Fare intralenfatik immünoterapi ve Aşılama

Özet

Profilaktik ve terapötik aşılama çoğu zaman düğümleri ve bağışıklık hücrelerinin dolayısıyla kötü katılımını lenf nedeniyle aşının hafta drenaj güçlü bağışıklık tepkilerini uyarmak için başarısız olur. Lenf düğümlerine aşı doğrudan enjeksiyon ile, sözde lenf sistemi içi enjeksiyon, aşı etkinliği güçlü geliştirilebilir ve aşı doz azaltılabilir.

Özet

Aşılar genellikle bağışıklık yanıtlarının uyarılması için deri altından ya da kas içinden enjekte edilir. Bu başarısı, antijen sağlayan hücreler, aranan bağışıklık yanıtlarının oluşturulması için lenfositleri ile etkileşim lenf düğümlerine aşının etkili bir drenaj gerektirir. Gücü ve kaynaklı bağışıklık tepkilerinin türü de yoğunluğu veya frekans etkileşimlerin hem de mikro-, sitokinlerin, özellikle içeriğine bağlıdır. Çevresel olarak enjekte edilen aşı sadece küçük bir kısmını, lenf düğümleri ulaştığında, fareler ve insanlarda aşı kasık lenf düğümleri, örneğin lenf sistemi içi enjeksiyonu içine aşı direkt enjeksiyonu ile yapılmıştır. İnsanlarda, prosedür ultrason tarafından yönlendirilmektedir. Farelerde, bir küçük (5-10 mm) bir kesik, lenf düğümü ve lokalize forseps ile hareketsiz hale anestezi uygulanmış hayvanların kasık bölgesinde yapılır ve aşı 10-20 ul'lik bir hacim görsel kontrol altında enjekte edilir.Kesik, cerrahi dikiş kullanarak tek bir dikiş ile kapatılmıştır. Fareler plasmid DNA, RNA, peptid, protein, parçacıklar ve bakteriler gibi yardımcı maddeler ile aşılandı ve aşıların her tür karşı bağışıklık karşılıklarının güçlü bir iyileşme gözlendi. Aşılama intralenfatik yöntem, geleneksel aşı yetersiz bağışıklık veya Müsait aşı miktarı sınırlıdır üreten durumlarda özellikle uygundur.

Giriş

Aşılar genellikle bağışıklık yanıtlarının uyarılması için deri altından ya da kas içinden enjekte edilir. Bu prosedürün başarısı, antijen sunan hücreler, T-ve B-hücresi tepkilerinin üretilmesi için lenfositleri ile etkileşim lenf düğümlerine aşının etkili bir drenaj gerektirir. Buna ek olarak, dayanıklılık ve kaynaklı bağışıklık tepkilerinin türü de yoğunluğu ya da frekans gibi etkileşimlerin hem de mikro kendisi, sitokinlerin, özellikle içeriğine bağlıdır. Çevresel bir doku içine enjekte edilen bir aşının sadece küçük bir kısmı, bir lenf düğümü ulaştığında, lenf düğümleri içine aşı direkt enjeksiyonu ile farelerde ve insanlarda ve aşılar, site bağışıklık cevapları oluşturulur edildi gerçekleştirilmiştir. İnsanlarda, prosedür ultrason da lenfatik sistem görselleştirme ve teşhis için görüntüleme maddeleri uygulanması için kullanılan bir prosedür ile yönlendirilir. Farelerde, prosedür invaziv. Burada, bir küçük (5-10 mm) incision, anestezi uygulanmış hayvanlar ^1'in kasık bölgesinde yapılır, lenf düğümü ve lokalize forseps ile hareketsiz ve aşı 10-20 ul'lik bir hacim görsel kontrol altında enjekte edilir, 10 ul ilk enjeksiyon için kullanılır ve genç farelerde küçük lenf düğümleri ile, oysa 20 ul büyük lenf düğümleri lenf düğümleri daha büyük ya da zaten farede, enjekte edilebilir. İnsizyon edilebilir cerrahi dikişle, bir tek dikiş ile kapatılabilir. Bu yöntem ile, farenin plazmid DNA ^2,3, haberci RNA ^{4, 1,3,5,6} peptid, ^{protein, 7-10, 11,} parçacıklar, bakteriler ¹² hem de ^7,13 ilave maddeler ve bağışıklık güçlü iyileşme ile aşılanmış olan aşıların her tür karşı tepkiler gözlenmiştir. Aşılama intralenfatik yöntemi geleneksel aşılama yetersiz bağışıklık üreten veya mevcut aşının miktarı sınırlı ya da ver olduğu durumlarda özellikle uygundurpahalı y. İnsanda, lenf sistemi içi aşılama yöntemi, alerji hastalara ^14,15 ya da kanserli ^16-21 olan hastalara uygulanmıştır. Mevcut kavramı intralenfatik yöntem, kas içi ve deri altı enjeksiyonlar gibi diğer enjekte edilebilir yöntemlere göre daha invaziv olmasıdır, ancak ağrı algısı, damar delinerek ¹⁵ sonra daha yüksek değildir. Bu lenf sistemi içi aşı koruyucu ve tedavi edici aşıların, özellikle diğer yöntemlere bir alternatif veya tamamlayıcı olacağı beklenmektedir. Bu makalede, lenf sistemi içi aşılama prosedürü farelerde gerçekleştirilir kadar ayrıntılı olarak açıklanmaktadır. Açıklanan tüm prosedürler, Zürih Kantonu Veterinerlik Kurumu tarafından onaylanan ve İsviçre federal kuralları ve bilimsel amaçlar için kullanılan hayvanların korunması ile ilgili direktifleri göre yapılmıştır.

Protokol

1.. Farelerin Anestezi

1. Tamponlu tuz çözeltisi içinde ketamin (dissosiyatif anestezi) ve ksilazini (sedatif ve analjezik) karıştırılarak anestezik hazırlayın. Nihai çözelti içinde ketamin ve ksilazin konsantrasyonları sırasıyla 12,5 ve 2 mg / ml 'dir.
2. 25-30 G iğnesi olan bir şırınga kullanılarak intraperitonal uygulama ile farelere anestezi enjekte edilir. Vücut ağırlığının 0.1 ml/10 g kullanın.
3. Kornea kurutulması Çıkış önlemek için farenin gözlerindeki bir oftalmik merhem uygulayın.
4. Fare yeterince forseps ile ayak veya ayak kısma anestezi sağlamalıdır. Fare tutam refleksleri ile tepki vermezse, cerrahi geçin. Fare refleksleri veya kas kasılmaları ile tutam tepki varsa, 1-2 dakika bekleyin ve tutam testi tekrarlayın. Fare hala tepki vermiyorsa, bir yeni hayvan ile fare değiştirin ve sonrası adım 1.2 'den işlemleri tekrarlayın.

2. Cerrahi IMouse Kasık Alanı ncision

1. Sırtında fare yerleştirin.
2. Dezenfeksiyon etanol (% 70) ile bir inguinal bölge ıslatın. Daha iyi dezenfeksiyon sağlamak için, inguinal bölge etanol ile kürk önce dezenfeksiyon kaldırmak için traş olabilir.
3. Arka bacak alın ve kalça ekleminin yaklaşık 90 ° açı üretmek için kalça eklemi bükün.
4. Kavisli bir Microdissecting forseps kullanarak, kalça eklem bükülmüş kasık bölgesinde fare deri alıp hafifçe ıslatılmış cildi yukarı çekin.
5. Forseps ile cilt kadar tutarken, cerrahi makas kullanılarak deri yoluyla küçük bir kesi (<5 mm) kesti.
6. Kesi içine kapalı makas ucu yerleştirin ve daha fazla ensizyon içine tutarken makas açarak kesi açın. Bu, gözyaşı ve en az 10 mm'lik bir çapa üretmelidir cilt neden olur. Not: esnek ışık kılavuzları ile bir soğuk ışık kaynağı görünürlüğünü artırmak için kullanılabilir. Eski yılındafareler, özellikle erkek, lenf düğümü kimlik nedeniyle kasık bölgesinde fazla yağ dokusu zor olabilir.

3. Intralenfatik Enjeksiyon

1. Bir 28-30 G derialtı iğne ile bir şırınga (0.5 ml veya daha az) hazırlayın; kısa konik uzun eğimin tercih edilebilir. Aşının aspire 10 ul enjekte ve şırınga serbest hava olduğunu garanti edilecek.
2. Kavisli bir forseps yardımı ve kapalı makas ucu ile kasık lenf düğümü yerelleştirilmesine. Lenf düğümü daha beyazımsı yağ dokusu içindeki grimsi görünür ve daha fazla giriş ve lenf düğümü terk afferent ve efferent kılcal ile tespit edilebilir.
3. Kavisli bir forseps dalları arasında tutarak lenf düğümü hareketsiz.
4. Şırınga alın ve yukarı bakacak Eğim ile lenf düğümüne iğneyi, bütün konik lenf düğümü girer emin.
5. Aşısı (10 ul) enjekte edilir. Eğer lenf node (üfleme) şişme, enjeksiyon başarılı kabul edilebilir. Iğne lenf düğümüne derinliklerine yeterince yer değilse, bazı veya tüm aşı dışarı sızıntı ve lenf düğümü giremezsiniz. İğne çok derin yerleştirildiğinde ise, deri altından enjekte edilen aşı, lenf düğümü, aşağıda açıklanacak. Ikinci durumunda, tekrar enjeksiyon ya da yeni bir tedavi edilmemiş fare ile fare değiştirin.

4. Dikiş ile kesi Kapanış

1. Steril cerrahi sütür bir paket açın.
2. Iğne gövdesinin distal kısmında bir iğne tutucusu ile dikiş iğnesi tutunuz. İlk mandal yakalar kadar sıkarak iğne tutucu sıkın.
3. (Un dişli veya dişli forseps veya deri kanca kullanılabilir cerrahın tercihine bağlı olarak) forseps kullanılarak kesi bir tarafında deri tutunuz. İğne ca yerleştirin. 2-3 mm kesi kenarından, derinin dış giren.
4. Loosforseps ile cilt beklemeye tr ve forseps ile kesi karşı tarafını kavrayın. İğne ca yerleştirin. 2-3 mm kesi kenarından, deri içine giren.
5. İğne tutucu gevşetmek ve forseps ile iğne ucu kavramak. Birkaç farenin tedavi edilecek ise, daha kısa bir uç bırakmak (birinci iğne ekleme noktası dışında taban yüzünün uygun bir uzunluğu bırakarak deri yoluyla profili olan iğne çekin, 5-10 farenin bir dikiş iğnesi ile çalıştırılabilir /) yürümek.
6. Standart cerrah protokollere göre tercih edilen düğüm yapın. Kesi 10 mm daha büyük değilse, tek dikiş yeterlidir. Daha büyük kesiler için, ikinci bir dikiş yapmak.

5. Post-operasyonel Tedavi

1. Kafeste fare yerleştirin ve sıcak tutmak için dokuları ile kaplayın. Birden fareler tedavi ederken, sıcak tutmak için birbirine yakın onları yerleştirin. Onlar uyandı kadar alternatif, bir sıcak ped fareler yerleştirinkadar.
2. Onlar uyanmak kadar fareler gözlemleyin.
3. Iyileşme yanı sıra yara enfeksiyonları gibi diğer klinik belirtiler yara ile ilgili olarak günlük fareler dikkate alınmalıdır. Yara genellikle yeterince iki gün içinde kapalı ve prosedürün yedi gün içinde iyileşti.

Sonuçlar

Farelerde intralenfatik enjeksiyon prosedürü, cerrahi doğasına rağmen, yalındır ve nispeten hızlı. Eğitimli bir kişi 3-4 dakika içinde işlemi gerçekleştirebilirsiniz. Bir dikiş ile kapatılmıştır kesik tipik haliyle iki gün içinde iyileştirir (Şekil 1)

Lenf içine aşı veya aşı mRNA ile gerçekleştirilmiştir, plazmid DNA, peptidler, proteinler, virüs ve bakteri. 2 protein fosfolipaz A2 (PLA2), ana alerjen arı zehiri ile immüniz...

Tartışmalar

Lenf içine aşılama ve immünoterapi antikor karşılıkları ve T-hücresi tepkilerinin her ikisinin stimülasyonu için uygun olduğu gösterilmiştir. Bu video-makale de gösterildiği gibi, aşı intralenfatik prosedür farelerde güçlü bir immün yanıtları stimüle etmek için hızlı ve kolay bir yöntemdir. Eğitimli bir cerrah 3-4 dakika boyunca yordamı gerçekleştirebilir. Oturumda ayrıca bir genellikle anestezi ve dikiş atılmasını yapıyor ve ikinci cerrah kesi ve enjeksiyon yapıyor, iki cerrahla...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ketamine (Ketasol-100)	Graeub AG, Switzerland		Anesthetics
Xylazine (Rompun)	Bayer, Germany		Anesthetics
Viscotears Eye-Gel	Novartis, Switzerland		To keep eyes from drying out during anesthesia.
BD Micro-Fine 0.5 ml	BD Medical, France		29 G Insulin syringes with permanently attached needles
6-0 Dermalon Monofilament Nylon	Covidien, MA, USA		For sutures (0.7 metric, 18 G, 45 cm, Blue)
Curved forceps, 4.5 in	Polymed, Switzerland		For incision and holding of lymph node
Straight surgical scissors, 4.5 in	Polymed, Switzerland		For incision
Needle holder, 5.5 in	Polymed, Switzerland		To close incision with suture