JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Önemli karaciğer donör kan olmadığını ve karaciğer bağış için ölçüt genişletilmiştir. Normothermic ex vivo karaciğer perfüzyon (NEVLP) değerlendirmek ve organ işlevini değiştirmek için geliştirilmiştir. Bu çalışma NEVLP bir fare modeli gösterir ve karaciğer koruma yaralanma azaltmak için pegile-katalaz, yeteneğini sınar.

Özet

Ekimi için karaciğer allogrefler önemli bir sıkıntısı bulunmamaktadır ve yanıt olarak donör ölçüt genişletilmiştir. Sonuç olarak, normothermic ex vivo karaciğer perfüzyon (NEVLP) değerlendirmek ve organ işlevini değiştirmek için bir yöntem olarak tanıttı. NEVLP ile karşılaştırıldığında hipotermik pek çok avantajı vardır ve perfüzyon subnormothermic dahil olmak üzere düşük koruma yaralanma, normal organ fonksiyon değerlendirmesi organ performans ve organ onarım için bir platform olarak fizyolojik koşullarda restorasyonu , yenileme ve değiştirme. Fare ve domuz NEVLP modelleri anlatmıştık. Biz NEVLP bir fare modeli göstermek ve onun önemli uygulamalardan birini göstermek için bu modeli kullanan — terapötik bir molekül için karaciğer perfusate eklendi kullanımı. Katalaz endojen reaktif oksijen türleri (ROS) Scavenger ve iskemi-reperfüzyon göz, beyin ve akciğer azaltmak için kanıtlanmıştır. Pegylation katalaz endotel için hedef göstermiştir. Burada, temel perfusate pegile-katalaz (PEG-CAT) eklendi ve karaciğer koruma yaralanma azaltmak için onun yetenek gösterdi. Bir avantaj bizim kemirgen NEVLP modeli ile karşılaştırıldığında daha büyük hayvan modelleri ucuz olmasıdır. Bir Bu çalışmada bu şu anda sonrası perfüzyon karaciğer nakli içermez kısıtlamasıdır. Bu nedenle, tahmin fonksiyonu sonrası organ nakli kesin olarak yapılamaz. Ancak, sıçan karaciğer nakli modeli de kurulur ve kesinlikle bu modeli ile birlikte kullanılabilir. Sonuç olarak, sıçan kullanarak bir ucuz, basit, kolay kopyalanabilir NEVLP modeli göstermiştir. Bu model uygulamaları test roman perfusates ve perfusate katkı maddeleri, test organ değerlendirme için tasarlanmış yazılım ve organları onarmak için tasarlanmış deneyler içerebilir.

Giriş

Karaciğer nakli için bekleme listesinde 14,578 hasta var ve yaklaşık 7000 nakli yıl1,2başına gerçekleştirilir. Bu önemli donör sıkıntısı yanıt olarak, karaciğer bağış ölçütlerini genişletmiştir; Bu marjinal organ veya genişletilmiş ölçüt bağış anılır ve nakli birincil greft disfonksiyon ve gecikmiş graft fonksiyonu3daha yüksek oranda ile standart ölçütleri allogrefler daha sonra daha az şey gerçekleştirmek için beklenen, 4,5,6. Sonuç olarak, NEVLP değerlendirmek ve organ fonksiyon6,7değiştirmek için bir yöntem olarak tanıttı. Biz NEVLP bir sıçan model tasarlanmış ve Roman molekül katkı maddeleri karaciğer perfusate için test önemli potansiyel uygulamaları – birini göstermek için bu modeli kullanılmıştır.

NEVLP fare (sıçan) ve domuz modelleri yanı sıra atılan insan organları6,8,9değerlendirilmiştir. NEVLP ilk insan çalışmaların sonuçlarını da son zamanlarda yayımlanan10olmuştur. Hipotermik makine perfüzyon açıkça böbrek korunması için standart haline gelmiştir, karaciğer hangi makinede perfüzyon gerçekleşmesi gereken sıcaklık hala tartışmalı olsa da. NEVLP ile karşılaştırıldığında hipotermik birçok önerilen avantajları vardır ve subnormothermic perfüzyon. Bunlar sınırlı koruma yaralanma, normal organ fonksiyon fizyolojik koşullar altında organ performansını değerlendirmek için yetenek ve organ onarım, yenileme ve değiştirme7,11için bir platform olarak restorasyonu içerir, 12,13,14,15,16,17.

