JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Kısmi hepatectomy (PHx) ve hücre transplantasyonu dalak ile NOD gerçekleştirmek için bir protokol anlatmıştık. SCID (BAŞINI SALLAMAK. CB17-Prkdcscid/J) fareler. Bu protokol için ortaya çıkarmak ve hücre intrasplenic nakli için başka bir kesi ardından karaciğer sol lob çıkarabileceğim için bir kesi yapılır.

Özet

Kısmi hepatectomy karaciğer rejenerasyonu ve değişik patolojik koşullarda hücre dayalı tedavi etkisini incelemek için çok yönlü ve tekrarlanabilir bir yöntemdir. Kısmi hepatectomy da artan engraftment ve Transplante hücrelerin çoğalması hızlanan neovaskülarizasyon ve hücre göç doğru karaciğer tarafından kolaylaştırır. Burada, bir obez olmayan şeker hastası/şiddetli, dalak performans % 30 hepatectomy ve hücre nakli kombine immünyetmezligi başını SALLAMAK için basit bir protokol açıklayın. SCID (BAŞINI SALLAMAK. CB17-Prkdcscid/J) fare.

Bu yordam, iki küçük insizyon yapılır. Belgili tanımlık ilk kesme ortaya çıkarmak ve karaciğer sol lob çıkarabileceğim etmektir ve başka bir küçük kesi dalak hücre intrasplenic nakli için ortaya çıkarmak için yapılır. Bu yordam herhangi bir özel cerrahi beceri gerektirmez ve daha az stres ve ağrı, hızlı iyileşme ve daha iyi hayatta kalma ile 5-7 dakika içinde tamamlanabilir. Fare (transgenik C57BL/6-Tg (UBC-GFP) 30Scha/J) yanı sıra Hepatosit hücreler kısmen hepatectomized başını SALLAMAK içinde insan kaynaklı (NeoHep) gibi ifade bir floresan yeşil protein (GFP) dan izole tetkikine nakli göstermiştir. SCID fareler.

Giriş

Şu anda, Hepatosit bütün organ nakli şiddetli karaciğer bozukluğu olan hastaları tedavi için bir alternatif olarak teklif edilir. Bu hastaların tüm organ nakli1köprü olabilir inanılıyor. Ek olarak allojenik tetkikine2, xenogenic tetkikine3 ve kök hücre4 ' ten türetilmiş tetkikine hayvan modellerinde da soruşturuluyor. Bu bağlamda, posta ve engraftment potansiyel alıcı transplante hücrelerinin temel hücre tedavisi için önemli bir kriter akut hepatik yetmezliği (AHF) var.

Hepatositlerin veya Hepatosit benzeri hücreler5nakli soruşturma için AHF hayvan modelinde cerrahi6 veya farmakolojik7 yordamlar, hücre nakli tarafından takip tarafından oluşturulur. Bir AHF hayvan modeli farmakolojik reaktifler, d-galactozamin8, asetaminofen9, karbon tetraklorür10, thioacetamide11, Concanavalin A12, lipopolysaccharide13 gibi birçok hepatotoxins tarafından yapmak için , vs., kullanılmıştır. Bu listeden her reaktif AHF için benzersiz bir özellik kümesi oluşturur, ancak ne yazık ki yok tek reaktif insan AHF taklit eder. Ayrıca, hepatotoxins tarafından indüklenen AHF hayvanlar kronik stres altında koyar, uzun bir zaman alır ve tekrarlanabilir sonuçlar elde etmek zordur.

Öte yandan, kısmi hepatectomy (PHx) cerrahi işlem beceri bağımlı ve tekrarlanabilir sonuçlar gerekli becerileri geliştirme sonra elde etmek kolaydır. Cerrahi müdahale yalnız AHF ikna etmek için daha--dan %70 karaciğer rezeksiyonu gereklidir; Ancak, bir % 70 hepatectomy hala engraftment ve yaygın eğitim için yararlı olabilir daha az tedavi kapasitelerini karaciğer hasarı14sırasında analiz etmek için karaciğer hücrelerinde nakledilmektedir. Hepatositlerin nakli karın zarını15, kuyruk damar16, hepatik ven17veya18dalak aracılığıyla gerçekleştirilen yazı hepatectomy olmuştur. Yeniden oluşturmak daha kolay olduğu gibi şu anda, hepatik ven infüzyon ve tetkikine intrasplenic nakli tercih edilen, işlemlerdir.

