствующее программное обеспечение для статистического анализа и нажмите на файл, чтобы импортировать данные 10 партий аутентичных образцов и пяти партий фальсификатов в программное обеспечение. В меню На вкладке Классификация выберите пункт Анализ и кластеризация системы. Выберите общие пиковые области из 10 партий подлинных образцов и пяти партий фальсификатов в качестве переменных.
Задайте для числа кластеров значение четыре. Затем щелкните Метод, чтобы выбрать Метод кластеризации в качестве межгруппового соединения. Выберите интервал измерения в качестве корреляции Пирсона и используйте вкладку Okay для рисования карты кластерного анализа.
Для анализа основных компонентов или PCA откройте программное обеспечение для анализа данных. Нажмите на файл в меню, и создайте новый обычный проект. Импортируйте пиковую область из 12 общих пиков в Excel или аналогичную электронную таблицу из системы ВЭЖХ.
Нажмите кнопку Готово, чтобы завершить импорт данных. Чтобы задать тип модели с помощью PCA, нажмите кнопку Создать, чтобы создать новую модель, а затем поместите данные с помощью автоподбора и добавления вкладок. Перейдите к баллам, чтобы получить карту результатов PCA.
Использовать ортогональный анализ дискриминации с частичными наименьшими квадратами или OPLSDA. Создайте карту оценок PCA, как показано ранее. Задайте тип модели с помощью OPLSDA, щелкнув New и New As model one Прежде чем перейти к масштабированию при выборе par для всех, затем нажмите AutoFit в оценках, чтобы создать карту оценок OPLSDA.
Чтобы оценить важность переменной и проекцию, перейдите в меню программного обеспечения для анализа данных и перейдите в раздел Анализ, а затем установите число равным 200 под каждой мутацией. Получите значения квадрата R и квадрата Q из балла OPLSDA и нажмите на VIP и VIP прогноз, чтобы получить VIP-карту. Отпечатки ВЭЖХ 10 подлинных образцов Chuanmutong показали 12 различных общих пиков, из которых относительно большие и хорошо разрешенные.
Пиковое число 10 использовалось в качестве эталонного пика для оценки относительного времени удержания остальных пиков. Подлинные образцы продемонстрировали степень сходства, очень близкую к той, которая подразумевает высокое сходство в хорошей консистенции. Однако степень сходства между пятью партиями фальсификатов и контрольным чуаньмутонгом была довольно низкой.
Было отмечено, что отпечатки пальцев ВЭЖХ пяти фальсификаторов отличаются от подлинных образцов, главным образом в регионе, где время хранения составляет от 28 до 55 минут. PCA показал очевидное сходство между аутентичными разновидностями и их отличие от фальсификатов, за исключением фальсифицированного CC.Аналогичные результаты были также получены из кластерного анализа, когда классификационное расстояние составляло 20. Матрица баллов, полученная из OPLSDA, не показала пересечения между точками выборки подлинных образцов и фальсификатами.
Опять же, фальсифицированный CC напоминал аутентичные сорта больше, чем другие фальсификаторы. Согласно VIP-карте, пики, имеющие значения больше единицы, были идентифицированы как основные маркерные компоненты, вызывающие разницу между подлинными образцами и фальсификатами. Содержание бета-ситостерина, активного компонента, обнаруженного в Чуаньмутонге, было обнаружено во всех пяти партиях фальсификатов, но содержание сильно варьировалось.
Этот протокол устанавливает различные методы анализа, чтобы отразить всю информацию о лекарственных материалах с разных точек зрения и во всем способе оценки подлинности лекарственных материалов Chuanmutong.