Domuz NEVLP modelleri kullanarak çok sayıda çalışmalar tamamlanmıştır. Ne zaman insan organlarını veya insan klinik çalışmalar göz önüne alındığında modelleri kullanarak atılan bu modeller nispeten ucuzdur, bizim küçük hayvan NEVLP modeli karşılaştırıldığında çok pahalı olmakla birlikte. Önemli bir bileşeni olan deney perfusate maliyetidir. Biz perfusate nispeten düşük bir maliyetle, 300 mL ile bir 4 h perfüzyon tamamlamak edebiliyoruz. Ayrıca, fareler de dahil olmak üzere küçük hayvanların domuz maliyeti ile karşılaştırıldığında çok düşük maliyetidir.

İle karşılaştırıldığında diğer modellerinde NEVLP sıçan, burada sunulan modeli uygulamak oldukça basit ve geniş bir uygulama yelpazesi vardır. Perfüzyon devre Şekil 1' de görülebilir. Perfusate bir su ceketli kapsayıcı olan perfusate rezervuar (1), içinde başlar. Perfusate su deposu silindir pompa (2) tarafından çekti ve bir windkessel (3) ve oxygenator (4) içine itti. Oxygenator countercurrent gaz ve perfusate akışı için maksimum gaz değişimi sağlamak için ayarlanır. Perfusate sonra bir Isıtma gelirleri (5) iç emin olmak için perfüzyon odası olduğunu fizyolojik sıcaklığında kangal ve hava kabarcıkları orada perfüzyon önlemek için bir kabarcık tuzak (6) öncesi organ (7) ve sonrası organ (8) olmak perfusate izin örnek bağlantı noktaları tatmak. Perfusate sonra karaciğer portal ven kanülü yoluyla girer. Portal ven kanülü değerleri veri toplama yazılımı üzerinde çizelgeleri bir basınç monitör bağlı olduğu. Perfusate sonra karaciğer IVC kanül aracılığıyla çıkar ve basınç ekolayzer bloğu (9) içine akar. Son olarak, perfusate basınç bloğundan silindir pompa ile çekti ve göle boşalttım. Bu model için portal ven sürekli perfüzyon içerir ve hepatik arter ve her biri ayrı ve ek devre gerektirir, bazı diğer modellerinde kullanılan diyaliz pulsatil akışı bırakır ama olmamak daha önce gösterilmiştir gerekli9,13.

Roman bir terapötik molekül eklenmesi için perfusate keşfetmek için enzim katalaz seçtik. Katalaz ROS18etkilerini azaltmak için iç hücreleri savunma mekanizmasının bir parçası olduğu bir endojen ROS çöpçü var. Katalaz ifade hepatik iskemi reperfüzyon hasarı19' artar. Katalaz deneysel ilavesi iskemi-reperfüzyon göz, beyin ve akciğer20,21,22,23,24azaltmak için kanıtlanmıştır. Pegylation endotel hücreleri25katalaz endotel ve katalaz alımını yardım için hedef göstermiştir. PEG-kedi sistemik hepatik iskemi-reperfüzyon hasarı azaltmada sınırlı etkinliği ile idare edilmiştir; Ancak, PEG-kedi bir izole organ perfüzyon devre için geliştirilmiş yol açacak ekleme26,27,28sonuç olan. Burada, bizim temel perfusate PEG-kedi ekleyin ve onun yeteneğini göstermek karaciğer koruma yaralanma azaltmak.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Tüm yordamları kurumsal hayvan bakım kurallarına göre gerçekleştirilen ve Ulusal Araştırma Konseyi insana ilişkin bakım ve laboratuvar kullanım hayvanlar (IACUC) Kılavuzu ve Ohio Devlet Üniversitesi IACUC Komitesi tarafından onay uğramıştır.

1. ilk kurulum

  1. Aşağıdakileri birleştirerek perfüzyon çözüm hazırlamak: 86 mL % 25 albümin, Williams ın medya 184 mL, 30 mL penisilin/streptomisin (10 U/mL penisilin ve 0.01 mg/mL streptomisin), insülin (50 U/L), heparin (0.01 U/mL), L-glutamine (0.292 g/L) ve hidrokortizon (0,010 g/L) 300 mL toplam hacmiyle. Temel perfusate ve PEG-kedi grubu için PEG-kedi 625 U/mL ekleyin.
    1. Tris (hydroxymethyl) aminomethane (THAM) pH 7.4 için kullanarak perfusate çözüm tampon. Bir arteryel kan gazı makine perfusate pH onaylamak için kullanın.
  2. Devre (resim 1) ayarlayın.
    1. Sıcak su banyosu açın ve 37 ° C'ye ayarlayın Isınmak organ odası izin.
    2. Karışık ve tamponlu perfusate rezervuar dökün ve dolaşımı başlar.
      Not: Bu adımda belirtilen perfusate adım 1.1.1 hazırlanmıştır.
    3. Satır içi oxygenator aracılığıyla akış sayaç için oxygenating gaz (%95 oksijen ve % 5 karbon dioksit) açın.
    4. Veri toplama yazılımı açın ve "deneme süresi için kaydetmek Başlat".
  3. Cerrahi mikroskop ve ameliyathane (Şekil 2) ayarlayın.
    1. Isınma kurulu, elektrokoter ve anestezi ve izleme donanımları hayati (kalp hızı ve oksijen doygunluk) de dahil olmak üzere tüm ekipmanları açın.
      Not: Mikroskop ayarları kullanılan mikroskobunun göre değişir ve kullanıcının konfor için ayarlanabilir.
    2. İnhalasyon (molekül ağırlığı 184.5 g/mol) için sıvı isoflurane 10 mL ile 10 mL anestezi şırıngaya doldur ve anestezi birimine yerleştirin.
    3. 0.5 mL şırınga heparin (50 U), cerrahi aletler, pozisyon, 4-0 ile 7-0 ipek sütür, steril pamuk temizleme bezi ve 4 cm x 4 dokuma olmayan cm gazlı bez sünger uygun şekilde (Şekil 2).
  4. İsoflurane odası hazırlamak.

2. anestezi indüksiyon

  1. Aşağıdaki kişisel koruyucu donanımları (PPE): cerrahi maske, cerrahi eldiven, tek kullanımlık elbisesi.
  2. Tartmak iri fare.
    Not: 250-350 g arasında Sprague-Dawley rat kullanın.
  3. Oksijen kompresör ve isoflurane açın. Rat, isoflurane odasına tartılır sonra yerleştirin ve kapağı güvenli. 2 L/dak oksijen ile teslim % 6 isoflurane kullanarak anestezi neden.
    Not: kullanılan belirli anestezi sistemde kullanılan tam isoflurane doz bağlı olacaktır.
  4. Hayvanın karın saç. klip için elektronik makası kullanın
  5. Hayvan isoflurane odasında değiştirin.
  6. Ameliyat odasında bulunan anestezi birimi açın.
  7. Anestezi tamamen indüklenen zaman fareyi isoflurane odasından kaldırın. Bir ayak çimdik kullanarak anestezi derinliği onaylayın.

3. satın alma prosedürü

  1. 16 G portal kol düğmesi (Şekil 3) hazırlayın.
    1. 16 G angiocatheter ile başlar. 7 mm bölüm hortumunun kesmek. 3.5 mm. deşmek orta nokta itibariyle ölçerek 7 mm bölüm orta noktasını belirlemek ve tüp ön yarısı kaldırın.
    2. Şimdi düz bu bölümü ezmek için bir hemostat kullanın. Daha hafif bir dudak oluşturmak için angiocatheter diğer ucundaki eritmek için kullanın. İpucu doğrudan alevin içine koymayın veya tutuşturmak olacak.
  2. Safra kanalını kanül hazırlayın.
    1. 27 G angiocath alın ve sadece kateter bırakarak enjeksiyon bağlantı noktası kesti. Bu 27 G cannular boru 10 cm bölümüne bağlanın.
  3. Pozisyonu burnu fareyle anestezi burun konisi ve onun dört ekstremite immobilize. Hayati belirtileri sol arka ekstremite için monitör ekleyerek izlemek. Uygun anestezi derinliği onaylamak için bir ayak çimdik gerçekleştirin. Anestezi % 4 isoflurane devam (tartmak hayvanlar için > 250 g).
  4. Hayvanın karın % 70 izopropil alkol ile sprey. Kurumasını sağlar. Steril örtü üzerinde hayvan yer.
  5. Keskin makas ve deri (Şekil 4) yoluyla uzanan pubis kullanarak bir ensizyon xiphoid üzerinden yapmak. Yavaşça Karın zarını girin ve kas deşmek. Bu kesi aşağı yönü mesane ve bu kesi üstün yönüyle karaciğer zarar görmesini önlemek için dikkat ediniz.
  6. Belgili tanımlık kesme bir haç karaciğer alt kenarlığını düzeyde oluşturmak için sağ ve sol yanal için genişletmek.
  7. Anestezi % 2 aşağı çevirmek (tartı hayvanlar için > 250 g).
  8. Xiphoid bir eğri sivrisinek kelepçe ve kaburga kaburga ekartör (Şekil 5) kullanarak kullanarak işlemi geri çek.
  9. Falciform, frenik, kesme ve gastrohepatic bağ keskin makas ile kesme.
  10. Bulun ve frenik damar kökenli sızıntı önlemek mümkün olduğunca yakın 7-0 dikiş ile kravat-off.
  11. Steril ıslatılmış pamuk uç aplikatör kullanarak fare içini ve barsak % 0,9 normal salin ile ıslatılmış gazlı bez şal. İnce bağırsak damarlara germek değil için dikkat ediniz.
  12. İnferior vena kava (IVC aşırı doku kaldırmak için) üzerinde incelemek. Bifurkasyon için sadece üstün IVC arkasında incelemek ve bir 4-0 ipek sütür daha sonra kullanmak (Şekil 6) döngüsü geçirin.
  13. Şu adrenal ven maruz sağlamak için sağ böbrek geri çek. Superior gazlı bez ile karaciğer sağ lob geri çek. 7-0 ipek sütür ile Şu adrenal ven IVC gibi mümkün olduğunca yakın bağlayın ve kravat (Şekil 7) distal genelinde dağlamak.
  14. Dikkatlice splenik ven incelemek, iki 7-0 ipek sütür kullanarak bağla ve arasında iki dikiş kesti.
  15. Bağlayın ve gerekirse ek damarlar için portal ven üzerinde ek uzunluğu 7-0 ipek sütür kullanarak ligate.
    Not: Bazen aşağı karaciğer arasındaki şu adrenal ven infrahepatic IVC küçük dalları vardır.
  16. İncelemek gastroduodenal arter, gastroduodenal arter 7-0 ipek sütür ile bağlayın ve gastroduodenal arter ligate.
  17. Hepatik arter teşrih ve çevresinde (Şekil 8) 7-0 ipek sütür kravat yerleştirin.
  18. Safra kanalını incelemek.
    1. Safra kanalını uzunluğunu denetleyin. Safra kanalını distal uçta bir 7-0 ipek sütür kullanarak bağlayın. 7-0 ipek sütür safra kanalını çevresinde bir döngü mümkün olduğunca proksimale yer.
    2. Küçük makas ile kesme kanalının yarı çapı bir delik ve bir 27 G kateter proksimale safra kanalını yerleştirin. Kateter Roma Peep kravat dikiş (Şekil 9) kullanarak yerde bağla.
  19. 0.5 mL heparin (50 U) penis ven veya IVC 27 G iğne kullanarak hayvanın enjekte.
    Not: 27 G insülin şırınga de bunun yerine kullanılabilir.
  20. Kelepçe ve 4-0 ipek sütür daha önce yerleştirilmiş kullanarak IVC kravat.
  21. Daha önce yerleştirilmiş kullanarak hepatik arter 7-0 ipek sütür bağla.
  22. Portal ven mikrocerrahi klipi kullanarak kelepçe. Portal ven 22 G angiocatheter kullanarak cannulate. Floş portal ven ile soğuk % 0,9 normal salin ile 1 mL heparin (100 U) karaciğer kadar 60 mL (Şekil 10) blanches.
    Not: karaciğer hemen beyazlatmak değil Eğer bu Steril Pamuklu tıp uygulayıcıları ile masaj.
  23. Suprahepatic IVC ortaya çıkarmak ve yüksek mümkün olduğunca göğsünden kesti.
  24. Bir hepatectomy aşağıdaki gibi yapın. Diyafram kesmek, hepatik arter kesmek, IVC kesmek, portal ven kesmek, herhangi bir ek bağ kesilmiş ve karaciğer çıkar. Karaciğer buz soğuk % 0,9 normal salin (Şekil 11) yerleştirin.
  25. Yeri 16 G vasküler manşet portal ven (Şekil 12). Karaciğer ex vivo normothermic karaciğer perfüzyon devre üzerinde yerleştirin.

4. Ex Vivo Normothermic karaciğer perfüzyon

Not: burada kullanılan perfusate Protokolü adım 1.1.1 hazırlanmıştır.

  1. Portal ven kanülü kelepçeli portal ven (Şekil 13) yerleştirin.
  2. Portal ven kanülü yerleştirme sırasında başlatmak için 2 mL/dk devre üzerinden perfusate akışını korumak. İzlemek için herhangi bir sivri portal ven basıncında monitör; Bu gemi tıkandı haline ve kanül yeniden konumlandırma gereklidir gösterebilir.
  3. 7-0 ipek dikiş kullanarak perfusate dönüş akışını IVC kanül içinde dikiş.
  4. Bir kez her iki kanüller yerdesiniz, 10-16 cmH2O dizi fizyolojik bir basınç gelinceye kadar debi 1 mL/dk dönüm başlar.
  5. 1 mL örnek öncesi ve sonrası limanlarda 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 ve perfüzyon 240 min al. 1 mL örnek iki 0.5 mL örnek bölün.
    Not: 0.5 mL bu protokolü adım 4.5.1 kullanılan ve 0.5 mL kullanılan protokol adım 4.5.2.
    1. Ek bu Örneğin kriyojenik tüpler 0.5 mL sıvı azot dondur.
    2. Perfusate kalan 0.5 mL kullanarak bir arteryel kan gazı analizi yap.
    3. Kan gazı analizi her zaman noktası çalıştırdıktan sonra (0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 ve 240 min) pH seviyeleri incelemek ve pH 7.4 dönmek için gerektiği gibi perfusate tampon.
  6. Perfüzyon 4 h sonucunda, karaciğer perfüzyon devre bağlantısını kesin. Karaciğer 0.5 g parçalara bölün. Ek kriyojenik tüpler karaciğer dokusunda sıvı azot dondur.

5. sonrası deneme Analizi

  1. Alanin aminotransferaz (ALT) düzey, 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 ve 240 min bir ticari Renkölçer tahlil kit kullanarak perfusate belirler.
    1. Kısacası, perfusate tepki mix reaktifler 60 dk. optik yoğunluk değerleri 570 ölçü için 37 ° C'de ile kuluçkaya Mikroplaka Okuyucu kullanarak nm.
  2. Karaciğer dokusu 0.5 g 100 µL lizis arabelleği ile homojenize ve dokusu adenozin trifosfat (ATP), glutatyon (GSH) ve malondialdehit (MDA) için lysate analiz.
    1. Kısacası, bir ticari tahlil kit kullanarak karaciğer doku örnekleri ATP düzeylerini ölçmek. Örnek ile reaksiyon tampon mix ve 30 dk. ölçü 570, optik yoğunluk için oda sıcaklığında kuluçkaya Mikroplaka Okuyucu kullanarak nm.
    2. Bir ticari tahlil kit kullanarak karaciğer doku örnekleri GSH düzeyleri ölçmek. Doku örnekleri tahlil kokteyl ile karıştırın. 405-414 nm optik yoğunluk değerlerinde ölçmek.
    3. Bir ticari tahlil kit kullanarak karaciğer doku örnekleri MDA düzeyleri ölçmek. TBA ve ısı ile 95 ° C 60 dk. santrifüj kontrollerimiz örnekleri karıştırın ve süpernatant bir 96-şey tabağa aktarın. 532, optik yoğunluk ölçmek nm.
  3. Karaciğer dokusu 0.5 g 100 µL lizis arabelleği ile homojenize ve doku bir ticari tahlil kit kullanarak göreli caspase-3/7 etkinlik için lysate analiz.
    1. Doku lysate ile caspase-3-7 reaktif tahlil tampon mix ve 30 dk için oda sıcaklığında kuluçkaya.
    2. Her şey Mikroplaka Okuyucu kullanarak floresans düzeyini ölçmek.
  4. Apoptotik hücre bir ticari in situ ölüm algılama kit kullanarak karaciğer doku örneklerinde düzeyini belirler.
    1. 0,5 g doku ile 10 U/mL İndinavir K 10 min için kesitler ve 60 dk. gerçekleştir floresan mikroskop kullanarak analiz için 37 ° C'de tepki karışımı ile kuluçkaya önceden tedavi.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

Bir örnek boyutu grubu başına üç sıçan kullanıldı. ALT 0, 30, 60, 90, 120, 150, 180, 210 ve perfüzyon 240 min ölçüldü. Kullandığımız öğrencinin t-testleri temel perfusate ve temel perfusate artı, her zaman bir noktada PEG-kedi gruplar arasında karşılaştırılması. Temel perfusate ve temel perfusate artı PEG-kedi grupları karşılaştıran, işte önemli ölçüde daha az (p < 0,05) ALT taban perfusate artı PEG-kedi grubu 150, 180, 210 ve 240 ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Ekimi için karaciğer allogrefler önemli bir sıkıntısı bulunmamaktadır ve yanıt olarak donör ölçüt genişletilmiş1,2,3,4,5olmuştur. Donör sıkıntısı sonucu olarak değerlendirmek ve organ fonksiyon6,7değiştirmek için bir yöntem olarak NEVLP tanıttı. NEVLP bir fare modelini tasar...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Açıklamalar

Tüm yazarlar onlar hiçbir ilgili açıklamalar var rapor.

Teşekkürler

Bu eser, Organ nakli, perfüzyon, mühendislik ve rejenerasyon Ohio State Üniversitesi'nde NIH T32AI 106704-01A1 ve T. Flesch Fonu tarafından desteklenmiştir.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Perfusate
8% AlbuminCLS Behring, King of Prussia, PA0053-7680-32
Williams MediaSigma Aldrich, St. Louis, MOW1878
Penicillin/StreptomycinSigma Aldrich, St. Louis, MOP4333
InsulinEli Lilly, Indianapolis, IL0002-8215-91
HeparinFresnius Lab, Lake Zurich, ILC504701
L-glutamineSigma Aldrich, St. Louis, MOG3126
HydrocortisoneSigma Aldrich, St. Louis, MOH0888
THAMHospira, Inc,0409-1593-04
Polyethylene Glycol - CatalaseSigma AldrichS9549 SIGMA
Personal Protective Equipment
Surgical MaskGenericN/A
Protective GownGenericN/A
Surgical GlovesGenericN/A
Liver Procurement
Sprague-Dawley RatHarlan Sprague Dawley Inc.250 -350 grams
Surgical MicroscopeLeicaM500-N w/ OHS
Charcoal CanistersKent ScientificSOMNO-2001-8
IsofluranePiramal HealthcareN/A
Pressure-Lok Precision Analytical Syringe Valco Instruments Co, Inc.SOMNO-10ML
Electrosurgical UnitMacanMV-7A
Warming PadBraintree ScientificHHP2
SomnoSuite Small Animal Anesthesia SystemKent ScientificSS-MVG-Module
PhysioSuiteKent ScientificPS-MSTAT-RT
Isoflurane chamberKent ScientificSOMNO-0530LG
SurgiVetIsotecCDS 9000 Tabletop
OxygenPraxair98015
Rib retractorsKent ScientificINS600240
GenieTouchKent ScientificGenieTouch
Normal SalineBaxterNDC 0338-0048-04
4x4 Non-Woven SpongesCriterion104-2411
Sterile Q-TipsHenry Schein Animal Health1009175
U-100 27 Gauge Insulin SyringeTerumo22-272328
5mL SyringeBDREF 309603
4-0 Braided Silk SutureDeknatel, Inc.198737LP
7-0 Braided Silk SutureTeleflex MedicalREF 103-S
16 gauge CathetersBBraun Introcan Safety4252586-02
14 gauge CathetersBBraun Introcan Safety4251717-02
Bile Duct Cannular TubingAltec01-96-1727       
Liver Perfusion Circuit Components
Water Bath WarmerLauda Ecoline StareditionE103
Data Collection SoftwareADInstruments Labchart 7
Liver Perfusion CircuitHarvard Apparatus73-2901
Membrane OxygenatorMediac SPAM03069