Bu yazıda, bir yordam için % 30 kısmi hepatectomy düğümde anlatmıştık. SCID (BAŞINI SALLAMAK. CB17-Prkdcscid/J) içinde karaciğer sol lob eksize fareler. Bu nakli 0,2 milyon GFP ifade fare (C57BL/6-Tg (UBC-GFP) 30Scha/J) tetkikine hem de insan kaynaklı NeoHep19 dalak içinde izler. Bu yordamı karaciğer nakledilen hücrelerinin engraftment yol açar. Bu yordam az invaziv ve en az acı veren bir teknik olacaktır.

Protokol

Bu protokol için sunulan yordamları kurumsal hayvan etik komite tarafından Ulusal Enstitüsü İmmünoloji, Yeni Delhi onaylanmış olması. IAEC #319/13. onayı seri referans numarasıdır

Not: Genel cerrahi prosedürler20 ve kemirgen cerrahi21belirli iletişim kuralları üzerinde mükemmel kaynakları vardır. O hayvan ameliyatı: ilk kez, bu kapsamlı bir şekilde pratik cerrahi mankenleri üzerinde hayvanlar üzerinde çalıştırmadan önce tavsiye edilir.

1. hazırlık

  1. Deney öncesinde, steril fosfat tamponlu tuz (PBS) veya serum fizyolojik hazır tutun.
  2. Makas, tırtıklı forseps, doku forseps, pamuk, pamuk tomurcukları, naylon konuları ve farklı mikro iğne tutucular içeren bir cerrahi seti bir araya getirin. Otoklav cerrahi seti. Özel bir bağışıklık şaibeli NOD Eğer özen gösterilmelidir. SCID fare iletişim kuralında dahildir.
  3. Deneysel yordamın tamamı, ameliyat sonu için hazırlık gerçekleştirmek, biyo güvenlik sınıf ı kabine.
  4. Bir NOD tartın. 6-8 hafta ameliyat öncesi eski SCID fare. Fareler arasında 14-18 g ağırlığındaki bu çalışmada kullanılır.
  5. Fare üst orta ve hastalık karın bölgesi ile saç düzeltici tıraş. Saç kremi bölgenin tümünde eşit bir spatula ile tamamen kesilmiş kıllar kaldırmak için kaldırma uygulanır. 2-5 dakika sonra bir parça steril ıslak pamuk yardımıyla hafifçe tüyleri.
  6. Fareyi isoflurane odasında getirin ve oksijen silindir kapak kilidini. Oksijen akışı 4 L/dk hızında ve anestezi ikna etmek için % 4 isoflurane buharlaşma korumak.
    1. Fare düzgün nazik parmak pinching tarafından anestezi ki emin olun.
  7. Bir ameliyat kartını bir biyogüvenlik içinde kabine yerleştirin. Hayvan cerrahi gemide, öyle ki fare ventral kısmı yukarı gelecek şekilde ve fare ön kısmını isoflurane ve oksijen kaynağına bağlı burun konisi içinde yerleştirilir yerleştirin.
  8. % 2 isoflurane buharlaşma azaltmak ve cerrahi işlem sürdürmek.
  9. Fare cilt dezenfekte ve steril % 70 etanol batırılmış pamuk ile silerek sterilize.

2. cerrahi müdahale

  1. Kısmi Hepatectomy
    1. Xiphoid süreci ve göğüs kafesi, paralel düz işletim makas yardımıyla yaklaşık 1 cm enine bir kesi derinin hemen altında göğüs kemiği, dik olun.
    2. Yavaşça forseps veya cilt ve karın kas katmanı birbirinden ayırmak için steril ıslatılmış pamuk ipuçları ile kazıma alanı çevresinde karın kas tabaka ile bağlı cilt ayırın. İntradermal bölge kuruma kaçınmak için steril pamuklu ipuçları kullanma PBS ile ıslatın.
    3. Sol lob alan sorunsuz hemen altındaki xiphoid Periton katmanı yoluyla enine bir kesi yaparak ortaya çıkarmak. İki ıslatılmış pamuk ipuçları ortaya çıkarmak ve karaciğer sol lob kaldırmak için kullanın.
    4. Kesme karın tarafında pamuk uçlarından birini yerleştirin ve başka pamuk uç diyafram tarafında yer. Yavaşça doğru diyafram yerleştirilen bastırın ve karaciğer sol lob kaldırmak için sürgülü diğer ucunu tarafından ayır.
    5. Naylon iplik kaldırdı sol lob bir döngü ile kayma ve döngü hilus yakın sol lob Bankası mikro-forseps veya pamuk ipuçları yardımıyla doğru kaydırın. Yavaşça sol lob tabanına naylon iplik döngü itin.
    6. Mikrocerrahi iğne bağı ve mikro forseps kullanarak sol lob üst üzerinde naylon iplik iki ucu kravat. İki ek knot diğer tarafında yapmak.
    7. Bir makas yardımı ile bağlı LOB incelemek. Çok yakın iplik kesmeye çalışmayın. Yordamı daha fazla 5 dakika sürer, Periton boşluğu ve organları ile kuruma sıvı kaybı nedeniyle önlemek için steril PBS nemli tutun.
    8. Karın zarını tarafından sürekli dikiş kullanarak 4-0 akorduna dikiş dikmek. Daha sonra cilt tarafından sürekli dikiş kısa zamanda kapatın.
  2. Hücre transplantasyonu
    Not: GFP ifade tetkikine transgenik GFP fareler izole edildi (C57BL/6-Tg (UBC-GFP) 30 Scha/J), Lee ve arktarafından açıklanan yordamı göre. 22 ve Shen ve ark. 23 Hepatosit benzeri hücreler (NeoHep) insan kaynaklı monosit24 ayrıştırılan Ayrıca ekimi için kullanılmıştır. Ancak, herhangi bir diğer kaynaklardan elde hücreleri de protokol kullanılabilir.
    1. 0,2 milyon hücrelerin yaklaşık 50 µL Iscove'nın modifiye Dulbecco'nın orta (IMDM) içinde askıya alma ve 1 mL insülin şırınga 30 G iğne ile şapkalı içinde Aspire edin. Şırınga buza koyarak soğuk tutmak.
    2. Fare sol yanal bölümü ameliyatı gerçekleştiren kişi doğru yukarı dönük bir şekilde yerleştirin. Dalak alanını belirlemek ve kemiği cilt sadece dalak ortaya çıkarmak için Periton katmanı üzerinden kısa bir kesi ardından evhamlı bölge yakınındaki incelemek.
    3. Yavaşça dalak kaldırın ve dışarı kavite iki PBS yardımı ile ıslatılmış pamuk ipuçları tutun.
    4. Dalak dikkatle iki pamuk ipuçları ile bir elinde tutmak ve şırınga iğne tam olarak dalak için dikey yerleştirin. Yavaşça dalak işlemek ve iğne itmek çok yavaş içinde; İğneyi 2 mm'den daha derin almak gerekir.
    5. Şırınga piston yavaş yavaş hücreleri dalak enjekte için itin. Ekimi sonra iğne şırınga sabit tutmak ve yavaş yavaş kanama önlemek için dalak veya hücrelerinin kaybı kaldırma.
    6. Dalak pamuk ipuçları ile Periton boşluğu içine geri koyduktan sonra Periton tabakası sürekli ile 4-0 akorduna Dikiş dikiş tarafından kapatın. Cilt aralıklı ile aynı dikiş dikmek. Cilt kapanış için yara klip kullanmaktan kaçının; Bunun yerine, 4-0 dikiş tarafından kapatın. Yara klip fare doğal hareket kısıtlayabilir ve kez klipleri gevşek olmak ve hızlı bir şekilde ortaya çıkıyor.

3. ameliyat sonrası bakım

  1. Cilt kapattıktan sonra her iki dikiş site steril pamuklu ipucu kullanarak iyot solüsyonu (betadin) çevresi silin.
  2. 600 mg/kg vücut ağırlığına (genellikle 100 µL serum/fare içinde 12 mg sefotaksim) intraperitoneally gibi bir doz antibiyotik sefotaksim enjekte 1 mL şırınga kullanarak.
  3. Analjezik Meloksikam günlük doz 1 mg/kg hayvanın vücut ağırlığı (genellikle 12 µg Meloksikam 100 µL serum/fare içinde) intraperitoneally, ameliyattan sonra üç güne kadar ver.
  4. Ameliyat tamamlanması sonra isoflurane gaz akışını durdurmak ve tek tek havalandırılmış kafesine döndü fareyi getirin.

4. euthanization ve karakterizasyonu

  1. Deneysel endpoints sonra (1 gün ve 10 gün sonrası cerrahi), kurumsal hayvan etik kurallarına göre fareler ötenazi.
  2. Kan ölümcül oküler terminal pleksus delinme hayvanlar, kanama tarafından toplamak.
  3. Serum kandan yalıtmak.

Sonuçlar

% 30 kısmi hepatectomy sonra Hepatosit nükleer silahların yayılmasına karşı: Yayılması içinde kalan hepatositlerin % 30 hepatectomy sonra karaciğer Hücre proliferasyonu avans, Ki-67 boyama immunohistokimyasal (IHC) tarafından incelenmiştir. Bir gün sonrası hepatectomy, fareler ötenazi, kalan karaciğer lobları eksize ve parafin kesitler elde. Bölümleri ile Ki-67 antikor, horseradish peroksidaz (HRP) konjuge ikincil antikor ile etiketleme tarafından takip lekeli. Di-Amino Benzidine (D...

Tartışmalar

Kısmi hepatectomy soruşturma karaciğer rejenerasyonu için kurulan bir tekniktir ve aşırı hepatectomy AHF modeli taklit etmek için bildirilir. Hayvan AHF arasında kemirgenler, özellikle fareler, en araştırılmış modeli modellerdir. % 70 hepatectomy kadar farelerde karaciğer yaralanma modeli elde etmek için bir iyi hayatta kalma oranı25,26' bildirilmiştir. Ancak çıplak ve diğer immünyetmezligi fare, % 70 hepatectomy ölümcül olarak bildirilm...

Açıklamalar

Yazarlar ifşa gerek yok.

Teşekkürler

Bu eser Bölümü Biyoteknoloji, Hindistan hükümeti Ulusal Enstitüsü İmmünoloji, Yeni Delhi için alınan çekirdek grant tarafından desteklenmiştir. Dr. Bhattacharjee'nın şu anki adresim mı bölümü Gastroenteroloji, Hepatoloji ve beslenme, Çocuk Hastanesi Los Angeles.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Gas Anesthesia SystemUgo Basile; Italy211000
Weighing machineGoldtech ; IndiaLocal Procurement
Biological safety cabinet ( Class I)Kartos international;  IndiaLocal Procurement
Hair TrimmerPanasonic ;  Japan ER-GY10 
Straight operating scissor with sharp /sharp bladesMajor Surgicals; IndiaLocal Procurement
Forceps with SerrationsMajor Surgicals; IndiaLocal Procurement
Micro needle holders  straight & curved Mercian ;  England BS-13-8
1 ml insulin syringe with 30G *5/16 needles Dispo Van; India
1 ml syringe with 26 G * 1/2 needleBD ; US REF 303060
Nylon Threads  Mighty ; India(1-0) Local Procurement
MERSUTURES 4-0 Sterilised Surgical Needled SutureEthicon, Johnson & Johnson, IndiaNW 5047
TRUGUT 76 cm 4-0 absorbable surgical sutureSutures India Pvt. Ltd; IndiaSN 5048Sterilised Surgical Needled Suture Catgut Chromic
Cotton BudsPure Swabs Pvt Ltd ;  IndiaLocal Procurement
Surgical Tape3M India ; India1530-1Micropore Surgical Tape
MicrotomeHisto-Line Laboratories, ItalyMRS3500
Shandon Cryotome E CryostatThermo Electron Corporation ; US
Confocal laser scanning microscopeCarl Zeiss ; Germany LSM 510 META
Bright Field MicroscopeOlympus, JapanLX51
Automated analyserTulip, Alto Santracruz, IndiaScreen Maaster 3000Biochemical analyser for liver functional test
Flow CytometerBD ; US BD FACSverseAssesment of presence of cells post transplantation
Veet hair removal cream Reckitt Benckiser , India
FORANEAbbott ; USisoflurane USP 99.9% 
TaximAlKem ; Indiacefotaxime sodium injection
Povidone-Iodine solution Win-Medicare;  IndiaBetadine
ParaformaldehydeHimedia; IndiaGRM 3660
Iscove's Modified Dulbecco's Medium (IMDM)Life technologies, Thermo Fisher scientific ; US12200-036
SucroseSigma ; USS0389
Tissue-TekSakura; US25608-930O.C.T compound
DAPIHimedia; IndiaMB 097
anti-Albumin goat PolyclonalThermo Scientific,Pierce, USPA126081
anti-connexin 32/GJB1 Polyclonalabcam, UKab64609-500
antiGFP rabbit polyclonal Santa Cruz biotechnology; USSC 8334
Alexa Fluor 594 donkey anti-goat Molecular Probes , Thermo Fisher Scientific ;  USA11058
Alexa Fluor 488 donkey anti-sheep Molecular Probes , Thermo Fisher Scientific ;  USA11015
Alexa Fluor 594 chicken anti rabbit Molecular Probes , Thermo Fisher Scientific ;  USA21442
Goat anti rabbit IgG HRPInvitrogen, Thermo Fisher Scientific; US 65-6120
anti-Ki67 antibodyabcam, UKab15580
Antigen Unmasking Solution, Citric acid baseVector laboratories, USH-3300
ProLong Diamond antifade mountantLife technologies, Thermo Fisher scientific ; USP36966
SGOT (ASAT) KITCoral Clinical System, India
SGPT (ALAT) KITCoral Clinical System, India
Alkaline Phosphatase Kit (DEA)Coral Clinical System, India
Hematoxylin Solution, Mayer'sSigma ; USMHS16
Eosin Y solution, alcoholicSigma ; USHT110132
DPX Mountant Sigma ; US6522
Melonex (Pain Killer)Intas Pharmaceuticals Ltd; IndiaMeloxicam injection 
DAB enhanced liquid substrate system tetrahydrochlorideSigma ; USD3939

Referanslar

  1. Nussler, A., et al. Present status and perspectives of cell-based therapies for liver diseases. J. Hepatol. 45 (1), 144-159 (2006).
  2. Ponder, K. P., et al. Mouse hepatocytes migrate to liver parenchyma and function indefinitely after intrasplenic transplantation. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 88 (4), 1217-1221 (1991).
  3. Kokudo, N., Horimoto, H., Ishida, K., Takahashi, S., Nozawa, M. Allogeneic hepatocyte and fetal liver transplantation and xenogeneic hepatocyte transplantation for Nagase's analbuminemic rats. Cell Transplant. 5 (5 Suppl 1), S21-S22 (1996).
  4. Christ, B., Bruckner, S., Stock, P. Hepatic transplantation of mesenchymal stem cells in rodent animal models. Methods Mol. Biol. 698, 315-330 (2011).
  5. Fox, I. J., Roy-Chowdhury, J. Hepatocyte transplantation. J. Hepatol. 40 (6), 878-886 (2004).
  6. Glanemann, M., et al. Transplantation of monocyte-derived hepatocyte-like cells (NeoHeps) improves survival in a model of acute liver failure. Ann. Surg. 249 (1), 149-154 (2009).
  7. Rahman, T. M., Hodgson, H. J. Animal models of acute hepatic failure. Int. J. Exp. Pathol. 81 (2), 145-157 (2000).
  8. Zhang, L., et al. Granulocyte colony-stimulating factor treatment ameliorates liver injury and improves survival in rats with D-galactosamine-induced acute liver failure. Toxicol. Lett. 204 (1), 92-99 (2011).
  9. Gardner, C. R., et al. Role of nitric oxide in acetaminophen-induced hepatotoxicity in the rat. Hepatology. 27 (3), 748-754 (1998).
  10. Nardo, B., et al. Successful treatment of CCL4-induced acute liver failure with portal vein arterialization in the rat. Transplant Proc. 38 (4), 1187-1189 (2006).
  11. Sathyasaikumar, K. V., et al. Fulminant hepatic failure in rats induces oxidative stress differentially in cerebral cortex, cerebellum and pons medulla. Neurochem. Res. 32 (3), 517-524 (2007).
  12. Wu, J., et al. Laennec protects murine from concanavalin A-induced liver injury through inhibition of inflammatory reactions and hepatocyte apoptosis. Biol. Pharm. Bull. 31 (11), 2040-2044 (2008).
  13. Kaur, G., Tirkey, N., Chopra, K. Beneficial effect of hesperidin on lipopolysaccharide-induced hepatotoxicity. Toxicology. 226 (2-3), 152-160 (2006).
  14. Rupertus, K., et al. Major but not minor hepatectomy accelerates engraftment of extrahepatic tumor cells. Clin. Exp. Metastasis. 24 (1), 39-48 (2007).
  15. Selden, C., Casbard, A., Themis, M., Hodgson, H. J. Characterization of long-term survival of syngeneic hepatocytes in rat peritoneum. Cell Transplant. 12 (6), 569-578 (2003).
  16. Tang, T. H., et al. The role of donor hepatocytes and/or splenocytes pre-injection in reducing islet xenotransplantation rejection. Hepatobiliary. Pancreat. Dis. Int. 2 (3), 344-350 (2003).
  17. Goto, Y., Ohashi, K., Utoh, R., Yamamoto, M., Okano, T. Hepatocyte transplantation through the hepatic vein: a new route of cell transplantation to the liver. Cell Transplant. 20 (8), 1259-1270 (2011).
  18. Gabelein, G., et al. Intrasplenic or subperitoneal hepatocyte transplantation to increase survival after surgically induced hepatic failure?. Eur. Surg. Res. 41 (3), 253-259 (2008).
  19. Bhattacharjee, J., et al. Autologous NeoHep Derived From Chronic Hepatitis B Virus Patients' Blood Monocytes by Upregulation of cMET Signaling. Stem Cells Transl. Med. , (2016).
  20. . . Basic surgical skills. Emergency and Essential Surgical Care (EESC) programme. , (2017).
  21. Pritchett-Corning, K. R., Luo, Y., Mulder, G. B., White, W. J. Principles of rodent surgery for the new surgeon. J. Vis. Exp. (47), (2011).
  22. Lee, S. M., Schelcher, C., Demmel, M., Hauner, M., Thasler, W. E. Isolation of human hepatocytes by a two-step collagenase perfusion procedure. J. Vis. Exp. (79), (2013).
  23. Shen, L., Hillebrand, A., Wang, D. Q., Liu, M. Isolation and primary culture of rat hepatic cells. J. Vis. Exp. (64), (2012).
  24. Bhattacharjee, J., et al. Autologous NeoHep Derived from Chronic Hepatitis B Virus Patients' Blood Monocytes by Upregulation of c-MET Signaling. Stem Cells Transl. Med. 6 (1), 174-186 (2017).
  25. Hori, T., et al. Simple and sure methodology for massive hepatectomy in the mouse. Ann. Gastroenterol. 24 (4), 307-318 (2011).
  26. Hori, T., et al. Simple and reproducible hepatectomy in the mouse using the clip technique. World J. Gastroenterol. 18 (22), 2767-2774 (2012).
  27. Vidal, I., Richert, L. The nude mouse as model for liver deficiency study and treatment xenotransplantation. Int. J. Hepatol. , 1400147 (2012).
  28. Mitchell, C., Willenbring, H. A reproducible and well-tolerated method for 2/3 partial hepatectomy in mice. Nat. Protoc. 3 (7), 1167-1170 (2008).
  29. Ahmed, S. U., et al. Generation of subcutaneous and intrahepatic human hepatocellular carcinoma xenografts in immunodeficient mice. J. Vis. Exp. (79), e50544 (2013).
  30. Krikri, A., et al. Laparoscopic vs. open abdominal surgery in male pigs: marked differences in cortisol and catecholamine response depending on the size of surgical incision. Hormones (Athens). 12 (2), 283-291 (2013).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

T psay 132karaci erHepatectomyhepatositlerinIntrasplenic ekimiSCID fareNeoHep

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır