JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Here we demonstrate how to induce and monitor regeneration in the Starlet Sea Anemone Nematostella vectensis, a model cnidarian anthozoan. We demonstrate how to amputate and categorize regeneration using a morphological staging system, and we use this system to reveal a requirement for autophagy in regenerating polyp structures.

Özet

Cnidarians ve özellikle Hydra, hasarlı veya kopmuş yapıları ve aslında belki 250'den fazla yıl önce Trembley çalışmaları sayesinde, modern biyolojik soruşturma başlattı tür çalışmaları yeniden oluşturmak için gösterilen ilk hayvanlar vardı. Halen rejenerasyon çalışması süngerler gelen memeliler aracılığıyla bu Hydra, planaria ve Urodeles hem "klasik" rejeneratif organizmaları kullanarak bir diriliş yanı sıra metazoada aralığını kapsayan türlerinin genişletme spektrumunu gördü. biyolojik bir fenomen olarak içsel ilgi yanı sıra, rejenerasyon türlerinin çeşitli nasıl çalıştığını anlamak rejeneratif süreçleri ortak özellikleri ve / veya türler veya bağlam özgü hücresel ve moleküler mekanizmaları paylaşan olup olmadığı hakkında bize bilgi verecek. Starlet deniz anemon, Nematostella vectensis, rejenerasyon için gelişmekte olan bir model organizmadır. Hydra gibi, Nematostella ama t içinde, antik filum, Cnidaria üyesidirO sınıf Anthozo'lar, evrimsel daha bazal olan Hydrozoa kardeş clade. Nematostella rejenerasyon Böylece yönlerini karşılaştırmak ve Hydra ve diğer cnidarians olanlar ile kontrast ilginç olacaktır. Bu yazıda, bisect gözlemlemek ve physa denir Nematostella yetişkin, bir aboral sonu yenilenmesini sınıflandırmak için bir yöntem mevcut. physa doğal eşeysiz üreme için bir araç olarak fisyon maruz ve doğal atom ya physa elle kesilmesi ya kompleks morfolojilerin yeniden büyüme ve bir reformasyon tetikler. Burada bir Nematostella Rejenerasyon Evreleme Sistemi (NRSS) bu basit morfolojik değişikliklere kodlanmıştır var. Biz klorokin etkilerini, lizozomal fonksiyonunun blokları otofaji inhibitörü test etmek için NRSS kullanın. Sonuçlar Otofaji inhibe edildiğinde, polip yapıların, özellikle mesenteries, rejenerasyon anormal olduğunu göstermektedir.

Giriş

Tek bir hydra rejenerasyon gözlem deneysel bilim 1,2 olarak biyoloji gelişiyle seminal olay oldu. Yenilenme biyolog olağanüstü geniş temyiz fenomen kalır ve hem kişiyi yatıyordu. İnsan rejenerasyon sınırları anlamak ve üstesinden gelmek için gelişimsel biyologlar, klinisyenler, biyomedikal bilim adamları ve doku mühendisleri için potansiyel daha içsel ilginç daha rejenerasyon biyoloji yapar.

Şimdi, böyle genom dizileme ve kazanç ve fonksiyon araçları kaybı olarak ortaya çıkan teknolojilerin kullanımı ile, alan dışında rejeneratif mekanizmaların kızdırmak için hazırlanıyor ve sonuçta yeniden nasıl çeşitli türler anlamak için diğerleri olamaz. Moleküler, hücresel ve morfolojik tepkileri ortaklık derecesi aydınlatılamamıştır gerekmektedir, ancak bugüne kadar yeniden oluşturabilirsiniz hayvanlar arasında temel tepkiler olmuştur IMAGI olurdu daha benzer olduğu görülmektedirned sadece on yıl önce 3.

Özellikle cnidarians morfolojik çeşitlilik geniş bir yelpazede ortasında neredeyse tüm vücut parçaları rejenere de kolay bulunmaktadır. yalnız tatlı su polipi itibaren, Hydra gibi Portekizli Man-O-War gibi karmaşık sömürge siphonophores, için, büyük mercan resifleri inşa minik deniz polip ile birlikte, rejenerasyon için bir mekanizmaya ek olarak, çoğu kez üreme şeklidir tamir veya yaralanma ve avlanma sonucu hasarlı ya da kayıp vücut parçaları reform. Cnidaria farklı türler rejenerasyonu için benzer veya farklı mekanizmaları kullanmak ister temelde ilginç bir soru 4-6.

Bu ve diğer Anthozoan gelişmekte olan, Nematostella rejenerasyon 7-17 için bir model olarak vectensis. Biz son zamanlarda Abora gelen bisected doku morfolojik üniforma parça bir tüm vücudun yenilenmesini açıklayan bir evreleme sistemi geliştirmiştirpolip 10 l sonu. Herhangi bir düzeyde ikiye zaman Nematostella polipler yeniden iken, biz bu doğal aseksüel fisyon 18 normal düzlemine yakın olduğu için kısmen, en morfolojik basit bölgede, physa bir aboral pozisyonda yetişkin kesmek için seçti, ve aynı zamanda çünkü izin gözlem ve bütün vücudu basit morfolojik bileşenlerden yeniden birleştirilen nasıl moleküler analizleri.

Nematostella Rejenerasyon Evreleme Sistemi (NRSS), normal kültür koşulları altında, bir kesilmiş physa rejenerasyon herhangi bir yönü ilerleme skoru kullanılabilir morfolojik kriterler nispeten basit bir dizi içerir ya da deneysel olarak, örneğin küçük molekül tedavileri, genetik manipülasyon da durumları tedirgin veya çevresel değişiklik. Beklendiği gibi, NRSS rejenerasyon hücresel ve moleküler olayların başvurulabilir hangi bir morfolojik yapı iskelesi olarak benimsenmiştir hale gelmektedir10.

Nihayet kesim bizim yöntem yakın tarihli bir çalışmada 17 kullanılan pim nokta ponksiyon daha fazla büyüklükte bir gaping delik birkaç emir üretir, ancak her ikisi de yaralar 6 saat civarında iyileşir. yara kapatma görsel tutuklama ve farklı aşamalarını belgeleyen bir yaranın büyüklüğü ve kapatmak için gereken zaman belirgin bağımsızlığını açıklamaya deneysel yaklaşımlar önermek gerekir. Böylece, bu protokolü tarafından sağlanan aboral amputasyon sürecinin daha derin bir görsel anlayış, bu model rejenerasyon sistemi içine daha fazla soruşturma yardım ve Nematostella vectensis kullanarak bu evreleme sisteminin uygulanmasını genişletecek.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Sıcaklık, Beslenme ve aydınlık / karanlık döngüsü için Animals 1. Klima

  1. Dünya çapında sayısız Nematostella laboratuarlarından biri, ya da kar amacı gütmeyen bir tedarikçiden Nematostella vectensis yetişkin elde (Tablo 1)
  2. Olarak, karanlıkta sabit sıcaklıkta (tipik olarak 18 ve 21 ° C) Nematostella korumak "/ 3x 1" yapay deniz Suda bin (PPT) başına 12 parça bir tuzlulukta (ASW). Genellikle basit soda-kireç camı kültür tabaklarında 250 mL veya 1.5 L kapasiteli 11 kültürleri korumak.
    Not: Bu basit kültür koşulları yaygın Nematostella çalışma laboratuvarlar arasında kullanılır, ancak kültür bakımı da 19 otomatik hale getirilebilir.
  3. Haftada 4x - 2 nauplii Nematostella taze yumurtadan Artemia besleyin. Sığ bir dikdörtgen cam tabak 20 veya 30 ° C'de tam güçte (36 ppt) veya 1 / 3x ASW Hatch Artemia kistleri,küçük ölçekli, ticari veya ev yapımı tuzlu su karidesi kuluçkahanelerin herhangi biri. Bir inkübatör mevcut değilse, karides, oda sıcaklığında yumurtadan ama çok daha yavaş yapacaktır.
    Not: Bu genellikle tamamlanması için 24 saatten fazla gerektirir.
  4. Haftada en az bir kez anemon kültür suyu değiştirin. en iyi yetişkin sağlığı için, (sabun olmadan) iyice temizleyin kültür tuzak meyvelerin gıda ve atık ve hayvan dolaştırmak için ceket kase ve birikmiş mukus salgıları haftada bir kez kase.

Beslenme Klima Animals 2. Seçme ve Dinlenme

  1. yaklaşık aynı uzunlukta seçin boyutu uyumlu polipler (3-5 cm, ne zaman doğal olarak rahat) ve önceki amputasyon üç gün boyunca koloniden ayrılan bir kapta koyun.
    Not: kesim için seçilen hayvan sayısı deney tarafından belirlenecek elbette yürütülen, ancak genel olarak altı tekrarlamalı örnek noktası başına en az beş hayvan öneriyoruz. Böylece,Tipik bir deneyde, 30 hayvan minimum önceden seçilmiş olur. Genel olarak, daha sonra puanlama etkileyebilir (aşağıya bakınız) düzensiz amputasyon beri az sayıda (30) daha fazla seçmek akıllıca olacaktır.
  2. önce amputasyon oda ışığa inkübatör en az bir saat, seçilen hayvanların çanak çıkarın.
    oda ışık ve taşıma titreşimleri maruz kalma olasılığı hayvanların büzülmesine neden olur, bu yüzden uyarlanmış veya laboratuarlarında inkübasyon tarafından "rahat" gerekir: unutmayın. Hayvanlar dokunmak refrakter ve ışığa maruz kalma olacak ve bu noktada Nazik pipetleme ile hareket ettirilebilir.
  3. İsteğe bağlı: (1 / 3x ASW olarak)% 7.5 MgCl 2 ekleyerek hayvanların anestezisi. Yavaşça bir standart plastik 5 ml pipet ile kase MgCl2 çözüm ekleyin.
    hayvanlar sonunda ışığa ve fiziksel manipülasyon için alışkanlık haline gelecek olsa da, t "düzeltmek" korumak veya hayvanların uyutmak için avantajlı olabilir Not:Onlar uzun 16,21,22 olduktan sonra o devlet rahat.
  4. 12 ppt ASW içeren 100 mm çapında bir steril bir cam kesme çanak tabanına, kesilmiş olan havuz beş hayvan (1 / 3x ASW) aktarmak için bir çok deliğe (> 0.5 cm) plastik pipet kullanın. 40X - 10 arasında değişen büyütme ile bir stereomikroskopta sahneye çanak yerleştirin.
    Not: hayvanlar anestezi ve kesmek için rahat değil, onlar hala tekrar rahat olmak için birkaç dakika gerekebilir böylece dokunun ve stereoskop aydınlatma cevap olabilir ve.

3. Amputasyon

  1. Steril bir neşter kullanılarak, yaklaşık sürece geniş ve hiçbir mezenter içeren olduğu gibidir physa bir bölümünü elde etmek için amacı ile, her polip gelen aboral physa kesmek.
    Not: İdeal kesim sitesi mezentere sona ermesi sadece aboral olduğunu. kesme düzleminde ince l uygun mezenterinde bir geçiş vardanielaesquivel Her mesenterial ekleme (bakınız Şekil 1, oklar) karşılık gelir. O deliği 17,30 'takmayı' kolaylaştırabilir mukus üretir çünkü mezenter bulunmaması önemlidir.
    1. amputasyon arzulanan yere hayvan ile temas neşter bıçak yerleştirin. Bu, ya yardımsız (freehand) yapmak, ya da hafifçe # 5 forseps (Dumont tarzı veya benzeri) ile hayvanın vücudunu tutarak.
    2. vücudun genelinde bir 'sallanan' hareket neşter kavisli bıçak yararlanarak dokusu kesti.
      Not: Doku neşter sarsan olarak temiz sever ve donörden physa istenilen bölümünü serbest olmalıdır. doku küçük bir parça hala vücudu ve physa bağlayan Ancak, neşter ile kesmek. Bu physa zarar verebilir, çekerek bağlı parçalarını ayırmak için çalışmayın.
  2. Çanak her kesilmiş 'donör' polip çıkarın ve ÖÇK iade'Toplanmış amputees' etiketli oran kase; kase tarih ve stok kültürüne geri.
    Not: Ampute polipler normal beslenebilir sonra bir gün içinde aboral yara iyileşmesi ve olacaktır. Onlar istenirse physa tekrar ampute edilebilir hangi noktada iki hafta içinde normal görünümlü physa yeniden oluşturulur.
  3. daha sonra adı her bir 12 ppt ASW 10 mL olan bir çok-yuvalı hücre kültürü plakasının ayrı bir steril oyuğuna her physa transfer 12 ppt ASW kesme çanak kalır kesilmiş physa durulayın.
    Not: Bu örnekte, her deniz suyu de tutarak, 10 ml beş eksize physa ile altı plaka kullanır. Genel deniz suyu nedeniyle kullanım ve potansiyel buharlaşma harekete havaya maruz kalmasını önlemek için yeterince physa kapsamalıdır. plakası veya kuyu bir kapak olmalıdır.
  4. 3.3 Her deneysel tedavi için her bir kuyunun ayrılmış en az 5 physa toplamak için - Tekrar 3.1 adımları.
  5. prov bir sıcaklıkta physa inkübePlanlanan deneysel sorgulamaları için yenilenme en iyi oranı ide. yenilenme istenen oran olarak belirlenen, sabit bir sıcaklıkta, bir ısı ayarlı inkübatör içine physa içeren plaka koyun.
    Not: physa eksik dokuların yeniden 15 ve 27 ° C arasındaki sıcaklıklarda inkübe tam polip oluşturacaktır. yenilenme hızı ilk iki aşamada dışında sıcaklığa bağlıdır. Tüm sıcaklıklar için Aşama 4 ulaşmak için ortalama gün kestikten sonra 7 D, ve bu da 21 ° C 'de rejenerasyon ile çakışmaktadır. 27 ° C 'de, Aşama 4 3 gün önce ulaşılır ve 15 ° C sıcaklıkta, Aşama 4 21 ° C (bakınız referans 10) en rejenerasyon göre yaklaşık 3 gün kadar geciktirilir.

4. Nematostella Rejenerasyon Evreleme Sistemi ile Rejenerasyon değerlendirilmesi (NRSS)

  1. Değişken magnific ile stereo-bileşik mikroskop kullanılarak physa Puantirme (10 - 80X). Evre 0 taze kesilmiş Nematostella physa puan ve aynı zamanda NRSS 10 kullanılarak her gün sonrası amputasyon (dpa) puanlama devam ediyor.
    Not: Anahtar evreleme kriterleri ve ayrıntıları Referans 10 bakınız.
    1. Bir taze kesilmiş physa bir sarkık balon andıran bir Kupası'na şeklinde bir kitle olarak belirirse bir açık yara site ile, Evre 0 (Açık Yara) olarak physa puanı olasılıkla görülebilir.
      Not: yara kenarları da başlangıçtan itibaren birbirine yapışıyor olabilir, ancak doku yine çöktü edilecek ve sertlik yoksundur. açık yara kenarları yara iyileşene kadar radyal daralma geçiren görülebilir.
    2. amputasyon yara kapatılır görünüyorsa Aşama 1 (Kapalı Yara) olarak physa puan.
      Not: Yara yeri gelecek sözlü kutup karşılık gelecektir. Gelecekteki sözlü kutup etrafında dış yüzeyi altında yatan radyal simetrik Endodermal mesenteriumda eklemeler karşılık gelen farklı kemerler görüntülemek için başlayabilir.
    3. skor phYSA Oral kutup yüzeyi radyal simetrik bir düzende ve oluklar ile ayrılmış sekiz kaldırdı kemerler açığa şişirilmiş görünüyorsa Aşama 2 (Radyal Kemerler) olarak. kemerlerin tepesinde küçük, yarım küre kabarcıkları dikkat edin. Onlar gibi uzun boylu kadar geniş, büyük olasılıkla geçici hakkında olacak ve başlangıçta tek bir ektodermal hücre katmanı oluşturduğu olacaktır.
      Not: Bazı durumlarda çift katlı kabarcıklar stabilize olabilir. Not: Bu veya daha sonraki aşamalarda bir mukoza tabakası physa bir zar 'kılıf' (Şekil 2) saklanması görünebilir. Bu, içine alıcı malzeme puanlama kolaylaştırmak için kaldırılmalıdır.
    4. Endodermal ve ektodermal doku katmanları içeren dokunaçlarıyla tomurcukları stabil en azından bazı radyal kemerlerin oral ucunda oluşturulan eğer Evre 3 (Tentacle) olarak physa puan.
      Not: dokunaçlar de geniş ve çok az hareketli olan daha uzundur. physa artış göstermektedir, ancak mezenter esasları vis değişken enflasyon haline gelebilir, böylecevücut boşluğuna (coelenteron) içine mesenteriumda ekleme uzanan ible.
    5. physa onlar bağlamak için görünür yerden ölçülen iki kez radyal genişliğinden daha fazla olan ağız-aboral uzunlukları ile, vücut duvarı eklemeleri gelen coelenteron içine uzanan sekiz ayrı, görünür mesenteries içeriyorsa Aşama 4 (Lineer Mesenteries) olarak physa puanı onun aboral ucunda (enterostome) de yutak için.
      Not: Dört veya daha az mesenteries "pilili" iç serbest kenarları vardır. yutak görülebilir. Sekizden fazla Tentacles hareketli, görünür ve bazen vücuda sözleşme.
    6. physa plise ile dörtten fazla mesenteries vardır ve plise Sahne hayvan neredeyse "normal" yetişkin bir görünüme sahiptir 4. En fazla dolu ve dolambaçlı ise Aşama 5 (Ağırlıklı Pileli Mesenteries) olarak physa puanı, ancak görünür vardır gonadal hücreleri.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

Kopmuş physa rejenerasyon sırasında morfolojik olayların ilerlemesi her NRSS aşamada physa temsili görüşlerini içeren Şekil 1A, gösterilmiştir. Tipik physa kesim sitesi yetişkin (ok başları) gösterilir. Şekil 1A fotoğraflar tamamen şekillenmiş polip ile taze kesilmiş physa sözlü ve vücut yapılarının ilerici rejenerasyon göstermektedir. Şekil 1B, sırasıyla, Sahne 4 ve 5. etapta da, iç septa, mesenteries dü...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Yara iyileşmesi ve rejenerasyon bir model olarak Nematostella kullanımı giderek daha popüler hale gelmektedir. Nedenle, atanan ve mukayese edilebilir etkili hücresel ve moleküler analizler önce belirli bir protokol morfolojik kalıplarını görselleştirmek edebilmek için önemlidir. Hayatın sonrası Planula aşamalarında, hemen hemen her yerde ampute herhangi bir eksik yapısında reform edememek, rejeneratif "esneklik" yüksek derecede sahip Nematostella. Bu nedenle, çeşitli ar...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Açıklamalar

The authors have nothing to disclose.

Teşekkürler

Bu çalışma GHT bir New York Kök Hücre Bilim (NYSTEM C028107) Hibe tarafından desteklenmiştir.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Nematostella vectensis, adultsMarine Biological Lab (MBL)non-profit supplier
Glass Culture Dish, 250 mLCarolina Biological Supply741004250 mL
Glass Culture Dish, 1,500 mLCarolina Biological Supply7410061,500 mL
Polyethylene transfer pipette, 5 mLUSA Scientific 1022-2500narrow bore, graduated
Polyethylene transfer pipet, taperedSamco202-205cut off 1 inch of tip to make wide bore
Disposable ScalpelFeather Safety Razor Co. Ltdno. 10blade should be curved
#5 Dumont Fine point tweezersRobozRS5045alternative suppliers available
Pyrex Petri dish, 100 mm diameterCorning3160can substitute other glass Petri plates
Sterile 6-well plateCorning Falcon 353046or similar from other manufacturer
Sterile 12-well plateNunc 150628or similar from other manufacturer
Sterile 24-well plateCellstar, Greiner bio-one662-160or similar from other manufacturer
Brine shrimp hathery kitSan Francisco Bay; drsfostersmith.comCD-154005option for growing brine shrimp
pyrex baking dishcommon in grocery storesoption for growing brine shrimp
artificial seawater mix 50 gal or more Instant Ocean; drsfoster-smith.comCD-116528others brands may suffice
Plastic tub for stock ASW preparationvariouscommon 25 gallon plastic trash can OK
Polypropylene CarboyCarolina Biological Supply716391For working stock of ASW @ 12 ppt
Beaker, Graduated, 4,000 mLPhytoTechnology LaboratoriesB199For dilution of 36 ppt ASW to 12 ppt
Stereomicroscope and light sourcevarious with continuous 1 - 40X magnification

Referanslar

  1. Lenhoff, S. G., Lenhoff, H. M. Hydra and the Birth of Experimental Biology: Abraham Trembley's Memoirs Concerning the Natural History of a Type of Freshwater Polyp with Arms Shaped like Horns. , The Boxwood Press. (1986).
  2. Trembley, A. Mémoires pour servir à l'histoire d'un genre de polypes d'eau douce, à bras en forme de cornes. , Jean & Herman Verbeek. (1744).
  3. Poss, K. D. Advances in understanding tissue regenerative capacity and mechanisms in animals. Nat Rev Genet. 11 (10), 710-722 (2010).
  4. Galliot, B. Hydra, a fruitful model system for 270 years. Int J Dev Biol. 56 (6-8), 411-423 (2012).
  5. Gold, D. A., Jacobs, D. K. Stem cell dynamics in Cnidaria: are there unifying principles? Dev Genes Evol. 233 (1-2), 53-66 (2013).
  6. Holstein, T. W., Hobmayer, E., Technau, U. Cnidarians: an evolutionarily conserved model system for regeneration? Dev Dyn. 226 (2), 257-267 (2003).
  7. Amiel, A. R., et al. Characterization of Morphological and Cellular Events Underlying Oral Regeneration in the Sea Anemone, Nematostella vectensis. Int J Mol Sci. 16 (12), 28449-28471 (2015).
  8. Warren, C. R., et al. Evolution of the perlecan/HSPG2 gene and its activation in regenerating Nematostella vectensis. PLoS One. 10 (4), e0124578(2015).
  9. Gong, Q., et al. Integrins of the starlet sea anemone Nematostella vectensis. Biol Bull. 227 (3), 211-220 (2014).
  10. Bossert, P. E., Dunn, M. P., Thomsen, G. H. A staging system for the regeneration of a polyp from the aboral physa of the anthozoan Cnidarian Nematostella vectensis. Dev Dyn. 242 (11), 1320-1331 (2013).
  11. Stefanik, D. J., Friedman, L. E., Finnerty, J. R. Collecting, rearing, spawning and inducing regeneration of the starlet sea anemone, Nematostella vectensis. Nat Protoc. 8 (5), 916-923 (2013).
  12. Tucker, R. P., et al. A thrombospondin in the anthozoan Nematostella vectensis is associated with the nervous system and upregulated during regeneration. Biol Open. 2 (2), 217-226 (2013).
  13. Passamaneck, Y. J., Martindale, M. Q. Cell proliferation is necessary for the regeneration of oral structures in the anthozoan cnidarian Nematostella vectensis. BMC Dev Biol. 12, (2012).
  14. Trevino, M., Stefanik, D. J., Rodriguez, R., Harmon, S., Burton, P. M. Induction of canonical Wnt signaling by alsterpaullone is sufficient for oral tissue fate during regeneration and embryogenesis in Nematostella vectensis. Dev Dyn. 240 (12), 2673-2679 (2011).
  15. Renfer, E., Amon-Hassenzahl, A., Steinmetz, P. R., Technau, U. A muscle-specific transgenic reporter line of the sea anemone, Nematostella vectensis. Proc Natl Acad Sci U S A. 107 (1), 104-108 (2010).
  16. Burton, P. M., Finnerty, J. R. Conserved and novel gene expression between regeneration and asexual fission in Nematostella vectensis. Dev Genes Evol. 219 (2), 79-87 (2009).
  17. DuBuc, T. Q., Traylor-Knowles, N., Martindale, M. Q. Initiating a regenerative response; cellular and molecular features of wound healing in the cnidarian Nematostella vectensis. BMC Biol. 12, (2014).
  18. Hand, C., Uhlinger, K. R. Asexual reproduction by transverse fission and some anomalies in the sea anemone Nematostella vectensis. Invert Biol. 114, 9-18 (1995).
  19. Fritzenwanker, J. H., Technau, U. Induction of gametogenesis in the basal cnidarian Nematostella vectensis(Anthozoa). Dev Genes Evol. 212 (2), 99-103 (2002).
  20. Magie, C., Bossert, P., Aramli, L., Thomsen, G. Science's super star: The starlet sea anemone is an ideal tool for student inquiry. The Science Teacher. 83 (3), 33-40 (2016).
  21. Genikhovich, G., Technau, U. In situ hybridization of starlet sea anemone (Nematostella vectensis) embryos, larvae, and polyps. Cold Spring Harb Protoc. (9), (2009).
  22. Magie, C. R., Pang, K., Martindale, M. Q. Genomic inventory and expression of Sox and Fox genes in the cnidarian Nematostella vectensis. Dev Genes Evol. 215 (12), 618-630 (2005).
  23. Chera, S., Kaloulis, K., Galliot, B. The cAMP response element binding protein (CREB) as an integrative HUB selector in metazoans: clues from the hydra model system. Biosystems. 87 (2-3), 191-203 (2007).
  24. Reitzel, A. M., Burton, P. M., Krone, C., Finnerty, J. R. Comparison of developmental trajectories in the starlet sea anemone Nematostella vectensis: embryogenesis, regeneration, and two forms of asexual fission. Invertebr Biol. 126, 99-112 (2007).
  25. Ikmi, A., McKinney, S. A., Delventhal, K. M., Gibson, M. C. TALEN and CRISPR/Cas9-mediated genome editing in the early-branching metazoan Nematostella vectensis. Nat Commun. 5, 5486(2014).
  26. Jahnel, S. M., Walzl, M., Technau, U. Development and epithelial organisation of muscle cells in the sea anemone Nematostella vectensis. Front Zool. 11, 44(2014).
  27. Kelava, I., Rentzsch, F., Technau, U. Evolution of eumetazoan nervous systems: insights from cnidarians. Philos Trans R Soc Lond B Biol Sci. 370 (1684), (2015).
  28. Nakanishi, N., Renfer, E., Technau, U., Rentzsch, F. Nervous systems of the sea anemone Nematostella vectensis are generated by ectoderm and endoderm and shaped by distinct mechanisms. Development. 139 (2), 347-357 (2012).
  29. Richards, G. S., Rentzsch, F. Transgenic analysis of a SoxB gene reveals neural progenitor cells in the cnidarian Nematostella vectensis. Development. 141 (24), 4681-4689 (2014).
  30. DuBuc, T. Q., et al. In vivo imaging of Nematostella vectensis embryogenesis and late development using fluorescent probes. BMC Cell Biol. 15, (2014).
  31. Kaur, J., Debnath, J. Autophagy at the crossroads of catabolism and anabolism. Nat Rev Mol Cell Biol. 16 (8), 461-472 (2015).
  32. Carroll, B., Korolchuk, V. I., Sarkar, S. Amino acids and autophagy: cross-talk and co-operation to control cellular homeostasis. Amino Acids. 47 (10), 2065-2088 (2015).
  33. Glick, D., Barth, S., Macleod, K. F. Autophagy: cellular and molecular mechanisms. J Pathol. 221 (1), 3-12 (2010).
  34. Rodolfo, C., Di Bartolomeo, S., Cecconi, F. Autophagy in stem and progenitor cells. Cell Mol Life Sci. 73 (3), 475-496 (2016).
  35. Guan, J. L., et al. Autophagy in stem cells. Autophagy. 9 (6), 830-849 (2013).
  36. Phadwal, K., Watson, A. S., Simon, A. K. Tightrope act: autophagy in stem cell renewal, differentiation, proliferation, and aging. Cell Mol Life Sci. 70 (1), 89-103 (2013).
  37. Varga, M., Fodor, E., Vellai, T. Autophagy in zebrafish. Methods. 75, 172-180 (2015).
  38. Varga, M., et al. Autophagy is required for zebrafish caudal fin regeneration. Cell Death Differ. 21 (4), 547-556 (2014).
  39. Gonzalez-Estevez, C., Salo, E. Autophagy and apoptosis in planarians. Apoptosis. 15 (3), 279-292 (2010).
  40. Buzgariu, W., Chera, S., Galliot, B. Methods to investigate autophagy during starvation and regeneration in hydra. Methods Enzymol. 451, 409-437 (2008).
  41. Tettamanti, G., et al. Autophagy in invertebrates: insights into development, regeneration and body remodeling. Curr Pharm Des. 14 (2), 116-125 (2008).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

Geli imsel BiyolojiSay 119rejenerasyonyara iyile mesideniz anemonCnidariaNematostella vectensis Physa

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır