Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Method Article
Burada, erüe, ekstraksiyon, filtrasyon ve konsantrasyon olmak üzere dört basamakta bir er-xian ekstraksiyonunun (EXD) hazırlanması ve hazırlanmış bir EXD içeren serumun sıçanlara uygulanmasını gösteriyoruz. Bu yöntemler, geleneksel Çin ilaçları gibi bitkisel dekompozisyonların in vivo ve in vitro çalışması için geçerlidir.
Klinik ortamda alternatif bir ilaç olan geleneksel bitki tıbbı, son yıllarda artan bir ilgi görmüştür. Vücutta teslim edilmeden önce, aktif çiğneme maddelerini çiğ otlardan ayırmak için ek bir ekstraksiyon prosedürü yaygın olarak gereklidir. Su dekompozisyonu, klinik ortamda halen yaygın olarak kullanılan klasik bir ekstraksiyon prosedürüdür. Burada, deneysel araştırmalara bitki özütleri uygulamak için er-xian kaynatma işlemi (EXD) için ayrıntılı bir protokol önermekteyiz. Hayvana uygun doz hesaplamanın yanı sıra EXD'nin dört ana aşamasını açıklar: ıslatma, su dekompozisyonu, filtrasyon ve konsantrasyon. Buna ek olarak, serum içeren EXD, in vitro doğrulama aracı olarak farelere verilir. Burada sıçanlar oral yoldan üç gün süreyle EXD ile tedavi edildi. Daha sonra kan numuneleri toplandı, inaktive edildi, santrifüj edildi ve filtrelendi. Kültür ortamı ile seyreltilmiş serum, v'de hücreleri veya dokuları tedavi etmek için kullanılabilirItro. Örneğin, EXD, hem in vivo hem de in vitro çalışmalarda uygulanmış ve EXD'nin osteojenezi arttırdığını göstermiştir. Bu protokol bitkisel ilaçların hazırlanması ve uygulanması için referans olarak kullanılabilir.
Çalışmaya ve geleneksel bitkisel tıbbın uygulanmasına olan ilgi günümüzde artmaktadır. Kimyasal maddelerin kesin olduğu modern ilaçların aksine bitkisel formüllerin bilinmeyen bazı bileşenleri vardır ve aktif bileşiklerinin verilmesini sağlamak için ekstraksiyon işlemleri gerektirir. Çoğu araştırma, bütün ot veya bitkisel formülün temsilcisi olarak iyi bilinen bir yapıya sahip küçük bir bileşik seçmeye çalışsa da, ne farmakolojik etkinlikler ne de mekanizmalar eşdeğer 1 , 2 olarak kabul edilemez. Parmak izi kompleks bitkisel formüllerin bileşenlerini analiz etmeyi sağlarken, bazı bileşenler hala net bir şekilde analiz edilmediğinden, çalışma 3 için tüm özütleri birleştirirken bir meydan okumaya neden olur. Çok sayıda bileşenin / ekstraktların etkileşimleri, bitkisel ilaçların terapötik etkilerine aracılık eder. Bu avantajı korumak için, geleneksel ekstrakt form-dekoctİyon hala klinikte yaygın olarak kullanılmaktadır. Ekstrakt prosedürü, terapötik etkinlik üzerinde büyük bir etkiye sahip olduğu için, özellikle in vivo çalışmalar için 4 , 5 için geleneksel su sıkılmasının standart bir protokolü gereklidir.
Öte yandan, farmakolojik mekanizmaları araştırırken, in vitro veya ex vivo çalışmalar sırasında bitkisel açma maddelerinin uygulanması da bir mücadeledir. İlaç içeren serumun konsepti ilk kez Tashino tarafından 1988'de 6 önerildi. O zamandan beri, artan sayıda araştırmacı onu bitkisel ilaç 7 , 8 , 9'a uyguladı. İlaç içeren serumun metodu, serumun belli bileşenlerinin etkisi gibi bazı kısıtlamalara sahip olmakla birlikte, fizyolojik koşulları yakından taklit eden bir yöntem olarak kabul edilmektedir.
Er-xian kaynatma menopoz semptomlarını hafifletmek için 1950'lerin başında geliştirildi 10,11,12,13. Ayrıca aplastik anemi 14 , menopoz osteoporozu 15 , 16 , 17 , prematür over yetmezliği 18 , meme kanseri 19 , yumurtalık kanseri 20 ve ertelenmiş ergenlik 21'in tedavisinde de uygulanmıştır. Burada, er-xian ekstraksiyonunun (EXD) ve ilacı içeren serumun hazırlanması için ayrıntılı protokoller sunuyoruz. Buna ek olarak, fare menopoz osteoporotik modellerine EXD ve EXD içeren serumun uygulanmasını açıklıyoruz.
Bir EXD, 9 gr Curculigo orchioides Gaertn , Herbaa Epimedii'den oluşur , Radix Morindae Officinalis ve Radix Angelicae Sinensis ve her biri yetişkin hasta başına günde 6 g Cortex Phellodendri ve Rhizoma Anemarrhenae . Bir fare için eşdeğer doz, aşağıdaki denklem 22'ye dayanılarak 0.1418 EXD / kg / gün'dür: dB = dA * RB / RA * (WA / WB) 1/3 . DA ve dB, sırasıyla insan ve fare vücut ağırlığı başına doz (mg / kg) anlamına gelir. Dozun mg / kg olarak, EXD / kg sayısı ile değiştirilir. RA ve RB sırasıyla vücut yüzey alanı (m 2 ) / vücut ağırlığı (kg) ile orantılı insan vücut faktörünü ve fare gövde faktörünü temsil eder) 2/3 (Bkz. Tablo 1 ). WA ve WB sırasıyla insan ve fare vücut ağırlığını (kg) gösterir.
Protokol, Şanghay Geleneksel Çin Tıbbı'nın hayvan bakım rehberlerini takip eder ve hayvan deneyleri Şanghay Hayvan Etik Komitesi tarafından onaylanır.
1. Protokol I: EXD'nin hazırlanması
2. Protokol II: EXD-içeren Serumun Hazırlanması
EXD'nin OVX farelerinin kemik yoğunluğuna etkisi
Omurga vertebrası bölümündeki hematoksilin ve eozin boyama, OVX grubundaki kişilerle ( Şekil 1A , sol panel) karşılaştırıldığında in vivo EXD tedavisinden sonra artmış kemik trabekülleri gösterir ( Şekil 1A , sağ panel). Şekil 1B , 12 haftalık EXD tedavisine sahip OVX farelerindeki ( Şe...
Son yıllarda binlerce yıldır Doğu dünyasında klinik ortamda uygulanan alternatif tıp türlerinden biri olan bitkisel ilaçlara daha fazla önem verilmektedir. Modern tıbbın "tezgahdan tezgah" deseninden farklı olarak, geleneksel bitkisel tıbbın ilk önce kendi mekanizmalarını açıklamak için "tezgah yatağı" örneğini gerektirir. Bunu, tezgah aşamasında yapılan doğrulama ve yeni optimize edilmiş ilaçların geliştirilmesi için işleme takip edilebilir. Şu ana kadar, bütün ...
Yazarlar, rekabet eden mali çıkarlarının olmadığını beyan ettiler.
Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (81573992) tarafından desteklenmiştir. Dil düzenleme yardımı için Emily K. Lo ve Kathleen DiNapoli'ye teşekkür ediyoruz.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Curculigo orchioides Gaertn (9 g), Herbaa Epimedii (9 g), Radix Morindae Officinalis (9 g), Radix Angelicae Sinensis (9 g), Cortex Phellodendri (6 g), and Rhizoma Anemarrhenae (6 g) | Kang-qiao Chinese Medicine Yinpian Co. Ltd (Shanghai, CN) | 160922 | EXD components |
Filter paper | GElifesciences | 99-103-952 | Filter EXD decoction before concentration |
Imprinting Control Region (ICR) mice | Shanghai Laboratory Animal Center | SCXK 2007-0005 | In vivo study |
Sprague Dawley rats | Shanghai Laboratory Animal Center | SCXK 2007-0005 | EXD-containing serum preparation |
Syringe filter | Millipore | SLGP033RB | 0.22 µm |
gavage needles (10 ml) | Shanghai BO Ge trade sales department | 59104274 | Adminstration of EXD |
Ketamine (80 mg/kg) | Fujian Gutian Pharma Co. Ltd | H35020148 | Anesthesia |
Xylazine (10 mg/kg) | Sunway Pharma Co. Ltd | CB07591 | Anesthesia |
Dulbecco’s modification of Eagle’s medium Dulbecco (DMEM) culture medium | Gibco | 12800-116 | DMEM with 2 mM L-glutamine and without ribonucleosides and ribonucleotides |
Streptomycin | Sigma | 1277 | 100 µg / ml |
Penicillin | Sigma | 4687 | 100 µg / ml |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır