Анализ плотности митохондрий и продольного распределения в костных мышечных волокнах крыс методом конфокальной микроскопии

Ремоделирование митохондриальной сети происходит при физиологическом стрессе и патологических состояниях. Тем не менее, эффекты митохондриального ремоделирования в скелетных мышцах остаются не до конца изученными. Этот протокол позволяет количественно оценить изменения митохондрий в живых скелетных мышцах, улучшая наше понимание взаимодействия между митохондриальными изменениями и клеточной функцией.

Работа с живыми скелетными мышцами сопряжена с трудностями из-за сокращения волокон во время изоляции и чувствительности к изображению во время конфокального сканирования. Этот протокол описывает процесс изоляции с использованием релаксационного раствора, позволяющего анализировать жизнеспособные мышечные волокна для оценки митохондрий с помощью конфокальной микроскопии. Наш протокол решает проблему отсутствия рабочих процессов для количественного анализа митохондриальных сетей в скелетных мышечных волокнах.

Описанные здесь шаги позволяют пользователям использовать больше преимуществ изображений, полученных с помощью конфокальной микроскопии, используя обработку изображений с помощью порогового значения и быстрого анализа Фурье для количественной оценки плотности и распределения митохондрий. Мы заинтересованы в изучении изменений скелетных мышц, в частности, митохондриальной динамики и митохондриального структурного ремоделирования во время неблагоприятных условий, а также в том, как их можно модулировать с помощью таких вмешательств, как физические упражнения и промежуточное голодание.