Method Article
By assessing pain in response to repetitive or different types of standardized stimuli, dynamic quantitative sensory testing (QST) can reveal changes in the central processing of pain. We present methods to optimize and individualize two dynamic QST measures: temporal summation (TS) and conditioned pain modulation (CPM).
Central facilitation and modulation of incoming nociceptive signals play an important role in the perception of pain. Disruption in central pain processing is present in many chronic pain conditions and can influence responses to specific therapies. Thus, the ability to precisely describe the state of central pain processing has profound clinical significance in both prognosis and prediction. Because it is not practical to record neuronal firings directly in the human spinal cord, surrogate behavior tests become an important tool to assess the state of central pain processing. Dynamic QST is one such test, and can probe both the ascending facilitation and descending modulation of incoming nociceptive signals via TS and CPM, respectively. Due to the large between-individual variability in the sensitivity to noxious signals, standardized TS and CPM tests may not yield any meaningful data in up to 50% of the population due to floor or ceiling effects. We present methodologies to individualize TS and CPM so we can capture these measures in a broader range of individuals than previously possible. We have used these methods successfully in several studies at the lab, and data from one ongoing study will be presented to demonstrate feasibility and potential applications of the methods.
Ağrı Çalışmaları Uluslararası Birliği (IASP) olarak ağrıyı tanımlar "hoş olmayan bir duyusal ve duygusal bir deneyim." Kronik ağrı 6 aydan fazla devam ağrısı olarak tanımlanır. Kronik ağrı yılda 635.000.000.000 $ bir maliyeti yukarı da 100 milyondan fazla Amerikalı yetişkin etkileyen Amerika Birleşik Devletleri'nde önemli bir sorundur. Araştırmacılar ve klinisyenler objektif, bir kişinin acı bir deneyim (ler) ölçmek nedenle değerlendirmek ve ağrı tedavisinde zorlu hale getirmek için 1 ağrı öznel doğası nedeniyle, zordur. Bundan dolayı, biz olabildiğince objektif bir şekilde ağrı ölçmek için standardize testler geliştirilmesi önemlidir. Böyle bir testi standart duyusal uyaranlar uygulanan ve denek tarafından derecelendirilir KDT vardır. 2 statik ve dinamik KDT vardır. İkincisi değerlendirir iken eski tipik duyusal eşikler veya tek bir uyaran notunu değerlendiriyoruyaranlara bir dizi yanıt. O gelen nosiseptif sinyallerin merkezi işleme soruşturma fırsatı sunuyor çünkü 3 Son zamanlarda, dinamik KDT artan ilgi görmüştür. 4, 5, 6
Dinamik KDT iki temel bileşenleri zamansal toplamı (TS) ve klimalı ağrı modülasyonu (CPM) 'dir. Geçici toplama tekrarlayan, ağrılı uyarılara gelen ağrı artan algı anlamına gelir. TS rüzgar-up, spinal ikincil nöronlar nedeniyle tekrarlayan c-fiber girişine ateş artmış göstermezse fenomenin bir davranış korelatı. 7, 8 Genel olarak, TH, ısı, elektrik, ve dokunsal yöntemleri (basınç ya da iğne) gibi çeşitli zararlı uyarıcıya kullanılarak indüklenebilir, tekrar eden uyarıcı sıklığı, c doğal frekans 0.3Hz daha büyük olması koşuluyla, -Fibers. 9, 10 Birçok araştırmacı üreten ve zararlı ısı uyaranlara standartlaştırılması nedeniyle kolaylığı TS oluşturmak için tekrarlayan ısı darbeleri kullanın. 11
CPM ikinci zararlı uyaranın varlığı ilk uyarana gelen ağrı algısını azaltır olgusu "ağrı ağrıyı inhibe" anlamına gelir. 12 saniyelik bir uyarıcının uygulanması önce ve sonra (ya da sırasında) ölçülür başlangıç zararlı uyaran, uyarım testi olarak adlandırılır. Test uyaran termal, elektrik ya da dokunsal olabilir. Burada termal uyaran sık sık ayarlama ve standardizasyon kolaylığı test uyarıcı olarak kullanılır. 13 İkinci uyaran, tipik bir uzak ucundan uygulanan bir soğuk veya sıcak su banyosu oluşur, klima uyarısı çağırdı. 13 CPM davranışsal korelasyon o olduğunuf Diffüz Zehirli Önleyici Kontrolü (DNIC), fizyolojik bir fenomen nereye girdi heterotopik alanlardan c-fiber aracılık gelen tüm uyaranların beyin sapından yaygın inhibe periferik c-lifler sonuçları. 12, 14
TS ve CPM hem devletler ve merkez ağrı işleme değişiklikleri yansıtacak şekilde potansiyeline sahip olsa da, sınırlamalar hem de mevcuttur. Isı bireylerin hassasiyeti büyük farklılıklar vardır, çünkü 4, 5, örneğin, bir genel uyarıcının uygulanması test bireylerin% 50'ye kadar TS eksikliği ile sonuçlanabilir. 11, 15 Benzer şekilde, bir termal testi uyaran genellikle zemin veya tavan etkilerinden dolayı imkansız CPM testi hale getirebilir çok farklı ağrı değerlendirmesi ile sonuçlanır. 16 Bu nedenle, geniş reklam bir protokol TS ve CPM yakalamak içintek tek gerekli olan ısı uyarıcı justs. Onlar birbirini izleyen darbe ile ağrı değerlendirmesi yeterli artış oluşturabilir böylece TS için, ısı darbe sıcaklıkları ayarlamak; CPM için, her birey için orta derecede ağrılı termal uyarım testi (10 üzerinden 6) ayarlarken yeterli ağrı dereceleri hala bir iyileştirme uyaran uygulandıktan sonra bulunabilir ki.
Tüm psikofiziksel testler için ağrılı uyaranlar uygun derecelendirmesi katılımcının eğitim bu davranışsal testlerin doğruluk ve tekrarlanabilirlik için çok önemlidir. Birden fazla uyaranlara iki farklı uyaranlara katılımcıya aynı anda uygulanır CPM durumunda, bir hızla sunulmuş ve zaman 17 Bu TS özellikle ilgilidir. Ayrıca, ısı darbeleri TS, yavaş, yanma, genellikle ısı pu sonra yaklaşık 1 saniye yanar (c-fiber aracılı ikinci acıyı Oranı katılımcıyı yetiştirmek özellikle önemlidirLSE) ve birinci ağrı (A-delta liflerinin aracılık ve ısı darbesi ile hemen gel). 18, 19 Bu az orada çok daha uzun (> 30 sn) ve C-lif aracılı hissi bu gibi durumlarda zararlı algı hakim olur uyaranlara olarak CPM bir sorun. Aşağıdaki protokol 19, 20, ayrıntılı olarak katılımcıların uygun eğitim üzerine gidecek.
1. Geçici Toplama Protokolü
2. Klima Ağrı Modülasyon Protokolü
kronik eksen bel ağrısı olan hastalarda derin fenotiplendirilmesini gerçekleştirilen devam eden bir klinik çalışmada, biz değerlendirmenin ayrılmaz bir parçası olarak dinamik KDT dahil. Aşağıdaki Tablo 3 tam TS ve CPM protokol yukarıda kullanılan ilk 15 hastadan temel veriler özetlemektedir. tüm 19 askere hastalar nedeniyle zamanlama çatışmalar ve diğer durum onların değerlendirilmesi için geldi çünkü veri hasta 19. içerdiğini unutmayın. Şekil 5 görsel Bu hastalarda santral ağrı işleme değişiklikleri kalıplarını ortaya çıkarmak için TS ve CPM veri yüzü-by-side görüntüler.
Bir tek tek optimizasyon protokolü kullanılarak, yukarıda gösterildiği gibi, 0-10 VAS ölçekte 2.7 bir ortalama tenar eminensin de TS elde edilmiştir. Biz güvenilir sn tespit etmek mümkün değildi Katılımcı 1, hariç tüm 19 katılımcılarda TS elde başardıkİlk ağrı hissi tarafından boğulmuş olmadan ond ağrı. Katılımcı 13 CPM görevi yaşanmadığını erken böylece ayrılmak için gerekli. Aksi takdirde 18 katılımcılar CPM gösterdi, ortalama yaklaşık 3.1 olduğunu. Biz konuların çoğunda bazı TS derecesini ve CPM ulaşmada başarılı olmuştur; ve TS ve CPM büyüklüğü literatürde ile tutarlıdır. 13, 15, 22
Şekil 4'te gösterildiği gibi Dahası, TS ve CPM eşzamanlı ölçümü merkezi ağrı işleme hastanın profilde içgörü yol açabilir. Düşük CPM nosiseptif iletim inhibe inen engelli anlaşılacağı ederken basitleştirilmiş açısından söylemek gerekirse, yüksek TS anormal artar artan kolaylaştırma gösterebilir. Örneğin, Katılımcı 10, (10 üzerinden) 7.7 yüksek TS gösterdi Katılımcı 18 iblisleri iseesasen yok CPM (-0.5 / 10) trated. Birçok öncü çalışmalar merkezi ağrı işleme gibi farklı profil ameliyat sonrası kronik ağrı gelişiminin farklı oranlarda ve belirli santral ağrı yollarının hareket ilaçlara farklı tepkiler tahmin olabileceğini göstermiştir. Burada bu örnekte 4, 23, 24, 25, Gabapentin, bir kalsiyum kanal blokörü cevap olabilir Katılımcı 10 spekülasyon makul iken Duloksetin, bir serotonin-norepinefrin geri alım inhibitörü cevap olabilir CPM engelli olan Katılımcı 18. Açıkçası daha fazla veri ve çalışmalar hipotezleri doğrulamak için gereklidir. girişimsel deneme devam etmektedir ve akupunktur ve sahte elektroakupunktur bu sırt ağrısı hastaların tepkisini değerlendirecektir. Burada sunulan bireyselleştirilmiş KDT yöntemi bize olarak TS ve CPM değişiklikleri doğru ve uzunlamasına izlemek için izin verecekmümkün olan birçok kişi.
Eğitim Deneme 1. Kullanılan Şekil 1. Tek Isı Bakliyat Her ısı pule 0.5 sn sürer ve bir sonraki ısı darbesinin 10 s dışında olduğunu. Her darbenin başlangıç ve tepe sıcaklıkları kademeli Tablo 2'ye göre artmaktadır. En kısa sürede katılımcı ikinci bakliyat herhangi birinden ağrı, eğitim deneme 1 bitiş noktası ulaşıldığında ve kaydedilen ve Eğitim Deneme 2'de kullanılan ikinci ağrının algılanmasına yol açar darbe sıcaklık ayarlarını algılar olarak görüntülemek için tıklayınız Bu rakamın daha büyük bir versiyonu.
Eğitim Tr Kullanılan Şekil 2. Isı Darbe Tren2, Optimizasyon ve Final TS Denemeleri IAL. On ısı bakliyat, uzun her 0.5 sn ve 2 s dışında, bir TS davasında teslim edilir.
Şekil 3. tanımlanması P1, P max ve TS e. P1: ilk atıştan ikinci ağrı oylaması; P max: tüm 10-darbeli trenin ikinci ağrının maksimum değer; TS E: zamansal toplamı tahmini büyüklüğü. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Şekil 4. Algoritmalar Bireysel Geçici Toplama Optimize. Burada amaç tahmini t neden dayanak ve zirve darbe sıcaklıkları bulmaktıremporal toplama (TSE) 10 üzerinden VAS 3 ila 7. TSE hedef altında ise, 1 ° C sekans tepe ve taban sıcaklıkları artar. TSE hedefi üzerinde ise, 1 ° C sırayla tarafından bazal ve pik sıcaklıkları azaltır. Yukarıdaki algoritma önce, ilk ısı darbesinin emin ağrı değerlendirmesi ≤ 5 küçük (0.5-1 ° C) artışlarla bazal ve pik darbe sıcaklıkları azaltarak olduğundan emin olun. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Bir Devam Klinik Araştırma gelen Hastalarda Şekil 5. TS ve CPM Profilleri. Devam eden bir klinik çalışmada kronik bel ağrılı ilk 19 hastada TS ve CPM Taban ölçümü. göreceli TS ve CPM büyüklükte çeşitli desenler yüzde potansiyel farklılıkları ortaya koymaktadırral ağrı işleme. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Deneme | Bakliyat içinde | uyarıcı Süre | ISI tepe noktasını | rampa Oranı | Baseline Sıcaklık | Maksimum Sıcaklık |
Eğitim Deneme 1 | 1 darbe | 0,5 s | 10 s | 40 ° C / sn | Değişken (bakınız Tablo 2) | Değişken (bakınız Tablo 2) |
Eğitim Deneme 2 | 10 bakliyat | 0,5 s | 2 s | 40 ° C / sn | Eğitim Deneme 1 | Eğitim Deneme 1 |
Optimizasyon Denemeler | 10 bakliyat | 0,5 s | 2 s | 40 ° C / sn | Eğitim Deneme 1 temps ile başlayan | Eğitim Deneme 1 temps ile başlayan |
nihai Denemeler | 10 bakliyat | 0,5 s | 2 s | 40 ° C / sn | bireyselleştirilmiş | bireyselleştirilmiş |
Tablo 1: (eğitim denemeleri dahil) TS Protokolde Kullanılan Isı Uyaranların Özellikleri.
Darbe sayısı | Baseline Sıcaklık (° C) | Tepe sıcaklık (° C) |
1 | 36 | 45 |
2 | 36 | 46 |
3 | 37 | 47 |
4 | 38 | 48 |
5 | 39 | 49 |
6 | 40 | 50 |
7 | 41 | 51 |
8 | 42 | 51 |
9 | 43 | 51 |
10 | 44 | 51 |
Tablo 2: Eğitim Deneme 1. İkinci Ağrı Yakalama için kullanılır Sıcaklık ayarları bu sıcaklık parametreleri ile teslim tek ısı bakliyat şekli için Şekil 1'e bakınız.
subj kimliği | Base T | Doruk T | TS | Isı 6 | CPM |
Selsius | Selsius | VAS | Selsius | VAS | |
1 | 0 | 44 | 4.4 | ||
2 | 41 | 51 | 0.43 | 47.6 | 4,717 |
3 | 40 | 50 | 0.5 | 44.7 | 4.42 |
4 | 38 | 49 | 0.45 | 44 | 4,355 |
5 | 42 | 51 | 3,287 | 44 | 4,0713 |
6 | 44 | 51 | 0.415 | 45.5 | 4,5085 |
7 | 44 | 51 | 4,2495 | 45.5 | 4,12505 |
8 | 41 | 51 | 2,575 | 45 | 4,2425 |
9 | 44 | 51 | 3,435 | 48 | 4,4565 |
10 | 43 | 51 | 7,713 | 44 | 3,6287 |
11 | 39 | 51 | 4.59 | 42.5 | 3,791 |
12 | 39 | 49 | 5,395 | 43.3 | 3,7905 |
13 | 44 | 51 | 2.165 | 0 | |
14 | 39 | 49 | 2.55 | 44.1 | 4.155 |
15 | 40 | 51 | 4,0635 | 44 | 3,99365 |
16 | 42 | 51 | 3,45665 | 45.5 | 4.204335 |
17 | 40 | 51 | 0.953 | 46.1 | 4,5147 |
18 | 37.5 | 49 | 0.21 | 45.5 | 4,529 |
19 | 40 | 51 | 2,2135 | 46.6 | 4,43865 |
Bir Devam Klinik Araştırma gelen TS ve CPM Tablo 3. Sonuçları. Ağrı modülasyon profillerini ortaya çıkarmak için yan yana grafikle aynı katılımcılardan TS Şekil 4 ve CPM bakın.
Protokol çerçevesinde kritik adımlar
TS protokolü kronolojik olarak önemli adımlar aşağıdakileri içerir: (hızlı ısı nabız trenler ağrı, tek bir ısı darbesinin ikinci ağrı notunu ve değerlendirme, ikinci acıyı Oranı görsel analog skala kullanarak) çok-adımlı eğitimi; nabız sıcaklıklarının optimizasyonu; Optimize edilmiş sıcaklıklarda 2-3 çalışmalarda TS edinin. En Psikofiziksel önlemlerle olduğu gibi, katılımcı eğitim ağrı derecelendirme çalışmalar boyunca tutarlı ve mümkün olduğunca doğru olduğundan emin olmak için son derece önemlidir. iyileştirme adımı taban ve tepe darbe sıcaklıkları hem birinci ısı darbesinin değerlendirme az 5/10 olacak şekilde ayarlanır ve yaklaşık olarak TS 3 ila 7 arasında olan, aynı derecede önemlidir.
CPM önemli adımlar görsel analog skala ağrı oylaması eğitimi, Isı 6 yavaş ısı rampalardan, Isı-6 ve necess eğer ince eşikleme doğrulayan elde içerirli, karşı taraf distal ekstremite soğuk bir banyo uygulayarak ve soğuk banyo son 30 saniye boyunca ısı-6 teyit yeniden uygulanması. TS protokole benzer şekilde, eğitim ve ısı uyaran bireyselleşme hem (Isı-6) CPM protokol kritik önem taşımaktadır. Buna ek olarak, soğuk banyo son 30 s boyunca ısı-6 uyaran tekrar, deneyim ve literatürden kritiktir ve soğuk banyo sonra ısı uyan uygulamak göre CPM daha büyük bir büyüklük elde edilir. 26 Bununla birlikte, bazı kişilerin 10 derece santigrat soğuk, kompresör tam 2 dakika tahammül edemez göz önüne alındığında, tüm bireyler arasında veri toplama standardize etmek klima uyarının tamamlanmasından hemen sonra test uyarısı uygulayarak dikkate mantıklı olabilir.
Değişiklikler ve Sorun Giderme
TS protokolü ile en yaygın sorun nedeniyle olabilir TS elde etmek yetersizlik olduğunu3 ana nedenleri. Birincisi ve en yaygın, birinci ısı darbe ağrı değerlendirmesi daha sonraki darbelerin (TS) ile ağrı herhangi bir artış algısını bunaltıyor o kadar güçlü olabilir. Bu sorunu en aza indirmek için en iyi yolu TS büyüklüğünü optimize önce protokolü takip ve ilk darbenin ağrı değerlendirmesi en az 5 (10 üzerinden) kadar sırayla bazal ve pik uyaran sıcaklığını azaltmaktır. katılımcı bile en yüksek sıcaklık ayarlarında 10 bakliyat sonunda hiçbir ağrı algıladığı zaman ikinci nedeni, ilkine zıt olduğunu. Bu gibi durumlarda, bir 1 veya 2 ° C ile bazal nabız sıcaklığının artmasıyla düşünebilirsiniz. Bazen, bir birey sadece muhtemelen hem periferik ve santral faktörler, zor bir zaman zeki ve değerlendirme, ikinci ağrı olabilir. İkinci ağrı güvenilir algılama olmadan, TS yakalamak çok zordur. Bu gibi durumlarda, söz konusu bir Individua sıcaklıklarının iyi kümesini bulmakl tahammül ve sıfır olarak kayıt TS yapabilirsiniz.
Başarılı bir CPM protokolüne en yaygın engeller Heat-6 istikrarsızlık ve 2 dakika süreyle soğuk banyo (10 ° C) tolere edememe vardır. ayarlayarak ilk sorunu çözmek için mevcut protokol ince eşikleme kullanın adım adım ısı uyaran sıcaklığı kadar ağrı değerlendirmesi, klima uyaran doyurulabilir olduğu gelen edebiyat inhibitör etkisi göstermektedir unutmayın 5 ile ikinci sorunu için 7'dir . 27 kişi 2 dakika süreyle soğuk banyoda onun ayağını devam edemez bile, Gibi, yeterli bir CPM etkisi bu yoğun acı soğuk uyaran yapılmalıdır. soğuk su banyosuna daldırılmış ayak süresini kaydetmek ve soğuk banyodan onun ayağını çekme katılımcı hemen sonra ısı uyaran sunmak için protokol değiştirin. CPM daha önce hea ağrı reytinge göre çıkarılan ısı uyaranın ağrı değerlendirmesi olarak hesaplanır(Genel protokol belirttiği gibi, sırasında değil) t uyaran soğuk banyodan sonra hemen uygulanır.
Tekniğin Sınırlamalar
Bu yöntem, sınırlama olmadan değildir. Birincisi, bizim en iyi çabalarına rağmen, biz (sırasıyla, CPM TS ve 1 cevapsız 1 katılımcı) her bireyin de TS ve CPM ortaya çıkarmak için mümkün değildi. Bu, kısmen, bu parametreleri geniş bir bireyler arası değişkenliği nedeniyle olabilir. 5, literatürde alıntı% 50-60 başarı oranı daha iyiydi 15, 16, 28, 29 Bununla birlikte, başarı oranı% 94. Bireyler arası her indi de TS oluşturmak için farklı ısı darbe sıcaklıkları kullanmak beri bu yöntem ile üretilen TS farklılıkları yorumlanırken 22, 28 İkincisi, araştırmacılar dikkatli olmalısınızreysel. bir kesit örnek TS karşılaştırırken, bu nedenle, bir TS büyüklüğü ve üretmek için kullanılan sıcaklıklarda farklılıkları dikkate almalıdır. bireyselleştirilmiş TS yöntemi odak aynı bireysel mesai değişiklikler üzerinde uzunlamasına çalışmalar için uygundur. Aynı klima uyaran Isı 6 ağrı ham puan kaydedilir tüm bireylerin ve bireyselleştirilmiş Isı 6 ağrı algısında sadece değişim için kullanılan ve çünkü aynı endişe bireyselleştirilmiş CPM için geçerli değildir. Bu yöntem TS ve CPM geniş yakalama izin verse de, evrensel parametreleri kullanılır yöntemlerine göre daha fazla zaman alır. Son olarak, bu teknik meşgul klinik ortamlarda anında adaptasyon için pratik değildir, her ikisi de deneyimli bir operatör ve gelişmiş ısı test makineleri gerektirir. Biz yöntemleri basitleştirmek için gelecek çabaları teşvik ediyoruz.
Mevcut Göre Tekniği Önemi/ Alternatif Yöntemler
TS ve CPM parametrelerinin bireyselleştirmekte Bizim yöntemi nedeniyle periferik ısı hassasiyetine değişimlerine taban ve tavan etkisi etkisini kaldırmak hedefliyoruz. yöntemler hem daha geniş yakalama ve zaman verimliliği hedefleri ile grubumuz tarafından yayınlanan bir önceki yöntemlere geliştirilmiş sundu. 11, 30 bireyselleştirilmesi TS ve CPM avantajı dolayısıyla uzunlamasına çalışmalar için makul bir sonuç ölçümü olarak bu parametrelerin kullanımına izin veren, bireylerin geniş bir yelpazede yükselen devlet ve azalan ağrı işleme yakalamak için yeteneğidir.
Tekniği Mastering sonra gelecek Uygulamalar veya Tarifi
Gelecek çalışmalar Chron olanlar vs acısız olan kişilerde bu parametrelerin aralığını karakterize etmek büyük popülasyonlar TS ve CPM veri toplama, zaman kazanmak için ek değişiklikler üzerinde odaklanmalıdıric ağrısı ve sarım ve DNIC ek olarak spesifik fizyolojik süreçlere TS ve CPM yanıt çeşitliliğin korelasyon.
The authors have no conflicts of interests or any financial interests to disclose.
We acknowledge funding support by K23 AT008477 (Kong), NIH K23 DA031808 (Johnson), and the Chris Redlich Endowment in Pain Research (Mackey, Dixon).
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Medoc Pathway CHEPS system | Medoc Advanced Medical Systems | This system includes the machine to generate contact heat (Pathway), the thermode capable of rapid temperature change (CHEPS), and the Medoc software. | |
CoVAS accessory hardware with the CHEPS systems | Medoc Advanced Medical Systems | This device is a Medoc accessory that allows real-time pain rating by the participant. | |
Laptop Computer | Lenovo | This is the computer that runs the Medoc software and communicates with the Pathway machine. | |
Glove | Kimberly-Clark | Gloves are used to secure the thermode on the participant's thenar eminence. | |
Clear plastic box with a perforated dividing wall - filled with Ice and water | This box provides the cold water bath for the CPM task. | ||
Aquarium pump | Aquarium Systems Micro-Jet pump MC 450 | This pump circulates water, to maintain stable, even temperature in the cold water bath. | |
Infrared Thermometer | Exergen Temporal Scanner, model TAT 2000 | To monitor constantly the temperature of the water bath. | |
Stop Watch | Any handheld stop watch or stop watch built into a smartphone | To prompt the participant to rate pain at specific time pointds during the CPM task. |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır