JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Kuyruk ven enjeksiyon yoluyla gerçekleştirilebilir Indocyanine Yeşil Anjiyografi (veya ISYA) fare koroidinde anormallikleri karakterize kaliteli ISYA zaman ders görüntüler sağlar.

Özet

Indosiyanin Yeşil Anjiyografi (veya ISYA) koroid ve böyle yaşa bağlı makula dejenerasyonu (AMD) gibi çeşitli göz hastalıkları retina damar anormallikleri teşhis etmek için göz doktorları tarafından yapılan bir tekniktir. ISYA nedeniyle kızıl ötesi spektrum ile pigmentli tabakası içinden nüfuz kabiliyeti gözün posterior koroid damar görüntüye özellikle yararlıdır. ISYA zaman ders erken, orta ve geç evreye ayrılabilir. Üç aşama göz problemleri patoloji hakkında değerli bilgiler sunmaktadır. Intravenöz zaman ders ISYA (IV) enjeksiyonu yaygın koroid sorunlarının tanı ve tedavisi için klinikte kullanılan rağmen, ISYA intraperitoneal enjeksiyon (IP) tarafından genellikle hayvan araştırmalarda kullanılmaktadır. Burada kuyruk ven enjeksiyon ve konfokal tarayıcı laser oftalmoskopla farelerde yüksek çözünürlüklü ISYA zaman ders görüntüler elde etmek için teknik göstermiştir. Biz koroid le görüntü için bu tekniği kullanılıryaşa bağlı makula dejenerasyonu olan bir fare modelinde lezyonlar. IP tarafından fare damarsal ICG tanıtmak için çok daha kolay olmasına rağmen, bizim veriler IP-ISYA tarafından tekrarlanabilir ISYA zaman ders görüntüler elde etmek zor olduğunu göstermektedir. Buna karşılık, kuyruk ven enjeksiyon yoluyla ISYA insan çalışmalarında karşılaştırılabilir yüksek kaliteli ISYA zaman ders görüntü sağlar. Buna ek olarak, pigmentli ISYA fareler üzerinde gerçekleştirilen daha koroid damarlarının daha net resimler verir albino fareler üzerinde gerçekleştirilen gösterdi. Biz o zaman-ders IV-ISYA hayvan modellerinde dayalı AMD araştırma standart bir uygulama haline gelmelidir öneririz.

Giriş

İndosiyanin yeşili anjiyografi (ISYA) gözün kan damarları ile ilgili görüntü sorunlarına bir tanı testidir. Emisyon spektrumu 770-880 nm ila 835 nm, 1 de tepe emisyon aralıkları sırasında ICG'nin emilme tayfı 790-805 nm arasında değişir. Bu olan spektrum görünür aralığında yer alır, diğer popüler boya sodyum floresan, farklıdır. Kızılötesi spektrumu kolayca sodyum floresein tabanlı floresein anjiografi (FA) tarafından görselleştirme engelleyebilirsiniz bütün bunlar retina pigment epiteli (RPE), serosanguinöz sıvısı ve lipid eksuda yoluyla nüfuz ICG sağlar. ICG koroid damar ve koroid lezyonların 1,2 gelişmiş görüntüleme sağlayan,% 98 proteine ​​bağlı daha az ekstravazasyonu ile sonuçlanan damar bulunmaktadır. ISYA neredeyse RPE posterior koroid damarlarını görselleştirmek için tek seçenektir. Şekil 1 fare gözlerinde görüntüleme damarsal ISYA ve FA karşılaştırmasını gösterir. FA bGörüntünün retinal damar sistemi kuyu değil, koroid damar kullanılan e. Bunun aksine, ISYA retinal ve koroid damar hem de görüntü için kullanılabilir. ISYA birlikte bu çalışmada kullanacağı kızılötesi hassas video kameralar, yüksek çözünürlüklü dijital görüntüleme sistemleri veya tarayıcı laser oftalmoskobun (SLO) ile gerçekleştirilir.

Klinikte, ISYA Polipoidal Koroid Vaskülopati (PCV), Retina Anjiomatöz Yayılmasının (RAP), angioid çizgiler, vitelliform maküler distrofi, SSK'sı, hemanjiomun, kanamalar retina dahil koroidal vaskulatürünü kapsayan koriyoretinal bozukluklar bir dizi teşhis tavsiye edilmiştir Arteriyollerde makroanevrizmaları, koroid tümörleri, posterior ve belirli biçimleri 1,3 üveit. FA ve optik koherens tomografi (OCT) ile ISYA kombinasyonu eksudatif yaşa bağlı maküler tanı ve tedavisinde klinisyenler için güçlü araçlar sağlardejenerasyon (AMD) 4-10. ISYA koroid ilgili koşulların teşhis edilmesi için özellikle yararlıdır. Aslında, ISYA PCV, eksudatif AMD 11-13 bir varyantını teşhisi için altın standart olarak kabul edilir. PCV koroid damar 11-13 terminal polipoidal dilatasyon ile damarların dallanma bir ağ ile karakterizedir. PCV sık sık kaçak ve polipoidal bileşenlerinden 11,14,15 gelen kanama ile RPE ve retinanın tekrarlayan serosanguinöz müfrezeleri ile ilişkilidir. Yakın zamanda transgenik fare retinal pigment epitel (RPE) 16, insan HTRA1, çok fonksiyonlu bir serin proteazı ifade ile birinci PCV hayvan modelinin üretilmesini bildirdi. Bu artan HTRA1 PCV karakteristik özelliklerine sahip, örneğin polipoidal lezyonlar uyardığını göstermiştir.

İşte bizim HTRA1 fare modeli kullanılarak AMD araştırma kuyruk damar enjeksiyonu zaman ders ISYA kullanımını gösterdi. Bizim verilerimiz öneririzIV-ISYA IP (ya da deri altına (SC)) güncel koroid lezyonları karakterize etmek için 17,18 alanında kullanılan-ISYA üstündür.

Hayvan Araştırma Bildirimi

Hayvan deneyleri Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi (IACUC) tarafından onaylanmış protokollere göre yapılmıştır ve Oftalmik ve Vizyon Araştırma Hayvanların Kullanım ARVO Tablosuna uygun olarak yapıldı.

Protokol

1.. Araçların hazırlanması

  1. Prosedür, bir hayvan tesisinde bir prosedür odada gerçekleştirilir.
  2. Deney başlamadan önce facemasks, saç bone, cerrahi önlük, steril ayak örtüleri, ve eldiven giyin.
  3. Bir ocak üzerinde bir behere ~ 40 ° C ısı su.
  4. Görüntüleme sırasında fare vücut ısısını korumak için daha sonra kullanılacak bir ısıtma yastığı üstüne steril bir mavi yastık yerleştirin. Isıtma pedi açın.
  5. Görüntüleme Sistemi hazırlayın:
    1. Toz kapağını çıkartın ve lazer açın.
    2. 55 ° lens dışarı atın ve makine üzerine monte.
    3. Bilgisayar ve girdi yeni bir hastanın sayfanın altında görüntüleme için fare bilgiler (örn. genotip, yaş, vb.) Gelen görüntüleme yazılımını açın. "Cihaz türü" altında, Kızılötesi (IR) modunu seçin.

Not: Bu rapor edildiğini kullanım oBiz (temsilcisi sonuçlarını görmek, 1-4 Şekiller) harici lens kullanmadan IV-ISYA yüksek kaliteli görüntüler elde hiçbir sorun olmasına rağmen f Harici çift asferik lens görüntü kalitesini 17-20 artırabilir.

2. ISYA Kuyruk Ven Enjeksiyon

  1. 1% Tropikamid oftalmik solüsyonu ile fare gözleri dilate ve 5 dakika bekleyin.
  2. Anestezi gerekli (Ketamin / Ksilazin / Acepromazine 65-100/10-20/1-3 mg / kg) miktarını belirlemek için, fare tartılır.
  3. Bir 32 G iğne ile birlikte steril 1 ml şırınga al. Anestezi (13 mg / ml ketamin, 2.6 mg / ml Xylazine, steril PBS içinde 0.3 mg / ml Acepromazine) ile periton kesesi içine enjekte fare. Fare tamamen uyuşturulduktan kadar bekleyin (~ 5 dk).
  4. Venin vazodilatasyona neden 40 ° C ılık suyun içine fare kuyruğu yerleştirin.
  5. Bir 32 G iğne ile bir 1 ml şırınga al. IC istenilen miktarda geri çekG, tipik haliyle, bir 25 g fare (2 mg / kg) için, bir steril tüp içine, bir 0.2 uM şırınga filtresi ile filtre edilmiş, steril, 1 mg / ml ICG, 50 ul. Şırınga içine herhangi bir hava tanıtmak için dikkatli olun.
  6. Enjekte edilecek bölgeyi sterilize etmek için bir alkollü bez ile silin kuyruk.
  7. , Yanal kuyruk damarı yukarı doğru olacak şekilde, bir el ile kuyruk tutun. Yukarı bakacak şekilde iğnenin eğim ile, en az bir açı ile damar içine yaklaşık 2 mm iğne enjekte edilir. Ven delmek için dikkatli olun. Biraz şırınga geri çizin ve iğne başarıyla damar içine yerleştirilen olduğunu gösterir iğne hub, içine kan akımının izleri arayın.
  8. Yavaş yavaş damar içine enjekte ICG. Enjekte ederken minimal direnç olmalıdır. İğneyi çıkarın ve herhangi bir kanamayı durdurmak için ~ 5-10 saniye enjeksiyon yerinde doğrudan bir alkol bez uygulayın. Fare görüntüleme için hazırdır. Erken faz (enjeksiyondan sonra 0-4 dakika) yakalamak amacıyla, bu esse olduğuhızlı görüntü fareyi ntial.

Not: Fare gözler kolayca kuru alabilir ve anestezi altında katarakt gelişebilir. Bu işlem sırasında, steril PBS uygulayarak nemli göz tutmak önemlidir. ISYA Kayıttan önce steril pamuklu çubukla aşırı PBS silin. Diğer laboratuarları kornea 17-20 dehidratasyonu önlemek için bir kontakt lens kullandım.

3. ICG Anjiyografi

  1. Retina ve koroid tirajları maksimum parlaklık (0-4 dk) kadar görüntüleri koroid dolum erken faz yakalama izin verir ICG enjeksiyondan sonra 30-40 sn almaya başlar. Retinal damar iyi odak ~ 35-45 dioptri ve koroid damar 10-15 diyoptrilerinde görüntülenmiştir de görüntülenmiştir.

    Not: bir hayvan modelinin ilk inceleme sırasında, olası tüm abno tanımlamak için tüm açılardan (nazal, temporal, dorsal ve ventral) görüntüleri yakalamak için tavsiye edilirvaskülatürde rmalities. Erken dönemde, orta ve büyük koroid arterler ve venler hem de görüntülenmiştir. Bu protokolde kullanılan hayvan modelinde, koroid lezyonlar (örn. polipoidal dilatasyonlarında) erken fazına 1 dk görünmeye başlayabilir.
  2. Damar üzerindeki görüntü odak ayarlayın. Parlaklık için Kontrol ve sırasıyla, kontrol modülü ve odak düğmesini kullanarak odaklanır. Bu değerler, ayarlanabilir sayısal olarak ve kolayca sabit tutulur. Aşağıdaki tekniği kullanılarak görüntü kalitesi tekrarlanabilir sağlamak için kamera lensi sabiti fare göz mesafe bırakın.

    Not: cihaz sadece görüntü, biz kamera lensi ve sürekli fare göz arasındaki odak, parlaklığı ve mesafe tutmak için posterior gözün bir kısmı deneyebilirsiniz beri görüntü farklı açılardan tüm posterior göz gibi. Bunun anahtarı vie alanı ile göz yoluyla ICG tarafından yayılan daire şeklindeki lüminesans hizalamak içinKameranın w. Tüm görüntü karanlık alanları vardır kadar bu, sol-sağ yaparak kamera pozisyonu yukarı ve aşağı, ve-ve-out ayarlamalar yapılır. Kameranın görüş alanında parlaklık ve dizilmiş zaman, lens için göz arasındaki mesafe kaliteli görüntüleme için optimal bir mesafede bir sonraki resim grubu hem de için tekrarlanabilir.
  3. Damar odak sonra, satın alma modülü üzerinde yuvarlak siyah düğmeye basarak görüntü kareleri yakalamak. Yuvarlak siyah düğmesi de en iyi görüntü kalitesi için ICG sinyalini azaltmak veya artırmak için kullanılabilir.
  4. Görüntü koroid lezyonların uygun görüş açısını ve odaklama derinliği belirler. Bu gözün konumunu, odaklama derinliği, ve tüm zaman-ders ISYA için sabit diğer cihaz ayarları tutmak için önemlidir. Görüntüler tespit modülüne dokunmatik ekran panelinde acquire düğmesine basarak kaydedilir.
  5. 6-15 dk kıç orta fazda görüntüler eldeer enjeksiyon.

    Not: koroid ve retina damarları Hem daha az belirgin hale gelir. Koroid damar gibi yaygın floresan görünür. Hiperflöresansı sergileyen koroid lezyonlar normal bir arka plan floresan çevreleyen solma aksine ortaya.
  6. Enjeksiyondan sonra 17-25 dk geç fazda görüntü kazanır.

    Not: hiperflöresansı kaybolur. Hem koroid ve retina damarları artık görünür. Optik sinir başı siyah olur. Hiperfloresan koroid lezyonlar solan arka plan ile maksimum kontrast var.
  7. Görüntülerin satın bitirdikten sonra, fare gözleri açık bir yağ göz jeli uygulayın ve kurtarma için bir ısıtma pedi üzerinde fareyi bırakın.
  8. Kafeslerinde tutarak alana fareler dönün. Daha fazla analiz için TIFF ya da JPEG dosyaları olarak dışa aktarın.

Not: her bir faz zamanlaması kesin değildir. Bulduğumuz adet zamanlamasıch faz enjekte ICG miktarına bağlı olarak değişebilir. Daha ICG her aşamasını uzatmak için eğilimindedir. Bir faz tanımlamak için en iyi yol, yukarıda listelenen her fazın anahtar özelliklerine göre olduğunu.

Sonuçlar

Biz, CD1 arka plan üzerinde, her ikisi de, HTRA1 transgenik fareler ve kontrol litermatlarında WT ISYA zaman süreci gerçekleştirildi. Albino CD1 plan indosiyanin yeşil anjiyografi (ISYA) görüntüleme (tartışma) kolaylaştırmak için seçildi. Dilatasyon gibi bazı anevrizma HTRA1 fare erken dönemde ortaya çıkmaya başladı (Şekil 2, kırmızı bir ok bir geminin ucunda dilatasyon gösteren ve kırmızı bir daire, bir küme tipi polipoidal lezyon gösterir). Koroid damarlarının sırası...

Tartışmalar

Bu çalışmada, HTRA1 transgenik farelerde görüntü koroid lezyonlara ISYA kullanımını göstermiştir. Bizim fare modelinde erken, orta ve ISYA geç fazların özellikleri insan çalışmaları 1 'de de zaman süreci neticesinde. Bu, AMD olarak koroid ile ilgili koşulların patofizyolojik mekanizmaları ve tedavi stratejileri ile ilgili araştırmalar için çok değerli olan insan patolojisi ve hayvan fenotipleri arasında daha iyi karşılaştırma yapmak önemlidir.

...

Açıklamalar

YF Bu çalışmada kullanılan AMD fare modeli ile ilgili iki patent bekleyen bir mucididir. SK, ZB, ve ADJ ifşa hiçbir şey yok.

Teşekkürler

Bu çalışma Körlük (RSB) Önlemek için NIH hibe 1R01EY022901, Research Kariyer Geliştirme Ödülü ile desteklenmiştir, CMReeves & MA Reeves Vakfı, Körler E. Matilda Ziegler Vakfı, Tapınak Şövalyeleri Göz Vakfı ve Bölümü'ne sınırsız hibe RSB Utah Üniversitesi Oftalmoloji. Biz el yazması üzerinde tartışmalar ve yorumlar için Spectralis Multi-Modality Görüntüleme Sistemi ve Tao Zhang teknik yardım için Balamurali Ambati teşekkür ederim.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Spectralis Multi-Modality Imaging SystemHeidelberg Engineering, GermanySPECTRALIS HRA+OCT
Tropicamide ophthalmic solution (1%)Bausch & LombNDC 24208-585-64for dilation of pupils
GenTeal GelGentealNDC 58768-791-15 clear lubricant eye gel 
KetamineVedco IncNDC 50989-996-06
XylazineLloyd LaboratoriesNADA 139-236
AcepromazineVedco IncNDC 50989-160-11
32-G NeedleSterijectPRE-32013
1-ml syringeBD309659
Indocyanine GreenPfaltz & BauerI01250

Referanslar

  1. Duane, T. D., Tasman, W., Jaeger, E. A. . Chapter 4a, Indocyanine Green Angiography. Duane's clinical ophthalmology on CD-ROM. , (2002).
  2. Alfaro, D. V. . Age-related macular degeneration : a comprehensive textbook. , (2006).
  3. Yannuzzi, L. A. Indocyanine green angiography: a perspective on use in the clinical setting. Am. J. Ophthalmol. 151, 745-751 (2011).
  4. Destro, M., Puliafito, C. A. Indocyanine green videoangiography of choroidal neovascularization. Ophthalmology. 96, 846-853 (1989).
  5. Scheider, A., Schroedel, C. High resolution indocyanine green angiography with a scanning laser ophthalmoscope. Am. J. Ophthalmol. 108, 458-459 (1989).
  6. Guyer, D. R., et al. Digital indocyanine-green angiography in chorioretinal disorders. Ophthalmology. 99, 287-291 (1992).
  7. Yannuzzi, L. A., Slakter, J. S., Sorenson, J. A., Guyer, D. R., Orlock, D. A. Digital indocyanine green videoangiography and choroidal neovascularization. Retina. 12, 191-223 (1992).
  8. Regillo, C. D., Benson, W. E., Maguire, J. I., Annesley, W. H. Indocyanine green angiography and occult choroidal neovascularization. Ophthalmology. 101, 280-288 (1994).
  9. Scheider, A., Kaboth, A., Neuhauser, L. Detection of subretinal neovascular membranes with indocyanine green and an infrared scanning laser ophthalmoscope. Am. J. Ophthalmol. 113, 45-51 (1992).
  10. Kuck, H., Inhoffen, W., Schneider, U., Kreissig, I. Diagnosis of occult subretinal neovascularization in age-related macular degeneration by infrared scanning laser videoangiography. Retina. 13, 36-39 (1993).
  11. Imamura, Y., Engelbert, M., Iida, T., Freund, K. B., Yannuzzi, L. A. Polypoidal choroidal vasculopathy: a review. Surv. Ophthalmol. 55, 501-515 (2010).
  12. Ciardella, A. P., Donsoff, I. M., Yannuzzi, L. A. Polypoidal choroidal vasculopathy. Ophthalmol. Clin. N. Am. 15, 537-554 (2002).
  13. Spaide, R. F., Yannuzzi, L. A., Slakter, J. S., Sorenson, J., Orlach, D. A. Indocyanine green videoangiography of idiopathic polypoidal choroidal vasculopathy. Retina. 15, 100-110 (1995).
  14. Coppens, G., Spielberg, L., Leys, A. Polypoidal choroidal vasculopathy, diagnosis and management. Bull. Soc. belge d'Ophtalmol.. , 39-44 (2011).
  15. Tsujikawa, A., et al. Pigment epithelial detachment in polypoidal choroidal vasculopathy. Am. J. Ophthalmol. 143, 102-111 (2007).
  16. Jones, A., et al. Increased expression of multifunctional serine protease, HTRA1, in retinal pigment epithelium induces polypoidal choroidal vasculopathy in mice. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 108, 14578-14583 (2011).
  17. Alex, A. F., Heiduschka, P., Eter, N. Retinal fundus imaging in mouse models of retinal diseases. Methods Mol. Biol. 935, 41-67 (2013).
  18. Seeliger, M. W., et al. In vivo confocal imaging of the retina in animal models using scanning laser ophthalmoscopy. Vision Res. 45, 3512-3519 (2005).
  19. Fischer, M. D., Zhour, A., Kernstock, C. J. Phenotyping of mouse models with OCT. Methods Mol. Biol. 935, 79-85 (2013).
  20. Jian, Y., Zawadzki, R. J., Sarunic, M. V. Adaptive optics optical coherence tomography for in vivo mouse retinal imaging. J. Biomed. Opt. 18, 56007 (2013).
  21. Ciardella, A. P., Donsoff, I. M., Huang, S. J., Costa, D. L., Yannuzzi, L. A. Polypoidal choroidal vasculopathy. Surv. Ophthalmol. 49, 25-37 (2004).
  22. Sasahara, M., et al. Polypoidal choroidal vasculopathy with choroidal vascular hyperpermeability. Am. J. Ophthalmol. 142, 601-607 (2006).
  23. Silva, R. M., et al. Polypoidal choroidal vasculopathy and photodynamic therapy with verteporfin. Graefes Arch. Clin. Exp. Ophthalmol. 243, 973-979 (2005).
  24. Yannuzzi, L. A., et al. Polypoidal choroidal vasculopathy masquerading as central serous chorioretinopathy. Ophthalmology. 107, 767-777 (2000).
  25. Janssen, A., et al. Abnormal vessel formation in the choroid of mice lacking tissue inhibitor of metalloprotease-3. Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 49, 2812-2822 (2008).
  26. Ding, X., Patel, M., Chan, C. C. Molecular pathology of age-related macular degeneration. Prog. Retin. Eye Res. 28, 1-18 (2009).
  27. Grossniklaus, H. E., Kang, S. J., Berglin, L. Animal models of choroidal and retinal neovascularization. Prog. Retin. Eye Res. 29, 500-519 (2010).
  28. Pennesi, M. E., Neuringer, M., Courtney, R. J. Animal models of age related macular degeneration. Mol. Aspects Med. 33, 487-509 (2012).
  29. Elizabeth Rakoczy, P., Yu, M. J., Nusinowitz, S., Chang, B., Heckenlively, J. R. Mouse models of age-related macular degeneration. Exp. Eye Res. 82, 741-752 (2006).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

T pSay 84Indosiyanin Ye il AnjiyografiISYAkoroid damarya a ba l makula dejenerasyonuAMDPolipoidal Koroid Vask lopatiPCVkonfokal taray c laser oftalmoskopIV ISYAzaman ders ISYAkuyruk ven enjeksiyon

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır