В центре внимания автора: Важность сортировки одиночных клеток в выделении очищенных популяций мезенхимальных стволовых клеток

В этом протоколе подробно описан важнейший метод точной характеристики и очистки мезенхимальных стволовых клеток человека на единой платформе, обеспечивающий эффективное последующее применение, такое как трансплантация стволовых клеток. Это особенно важно для клинических лабораторий, улучшающих молекулярные и цитогенетические анализы за счет точной сортировки инженерных или природных стволовых клеток. К наиболее часто используемым методам выделения очищенных популяций стволовых клеток относятся такие методы, как иммуномагнитная сепарация, градиент плотности или микрофлюидная сортировка клеток.

Такой метод, как индексная сортировка, позволяет связать его с профилированием РНК одной клетки, которое может извлекать транскриптомную информацию о каждой отсортированной клетке. Основные задачи связаны с поддержанием качества образцов, оптимизацией условий культивирования клеток, включая плотность и жизнеспособность клеток во время и после сортировки. Кроме того, следует рассмотреть возможность выбора подходящих размеров сопел для прибора и обеспечения своевременного доступа к сортировщикам.

Этот протокол иллюстрирует точную панель окрашивания для иммунофенотипирования и сортировки желаемой клеточной популяции. Он обеспечивает стандартизированное качество образцов, оптимальную жизнеспособность клеток, плотность для сортировки клеточных популяций и определяет экспериментальные параметры сортировки в программном обеспечении FACSDiva. Этот метод позволяет проводить прямой отбор и иммунофенотипирование популяции стволовых клеток, экспрессирующих специфические биомаркеры.

Эта простая платформа обеспечивает эффективную сортировку на основе целевой популяции, помогая и получая очищенные образцы для последующего применения.