JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Burada, alt uygulamalar ve diğer farklılıklar iyileştirilmesi için kesin endoderm doğru kararlı farklılaştırılmış insan embriyonik kök hücrelerinin saflaştırılması için bir yöntem açıklanmaktadır.

Özet

embriyonik kök hücrelerin (ESCs) halinde pluripotent kök hücrelerin farklılaşması yetenekleri hücre yenileme terapisi için potansiyel bir terapötik uygulama sağlar. Terminal olarak farklılaşmış hücre türleri., Çeşitli dejeneratif hastalıkların tedavisinde kullanılan, akciğer, karaciğer ve pankreas dokularında karşı bu hücrelerin in vitro farklılaşma, bir birinci basamak olarak kesin endodermal hücrelerinin üretilmesini gerektirir edilebilir. Bu adım, oran-sınırlayıcı insülin üreten beta hücrelerinin hepatositlere ya da diğer endoderm türetilmiş hücre türleri terminal olgun hücre tipleri yönünde daha fazla türev içindir. endoderm soy doğru kararlıyız Hücreler çok böyle FOXA2, SOX17, HNF1B GATA aile üyeleri ve yüzey reseptörü CXCR4 olarak transkripsiyon faktörlerinin çok sayıda ifade eder. Ancak, farklılaşma protokolleri nadiren% 100 etkilidir. Burada, farklılaşma sonra CXCR4 + hücre popülasyonunun saflaştırılması için bir yöntem açıklanmaktadırManyetik mikroboncuklarm kullanarak DE içine. Bu saflaştırma ek istenmeyen soy hücreleri ortadan kaldırır. yumuşak bir saflaştırma yöntemi, hızlı ve güvenilir olduğu ve aşağı doğru uygulamalar ve farklılaşmaları geliştirmek için kullanılabilir.

Giriş

embriyonik kök hücrelerin (ESCs) halinde pluripotent kök hücreleri, insan vücudunun hemen hemen herhangi bir hücre türü ayırt etmek yeteneğine sahiptir. Bu nedenle, in vitro farklılaşma protokolleri, kardiyomiyositlerde 1, hepatositler 2, beta hücreleri 3 akciğer epitelyal 4 ya da nöronal hücrelerin 5 gibi çok sayıda yetişkin hücre türleri oluşturmak için de kullanılabilir. Bu ESCS çeşitli dejeneratif hastalıkların 3 potansiyel tedavisi için değerli bir araç sağlar.

Akciğer, karaciğer ve pankreas yetişkin dokularda doğru EKH in vitro farklılaşma kesin endoderm (DE) 6 andıran hücreleri içine bir sözde Gastrulasyon gerektirir. Bahsedilen somatik hücre tiplerinin üzerinden aşağı doğru farklılaşma önemli ölçüde daha az etkili olduğu için, optimal bir endoderm farklılaşma 7 oran-sınırlayıcı olarak kabul edilir. endoderm soy doğru kararlıyız Hücreler cha geçmesigen ekspresyon profili Karakteristik değişir. Pluripotensin ana düzenleyici genler aşağı düzenlenir gibi 9. CXCR4 Smad2 tarafından Transaktive bilinmektedir FOXA2, SOX17, HNF1B GATA aile üyeleri ve CXCR4 yüksek 6 yukarı düzenlenen bir yüzey reseptörü, 8, diğer transkripsiyon faktörleri salınımı / 3, bağlı, destekleyici bölgesi 10'da spesifik bağlanma sitelerine düğüm / TGF-β sinyalizasyon ve SOX17 aşağı doğru. Böylece raporları 6, 8, 11-13, bir dizi kullanılan çok uygun bir belirtecidir. Bu sentezleme değişiklikler ESCs ilk ilkel bir çizgi-benzeri hücre popülasyonunun özelliklerini kazanmak ve daha sonra endoderm tohumu tabaka 6 olarak tamamlama olan bir sözde-Gastrulasyon etkinliği yansıtmaktadır.

Birkaç hücre farklılaşma sürecine karşı veya diğer istenmeyen soyları 14 doğru ayırt edilebilir Ancak, farklılaşma protokolleri nadiren% 100 etkilidir. Bu hücreler, negatif ha olabilirnce ileri farklılaşma. Ayrıca, artık farklılaşmamış hücreler daha sonra transplantasyon deneyler için büyük riskler barındıran ve teratom 15-17 sebebiyet verebilir.

Erken yüzey işaretleyici CXCR4 DE 18 doğru işlenen hücrelerin saflaştırılması için de kullanılabilir, bu istenmeyen hücreleri çıkarmak için. Burada, DE farklılaşma kültürlerinden CXCR4 + hücreleri pozitif seçim için bir yöntem tarif eder. Bunun için, yüzey işaretleyici CXCR4 daha sonra da manyetik mikro boncuklar bağlanan bir antikor ile bağlıdır. FACS sıralama sırasında zorlu koşullarda farklı olarak, manyetik olarak etiketlenmiş DE-benzeri hücreler, daha sonra kolayca hafif bir saflaştırma yöntemi kullanılarak bir tezgah üstü bir biçimde saflaştırılabilir. Bu protokol, DE farklılaşma sürecine karşı hücre popülasyonlarının çıkarılması için basit bir yöntem sağlar.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Kesin endoderm doğru İnsan ESC 1. Farklılaşma

  1. 37 ° C'de bir kuluçka insan embriyonik kök hücreleri (ESCs) yetiştirmek ve% 5 CO2.
  2. Coat bazal membran matris 1 ml yeni 6 oyuklu hücre kültürü plakasının ve oda sıcaklığında en az 30 dakika süre ile kültür eşya inkübe edin. Belirli ayrıntılar için ilgili üreticinin talimatlarına çevirmek lütfen.
  3. Kültürlü insan EKH (örneğin, 4X) düşük büyütme kullanılarak mikroskop altında% 80 -90% confluency ulaşmış emin olun. steril cam Pasteur pipetiyle orta kapalı emerek boşluklardan gelen orta aspire. Fosfat tamponlu tuz (PBS) çözeltisi ile bir kez hücreler yıkanır. Bunun için, usulca her kuyuya 2 ml PBS eklemek plaka sallamak ve ölü hücreleri ve hücre enkaz kaldırmak için çözüm emmek.
  4. hücre kümeleri nazik ayrışması için enzim içermeyen pasajlama çözüm reaktif 1 ml ekleyin. 37 ° C, bir hücreleri inkübed% 5 CO 2 hücreleri küçük kümeler halinde bozulma net işaretler göstermek kadar.
    NOT: İnkübasyon süresi kullanılan reaktif bağlıdır. malzemeler bölümünde belirtilen enzim içermeyen pasajlama çözümü için, kuluçka süresi yaklaşık 7 dk.
  5. 1 mi DMEM / F-12 ortamı ilave edin ve pipetleme ve 1 ml pipet ucu kullanarak aşağı tek bir hücre içine kalan hücre birikintisinin yok. yüzey hücreleri temizleme ve bir santrifüjleme tüp hücreleri aktarmak için kullanın. Tüm hücreler almak için, DMEM / F-12 ortamı, 1 ml her bir yıkama ve santrifüj tüpüne orta ekleyin.
  6. g x 300, 5 dakika boyunca hücreler santrifüj. Süpernatant aspire ve 10 uM, Rho-kinaz (rock) inhibitörü içeren 5 ml ES hücre kültürü ortamında tekrar süspansiyon hücreleri.
  7. hemasitometre kullanarak mikroskop altında hücrelerin sayısı ve 150.000 tohum - kullanılan ES hücre hattı bağlı, 6-kuyu başına ya da başka bir plaka taslağına 400.000 hücreleri. Kullanım cul37 ° C ve% 5 CO2 seviyesinde apoptozu ve kültür, bir kuluçka makinesi içinde hücreleri önlemek için orta ihtiva eden 10 uM ROCK inhibitörü Ture.
  8. Yaklaşık 24 saat steril cam Pasteur pipet ile orta aspirat tohumlama ve ilkel çizgi indüksiyon orta 2 ml ekleyin sonra.
    NOT: Bu ortam Gelişmiş RPMI-1640 ortamı içinde% 1 glutamin,% 0.2 FCS, 5 uM CHIR-99.021 ve 50 ng / ml, aktivin A'nın nihai konsantrasyonlar içerir. Genel olarak, 6 oyuklu plakalar içinde kültivasyonu için ortam 2 ml kullanın.
  9. 48 saat tohumlama sonra, indüksiyon orta endoderm için orta yerine. Günlük bir değiştirilen ortam içinde bir 48 saat daha, bu ortam içinde hücrelerin kültive edilmesi.
    NOT: Bu ortam Gelişmiş RPMI-1640 ortamı içinde% 1 glutamin,% 0.2 FCS ve 50 ng / ml aktivin A ihtiva etmektedir. Kesin endoderm doğru kararlıyız Hücreler yüzey işaretleyici CXCR4 ifade eder. CXCR4'ün boyama DE-işlenen hücrelerin sayısını belirlemek için kullanılabilir.
2. Sitometrisi Analizi CXCR4 + Kesin Endoderm Hücrelerinin boyanması

  1. hasat öncesi son 24 saatte, ancak en az 1 saat süre ile hücre kültür ortamına 10 uM ROCK önleyici.
  2. Kat yani bazal membran matrisi ile yeniden oluşturma, kullanılacak hücre kültürü ürünleri, immünofloresan boyama qPCR analiz veya oda slaytlar 12 oyuklu plakalar. Oda sıcaklığında en az 30 dakika boyunca plakaları veya slaytlar inkübe edin.
  3. boyama ve / veya sıralama için kullanılan farklılaşmış hücrelerin kuyulardan steril cam Pasteur pipet ile orta aspire.
  4. hücre kümeleri nazik ayrışması için enzim içermeyen pasajlama çözüm reaktif 1 ml ekleyin. Hücreler küçük kümeler halinde bozulma net belirtileri göstermeye kadar CO 2 37 ° C'de inkübe hücreleri ve% 5.
    NOT: İnkübasyon süresi kullanılan reaktif bağlıdır. Bakır Aynalar belirtilen enzim içermeyen pasajı çözümü içinals bölümü, kuluçka süresi yaklaşık 7 dk.
  5. 1 ml DMEM / F-12 orta ekleyin ve yukarı pipetleme ve 1 ml ucunu kullanarak aşağı tek hücre içine hücre agrega kalan bozabilir. yüzey hücreleri temizleme ve bir santrifüjleme tüp hücreleri aktarmak için kullanın. Tüm hücreler almak için, / FCS O W, DMEM / F-12 ortamı, 1 ml her bir yıkama ve santrifüj tüpüne orta ekleyin.
  6. hemasitometre kullanarak mikroskop altında hücreleri saymak. 6 yuvalı plaka üç kuyu hücre farklılaşmasının üç gün sonra 10-15 x 10 6 hücre ile sonuçlanmalıdır. g x 300, 5 dakika boyunca hücreler santrifüj.
    Not: Elde edilen hücreler tam sayısı ayırımında kullanılan pluripotent hücre hattına bağlıdır.
  7. Süpernatant aspire ve 10 uM ROCK inhibitörü içeren PEB tampon içinde tekrar süspansiyon hücreleri. 10'a kadar 7 hücreleri, bu tampon 100 ul kullanın. staini gününde 10 uM ROCK inhibitörü eklemeng. (PEB tamponu + UR olarak anılacaktır) tüm alt uygulamalar için bu tampon kullanın.
    NOT: PEB tamponu,% 0.5 BSA ve PBS içinde 2 mM EDTA içermektedir. daha fazla hücre lekeli isteniyorsa, buna göre tampon seviyesini ayarlamak.
  8. Bu kabaca 1:10 seyreltme temsil 100 ul 10 7 hücre başına bir CXCR4-APC antikoru 10 ul ekleyin.
    NOT: Bir APC bağlı antikor kullanımı zorunlu değildir. Bunun yerine kullanılan mikro-bağlı ikame edilebilir. daha fazla hücre lekeli gerekiyorsa buna göre antikor seviyesini ayarlamak.
  9. hafifçe parmak boru çevirerek karıştırın ve 15 dakika boyunca bir buzdolabında 4 ° C'de inkübe edin. 1-2 ml PEB tamponu ile tekrar süspansiyon hücreleri. g x 300, 5 dakika boyunca hücreler santrifüj.
  10. Steril cam Pasteur pipetle süpernatant aspire ve 10 7 hücre başına 80 ul PEB hücre pelletini ve 20 ul anti-APC mikroboncukları ekleyin.
    NOT: , buna göre mikro boncuk ses seviyesini ayarlamak.
  11. hafifçe parmak boru çevirerek karıştırın ve 15 dakika boyunca bir buzdolabında 4 ° C'de inkübe edin. 1-2 ml PEB tamponu + RI ile hücreleri tekrar süspansiyon. g x 300, 5 dakika boyunca hücreler santrifüj. tampon aspire. 500 ul PEB tamponu + RI içinde süspanse.

CXCR4'ün + Hücreleri 3. Manyetik Ayırma

  1. üretim talimatlarına göre bir manyetik alan içinde orta büyüklükte bir manyetik sütun yerleştirin. 500 ul PEB tamponu + RI ile sütun ön durulayın. sütun tüm hücre süspansiyonu uygulayın. kolona bağlanacağı şekilde tüm hücreler akışı toplamak. Emin CXCR4 + hücreler optimum alımı için sütunları rahatsız etmemek olun.
  2. sütun 500 ul PEB tamponu + RI ile üç kez yıkayın. üzerinden ilk akışını toplamak ve Adım 3.1 toplanan hücreler ile birleştirmek. manyetik alan manyetik sütun çıkarın ve koyunUygun toplama tüpü. kolona 1 mi PEB tamponu + RI ekleyin. Hücreler sıkıca sütuna pistonu bastırın Zehir için.
  3. İsteğe bağlı: ayrı ayrı örnekler üzerinden tüm akışını toplamak ve akım sitometri kullanarak CXCR4 + hücrelerin sayısını analiz etmek 20 ul her kullanın. Onların sayısı her yıkama adımda düşüş gerekir.
    NOT: En az 2 x 10 4 canlı, kapı hücreler güvenilir sonuçlar için sayılmalıdır.
  4. Tekrarlayın Adım 3.1 numune boyunca toplanan akışı ve yeni bir sütun kullanarak adım 3.2 numune boyunca ilk akışı ile 3.1-3.3 adımları tekrarlayın. Do not önceki sütun yeniden kullanın. piston havası kullanılarak bloke sütunun içine bastırılır.
  5. hemasitometre kullanarak mikroskop altında hücreleri saymak. 6 x 10 6 hücre farklılaşma kadar etkinliğine bağlı olarak, ilk kriteri ve işlem 10 7 hücreleri kullanıldığında, ikinci bir kolon kullanılarak bir 1 x 10 6 hücre olabilir.
  6. 5 dakika boyunca 300 xg'de hücreleri Santrifüj. Süpernatant aspire ve steril bir cam Pasteur pipetle ve ek 10 uM ROCK inhibitörü ile Adım 1.9 1 ml endoderm indüksiyon ortamı hücreleri tekrar süspansiyon.
  7. hemasitometre kullanarak mikroskop altında hücreleri saymak. Uygun bir yoğunlukta hücreler Tohum, yani ~ 12 oyuklu plakanın her bir kuyucuğu başına 4 x 10 5 hücre (app. 3.6 cm2 yüzey) ya da ~ 8 oyuklu odacık sürgünün oyuk başına 1.5 x 10 5 hücre.

4. İsteğe bağlı: Arıtılmış Kesin Endoderm Nüfus Analizi

  1. immünofloresan boyama kabaca 24 saat kesin endoderm (DE) ve / veya Pluripotency işaretleyici proteinleri% 4 formaldehit ve leke tohumlama sonra Adım 3.7 saflaştırılmış hücreleri düzeltmek.
    Not: Genellikle kullanılan DE belirteçler FOXA2 ve SOX17 arasında, yaygın olarak kullanılan pluripotense belirteçleri OCT3 / 4, Nanog ve Sox2 6, 8 bulunur.
  2. foR RT-qPCR analizi, doğrudan ya da 24 saat sonra tohumlama saflaştırılmış hücreler hasat Toplam RNA çıkarmak ve çıkarılan toplam RNA örneklerinden cDNA ters transkribe. DE ve pluripotense işaretçi genler 6, 8 ekspresyonunu analiz etmek için RT-qPCR reaksiyon (kopyaların) cinsinden kalıp olarak 10 ng cDNA kullanın.
    Not: Genellikle kullanılan marker genleri Aşama 4.1'de bahsedilmektedir. Döngü koşulları eğrisi analizi eriterek, ardından 95 ° C'de 5 dakika ve 95 ° C'de 15 saniye 40 döngü, 60 ° C'de 1 dakika, bulunmaktadır.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

farklılaşma üzerine EKH gen ve protein ekspresyonu köklü değişim geçirirler. 1 başarılı endoderm farklılaşmasını kontrol etmek için kullanılabilecek tipik marker genleri tasvir etmektedir. Bir gen ekspresyon analizi için ana hedeflerdir GSC, FOXA2 ve SOX17 bulunmaktadır. Farklılaşmamış EKH karşılaştırıldığında göreceli gen ekspresyon analizi, özellikle FOXA2 ve SO...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Şu anda kullanılan farklılaşma protokolleri nadiren% 100 farklılaşmış hücrelerin neden. hala ele alınması gereken nedenlerden dolayı bazı hücreler farklılaşma sürecini karşı. kullanılan farklılaşma protokolünün verimlilik ve ESC eğilimi bağlı kalan pluripotent hücrelerin belirli bir sayıda yaygın, hatta kesin endoderm içine farklılaşma sonra gözlenir hattı. Bunlar artık hücreler gibi transkriptomik, proteomik ve miRNA ifade analizi olarak aşağı farklılaşmaları veya daha fazla a...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Açıklamalar

The authors declare that they have no competing financial interests.

Teşekkürler

Jasmin Kresse usta teknik yardım minnetle kabul edilmektedir.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Hues8 human embryonic stem cell lineHarvard Department of stem cell & regenerative biologySuitable cell line for endoderm generation
Hes3 human embryonic stem cell lineES Cell InternationalSuitable and robust cell line for endoderm generation
mTeSR1Stemcell Technologies5850ESC culture medium
FCSBiowestS1860
Advanced RPMI 1640Life Technologies12633012
CD184 (CXCR4)-APC, humanMiltenyi Biotec130-098-357
anti-APC MicroBeadsMiltenyi Biotec130-090-855 
OctoMACS SeparatorMiltenyi Biotec130-042-109magnetic field
Y-27632Selleck ChemicalsS1049ROCK inhibitor
CHIR-99021Tocris Bioscience4423
Activin APeprotech120-14
Gentle Cell Dissociation ReagentStemcell Technologies7174Enzyme-free passaging solution, alternative: Trypsin/EDTA
Matrigel*Corning354277basement membrane matrix
* solve and store in aliquots at -80 °C as outlined in the suppliers manual. Upon use, thaw on ice, dilute in 25 ml ice-cold knockout DMEM/F-12.
Add 1 ml to each well of a 6-well plate and incubate for 45 min at room temperature.
Remove the matrigel and use immediately.
MS ColumnsMiltenyi Biotec30-042-201
MACS SeparatorMiltenyi Biotec130-042-302
Human FOXA2 FW
gggagcggtgaagatgga		Life TechnologiesNA
Human FOXA2 REV
tcatgttgctcacggaggagta		Life Technologies
Human GSC FW
gaggagaaagtggaggtctggtt		Life Technologies
Human GSC REV
ctctgatgaggaccgcttctg		Life Technologies
SOX17 TaqMan assayApplied BiosystemsHs00751752_s1
Human SOX7 FW
gatgctgggaaagtcgtggaagg		Life Technologies
Human SOX7 REV
tgcgcggccggtacttgtag		Life Technologies
Human POU5F1 FW
cttgctgcagaagtgggtggagg		Life Technologies
Human POU5F1 REV
ctgcagtgtgggtttcgggca		Life Technologies
Human Nanog FW
ccgagggcagacatcatcc		Life Technologies
Human Nanog REV
ccatccactgccacatcttct		Life Technologies
Human TBP FW
caa cag cct gcc acc tta cgc tc		Life Technologies
Human TBP REV
agg ctg tgg ggt cag tcc agt g		Life Technologies
Human TUBA1A FW
ggc agt gtt tgt aga ctt gga acc c		Life Technologies
Human TUBA1A REV
tgt gat aag ttg ctc agg gtg gaa g		Life Technologies
Human G6PD FW
agg ccg tca cca aga aca ttc a		Life Technologies
Human G6PD REV
cga tga tgc ggt tcc agc cta t 		Life Technologies
Anti-SOX2Santa Cruz Biotechnologysc-17320
Anti-FOXA2MerckMillipore07-633
Anti-SOX17R&D SystemsAF1924

Referanslar

  1. Sharma, A., Li, G., Rajarajan, K., Hamaguchi, R., Burridge, P. W., Wu, S. M. Derivation of Highly Purified Cardiomyocytes from Human Induced Pluripotent Stem Cells Using Small Molecule-modulated Differentiation and Subsequent Glucose Starvation. J Vis Exp. (97), (2015).
  2. Sgodda, M., et al. Improved hepatic differentiation strategies for human induced pluripotent stem cells. Curr Mol Med. 13 (5), 842-855 (2013).
  3. Naujok, O., Burns, C., Jones, P. M., Lenzen, S. Insulin-producing surrogate beta-cells from embryonic stem cells: are we there yet. Mol Ther. 19 (10), 1759-1768 (2011).
  4. Katsirntaki, K., et al. Bronchoalveolar sublineage specification of pluripotent stem cells: effect of dexamethasone plus cAMP-elevating agents and keratinocyte growth factor. Tissue Eng Part A. 21 (3-4), 669-682 (2015).
  5. Abranches, E., et al. Neural differentiation of embryonic stem cells in vitro: a road map to neurogenesis in the embryo. PLoS One. 4 (7), e6286(2009).
  6. Naujok, O., Diekmann, U., Lenzen, S. The generation of definitive endoderm from human embryonic stem cells is initially independent from activin A but requires canonical Wnt-signaling. Stem Cell Rev. 10 (4), 480-493 (2014).
  7. D'Amour, K. A., et al. Production of pancreatic hormone-expressing endocrine cells from human embryonic stem cells. Nat Biotechnol. 24 (11), 1392-1401 (2006).
  8. Diekmann, U., Lenzen, S., Naujok, O. A reliable and efficient protocol for human pluripotent stem cell differentiation into the definitive endoderm based on dispersed single cells. Stem Cells Dev. 24 (2), 190-204 (2015).
  9. Kim, P. T., Ong, C. J. Differentiation of definitive endoderm from mouse embryonic stem cells. Results Probl Cell Differ. 55, 303-319 (2012).
  10. Katoh, M., Katoh, M. Integrative genomic analyses of CXCR4: transcriptional regulation of CXCR4 based on TGFbeta, Nodal, Activin signaling and POU5F1, FOXA2, FOXC2, FOXH1, SOX17, and GFI1 transcription factors. Int J Oncol. 36 (2), 415-420 (2010).
  11. Nostro, M. C., et al. Stage-specific signaling through TGFbeta family members and WNT regulates patterning and pancreatic specification of human pluripotent stem cells. Development. 138 (5), 861-871 (2011).
  12. Rezania, A., et al. Maturation of human embryonic stem cell-derived pancreatic progenitors into functional islets capable of treating pre-existing diabetes in mice. Diabetes. 61 (8), 2016-2029 (2012).
  13. Bruin, J. E., et al. Maturation and function of human embryonic stem cell-derived pancreatic progenitors in macroencapsulation devices following transplant into mice. Diabetologia. 56 (9), 1987-1998 (2013).
  14. Fu, W., Wang, S. J., Zhou, G. D., Liu, W., Cao, Y., Zhang, W. J. Residual undifferentiated cells during differentiation of induced pluripotent stem cells in vitro and in vivo. Stem Cells Dev. 21 (4), 521-529 (2012).
  15. Hentze, H., Soong, P. L., Wang, S. T., Phillips, B. W., Putti, T. C., Dunn, N. R. Teratoma formation by human embryonic stem cells: evaluation of essential parameters for future safety studies. Stem Cell Res. 2 (3), 198-210 (2009).
  16. Herberts, C. A., Kwa, M. S., Hermsen, H. P. Risk factors in the development of stem cell therapy. J Transl Med. 9, 29(2011).
  17. Naujok, O., Kaldrack, J., Taivankhuu, T., Jörns, A., Lenzen, S. Selective removal of undifferentiated embryonic stem cells from differentiation cultures through HSV1 thymidine kinase and ganciclovir treatment. Stem Cell Rev. 6 (3), 450-461 (2010).
  18. Pan, Y., Ouyang, Z., Wong, W. H., Baker, J. C. A new FACS approach isolates hESC derived endoderm using transcription factors. PLoS One. 6 (3), 17536(2011).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

Geli imsel BiyolojiSay 109insan pluripotent k k h creleriembriyonik k k h crelerifarkl la makesin endodermar tmaMACS

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır