Животные модели синдрома центрального пуповинного мозга могут впоследствии принести пользу в доклинических исследованиях. Стратегия, описанная в данном исследовании, является выгодной, поскольку она позволяет исследовать механизмы травмы, получая последовательные результаты. Существующий протокол моделирования синдрома центрального пуповинного мозга у мышей улучшил воспроизводимость и минимизировал операционный ущерб для экспериментальных животных.
Не допуская нарушения их анатомического строения. Начните с организации хирургических инструментов и коаксиальной платформы при травме спинного мозга. После того, как мышь будет должным образом обезболина, определите небольшой выступ вдоль средней линии за шеей животного, который является остистым отростком второго грудного позвонка, или Т2. Сбрейте волосы, окружающие остистый отросток Т2 за шеей, и продезинфицируйте кожу тремя чередующимися раундами раствора Йота 4 и 75% этанола.
Затем поместите мышь в положение лежа на операционном столе. Нанесите глазную мазь для защиты глаз. Расположите подушечку толщиной от 3 до 4 миллиметров под грудной клеткой животного, чтобы облегчить изгиб шейного отдела позвоночника, что позволяет обнажить межслойное пространство, а также беспрепятственно проходить воздух во время операции.
Далее, работая под микроскопом, скальпелем сделайте продольный разрез от 1 до 1,5 сантиметра с центром на остистом отростке Т2 и обнажите фасциальный слой. С помощью микроножниц удалите часть жировой ткани выше Т2, чтобы четко обнажить остистый отросток Т2. С помощью микроножниц отделите двусторонние трапециевидные и ромбовидные мышцы от С5 до Т2 по средней линии.
Затем отделите мышцы на пластинке позвонков от С5 до Т2 и с помощью микроретракторов оттяните мышечный слой в стороны. Разрежьте многожильные и шейные мышцы позвоночника, присутствующие на поверхности позвонков. Найдите позвонок Т2, определив самую высокую точку остистых отростков.
Затем продолжают зондировать остистые отростки последовательно от Т2, двигаясь к ростральному концу, до тех пор, пока не будет найден шестой шейный позвонок или С6. Используя щипцы, приподнимите пластинку C6, чтобы обнажить спинной мозг, прежде чем отрезать пластинку. Зажмите фасеточные соединения С6–С7 стабилизатором позвонков и зафиксируйте его.
Совместите наконечник груза с обнаженным спинным мозгом, убедившись, что нижняя часть наконечника параллельна дорсальной поверхности спинного мозга. Отрегулируйте рукав так, чтобы вес сжимал спинной мозг. Прекратите регулировку, когда вес будет поддерживать постоянное относительное положение со спинным мозгом.
Снимите вес и стабилизатор позвонков, предварительно выполнив пятиминутную компрессию. Под микроскопом наблюдайте за любыми изменениями цвета спинного мозга в результате компрессии. Промойте место операции стерильным фосфатным буфером из солевого раствора.
После этого используйте всасывание для очистки участка. Сшивают мышцы и кожу послойно с помощью полипропиленового нерассасывающегося шовного материала 6-0. После дезинфекции прооперированной области поместите мышь на теплую подушечку, пока она не придет в полное сознание, прежде чем вернуть ее в клетку.
Гематоксилин и эозин или окрашивание сагиттального отдела спинного мозга позволили предположить, что область, поврежденная в сером веществе, была шире в группе тяжелой травмы, чем в группе легкой травмы. Корональные срезы ПЭ показали, что в обеих группах поражение в основном имелось в сером веществе. В тяжелой группе, несмотря на то, что структура белого вещества, окружающего серое вещество, была затронута сильнее, его очертания все же сохранялись.
Иммунофлуоресцентное окрашивание также показало, что, хотя белое вещество, окружающее серое вещество, было поражено в тяжелой группе, оно все еще оставалось относительно неповрежденным. Эритроциты не были обнаружены в сагиттальных срезах ПЭ через семь дней после травмы как в легкой, так и в тяжелой группе. Окрашивание прусской синюшкой выявило гемосидероз только в тяжелой группе.
Иммунофлуоресценция выявила участки повышенной экспрессии GFAP и Iba1 как при легкой, так и при тяжелой травме, что свидетельствует о воспалительной реакции и образовании глиального рубца. Кроме того, в тяжелой группе площадь поражения была больше, чем в группе с легкой формой. Магнитно-резонансная томография показала, что в обеих группах наблюдалось гипоинтенсивное изменение сигнала в очаге поражения с высоким контуром сигнала.
Тяжелая группа показала значительно большую область гипоинтенсивного сигнала. Удаление мягких тканей спереди и позади пластинки, насколько это возможно, способствует расслаблению пластинки и доказанному повреждению пролетного среза при параллельном разрезании. Данный протокол фазового объема моделирует синдром центрального спинного мозга и позволяет глубже понять и исследовать сигнал.
