Bu protokol, Akasya armandii caulis ve zina yapanların gerçek materyallerini etkili bir şekilde tanımlamak için yeni bir strateji sağlayabilir. Bu yöntem tıbbi malzeme kalitesi araştırmalarında kullanılabilir ve diğer Çin tıbbi malzemelerinin kalite standartlarını incelemek için bir referans sağlar. Numune hazırlamaya başlamak için hammaddeyi, uygun bir iç çapa sahip naylon bir ağdan geçirerek eşit partikül boyutuna kadar öğütün.
Şişeye 50 mililitre metanol eklemeden önce öğütülmüş hammaddenin iki gramını tıpalı 50 mililitrelik konik şişeye doğru bir şekilde aktarın. Durdurucuyu şişeye 30 dakika boyunca 600 watt ve 40 kilohertz'de ısıtılmış ultrasonik olarak yerleştirin. Kuluçka sonunda, tıbbi ekstrakt çözeltisini filtre kağıdından süzün.
Süzdükten sonra, tıbbi ekstraktları içeren metanol çözeltisinin dört mililitresini 10 mililitrelik hacimsel bir şişeye aktarın. Sonra altı mililitre su ekleyin ve çözeltiyi karıştırın. Çözümün 10 dakika boyunca yerleşmesine izin verin.
Numunelerin HPLC analizi için. Mobil aşamaları hazırlayarak başlayın ve HPLC gradyan programını makalede açıklandığı gibi ayarlayın. Numuneyi 0,45 mikron mikro gözenekli filtre membranından filtreleyin ve HPLC analizine tabi tutun.
Her örnek için günde altı kez analiz yapın. Numune çözeltisinin kararlılığını değerlendirmek için, oda sıcaklığında depolanan aynı numune çözeltisini hazırlıktan sonraki 0, 2, 4, 6, 8, 12 ve 24 saat boyunca analiz edin. Aynı numunenin altı kopyasını alın ve parmak izini HPLC'de tespit edin.
İlgili verileri, Geleneksel Çin Tıbbının Kromatografik Parmak İzlerinin Benzerlik Değerlendirme Sistemi veya SESCF TCM sürüm 2012 adlı yazılıma aktarın. 10 parti otantik Chuanmutong örneğinin yanı sıra beş parti zina maddesinin tümü için tutma süresini ve tepe alanını analiz için SESCF TCM'ye aktarın. Ana menüde, referans spektrumunu ayarla'ya tıklayın ve otantik Chuanmutong türlerinin referans kromatografik parmak izini referans olarak ayarlamak için parametre ayarları penceresine gidin.
Ardından, kontrol spektrumu oluşturma yöntemini, zaman penceresi genişliği 0,5 olan medyan yöntem olarak ayarlayın. Ardından, ana menüde çok noktalı kalibrasyon'a tıklayın, tepe noktalarını seçin ve ardından tepe noktası eşleştirme seçeneğini işaretli tepe noktaları olarak belirleyin. Son olarak, Chuanmutong'un referans kromatogram parmak izlerine dayalı olarak numunelerin benzerlik analizini gerçekleştirmek için Benzerliği Hesapla'yı tıklatın.
Sistemik küme analizi yapmak için ilgili istatistiksel analiz yazılımını açın ve 10 parti otantik numune ve beş parti zina yapanın verilerini yazılıma aktarmak için dosyaya tıklayın. Menüde, Sınıflandırma sekmesinin altında Çözümleme ve Sistem Kümelemesi'ni tıklatın. 10 parti otantik numune ve beş parti zina yapanın ortak tepe alanlarını değişken olarak seçin.
Küme sayısını dört olarak ayarlayın. Ardından, Kümeleme Yöntemi'ni gruplar arası bağlantı olarak seçmek için Yöntem'e tıklayın. Ölçüm aralığını Pearson korelasyonu olarak seçin ve küme analizi haritasını çizmek için Tamam sekmesini kullanın.
İlke bileşen analizi veya PCA için, veri analizi yazılımını açın. Menüdeki dosyaya tıklayın ve yeni bir düzenli proje oluşturun. HPLC sisteminden bir Excel veya benzer bir elektronik tablodaki 12 ortak tepe noktasının tepe alanını içe aktarın.
Veri içe aktarma işlemini tamamlamak için Son düğmesine basın. Model türünü PCA ile ayarlamak için, yeni bir model oluşturmak üzere Yeni'ye tıklayın ve ardından otomatik sığdırma ve sekme ekleme özelliğini kullanarak verileri sığdırın. PCA puan haritasını almak için skorlara gidin.
Ortogonal Kısmi En Küçük Kareler Ayrım Analizi veya OPLSDA'yı kullanmak için. Daha önce gösterildiği gibi PCA puan haritasını oluşturun. Yeni ve Yeni Model Bir'e tıklayarak model türünü OPLSDA ile ayarlayın Herkes için eşit olarak seçerken ölçeklendirmeye gitmeden önce, OPLSDA puan haritasını oluşturmak için puanlarda Otomatik Sığdır'a basın.
Değişken önem ve projeksiyonu tahmin etmek için veri analizi yazılımı menüsüne gidin ve Analiz Et'e gidin ve ardından mutasyon başına sayıyı 200 olarak ayarlayın. OPLSDA puanından R karesi ve Q kare değerlerini elde edin ve VIP haritasını almak için VIP ve VIP tahminine tıklayın. 10 otantik Chuanmutong örneğinin HPLC parmak izleri, nispeten büyük ve iyi çözülmüş 12 farklı ortak tepe noktası gösterdi.
Tepe noktası 10, geri kalan zirvelerin göreceli tutma sürelerini tahmin etmek için referans tepe noktası olarak kullanılmıştır. Otantik örnekler, iyi tutarlılıkta yüksek benzerlik anlamına gelen birine çok yakın benzerlik dereceleri göstermiştir. Bununla birlikte, beş zina partisi ile kontrol Chuanmutong arasındaki benzerlik dereceleri oldukça düşüktü.
Beş zina yapanın HPLC parmak izlerinin, esas olarak 28 ila 55 dakika arasında değişen tutma sürelerine sahip bölgede, otantik örneklerden farklı olduğu gözlenmiştir. PCA, otantik çeşitler ile zina yapan CC hariç, zina yapanlardan farklılıkları arasında belirgin bir benzerlik göstermiştir.Benzer sonuçlar, sınıflandırma mesafesi 20 iken küme analizinden de elde edilmiştir. OPLSDA'dan üretilen skor matrisi, otantik örneklerin örnek noktaları ile zina yapanların örnek noktaları arasında kesişme olmadığını göstermiştir.
Yine, zina eden CC, otantik çeşitlere diğer zina yapanlardan daha çok benziyordu. VIP haritasına göre, birden büyük değerlere sahip zirveler, otantik örnekler ile zina yapanlar arasındaki farka neden olan ana belirteç bileşenleri olarak tanımlanmıştır. Chuanmutong'da bulunan aktif bir bileşen olan beta-sitosterolün içeriği, beş zina partisinin hepsinde tespit edildi, ancak içerik büyük ölçüde değişti.
Bu protokol, tıbbi materyaller hakkındaki tüm bilgileri birden fazla açıdan ve Chuanmutong tıbbi malzemelerinin özgünlüğünü tahmin etmek için her yönden yansıtmak için çeşitli analiz yöntemleri oluşturur.