Roller PumpIsmatecISM827B
Gas (95% oxygen and 5% carbon dioxide)Praxair98015
Organ ChamberHarvard ApparatusILP-2
1.8 mL Arcticle Cryogenic TubeUSA Scientific1418-7410
MucasolSigma-AldrichZ637181
Microsurgical Instruments
Small ScissorsRobozRS-5610
Large ScissorsS&TSAA-15
Forceps - Large AngledS&TJFCL-7
Forceps - Small AngledS&TFRAS-15 RM-8
Clip ApplierROBOZRS-5440
Scissors - non microFST 14958-1114958-11
Forceps - Straight TipS&TFRS-15 RM8TC
Large Microsurgical ClipFine Scientific Tools18055-01
Small Microsurgical ClipFine Scientific Tools18055-01
Small Microsurgical ClipFine Scientific Tools18055-02
Small Microsurgical ClipFine Scientific Tools18055-03
Small Mosquito ClampsGenericN/A
Post-Experiment Analysis
Alanine Aminotransferase (ALT) Activity Colorimetric/Fluorometric Assay KitBioVisionK752
Adenosine Triphosphate (ATP) Colorimetric/Fluorometric Assay KitBioVisionK354
Glutathione Assay KitCayman Chemical703002
Lipid Peroxidation (MDA) Assay KitAbcamab118970
Caspase-Glo 3/7 Assay SystemsPromegaG8090
POLARstar OMEGA Microplate ReaderBMG LABTECHN/A

Referanslar

  1. Network, O. P. aT. National Data. Overall by Organ. Current U.S. Waiting List. Based on OPTN data as of October 19, 2017. , Available from: https://optn.transplant.hrsa.gov/data/view-data-reports/national-data/# (2017).
  2. OPTN, O. P. aT. N. National Data, Transplants by Donor Type, U.S. Transplants Performed January 1, 1988 - December 31, 2016, For Organ = Liver. , Available from: https://optn.transplant.hrsa.gov/data/view-data-reports/national-data/# (2017).
  3. Nemes, B., et al. Extended criteria donors in liver transplantation Part I: reviewing the impact of determining factors. Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 10 (7), 827-839 (2016).
  4. Nemes, B., et al. Extended-criteria donors in liver transplantation Part II: reviewing the impact of extended-criteria donors on the complications and outcomes of liver transplantation. Expert Rev Gastroenterol Hepatol. 10 (7), 841-859 (2016).
  5. Pezzati, D., Ghinolfi, D., De Simone, P., Balzano, E., Filipponi, F. Strategies to optimize the use of marginal donors in liver transplantation. World J Hepatol. 7 (26), 2636-2647 (2015).
  6. Marecki, H., et al. Liver ex situ machine perfusion preservation: A review of the methodology and results of large animal studies and clinical trials. Liver Transpl. 23 (5), 679-695 (2017).
  7. Barbas, A. S., Knechtle, S. J. Expanding the Donor Pool With Normothermic Ex Vivo Liver Perfusion: The Future Is Now. Am J Transplant. 16 (11), 3075-3076 (2016).
  8. Dries, S., et al. Ex vivo normothermic machine perfusion and viability testing of discarded human donor livers. Am J Transplant. 13 (5), 1327-1335 (2013).
  9. Westerkamp, A. C., et al. End-ischemic machine perfusion reduces bile duct injury in donation after circulatory death rat donor livers independent of the machine perfusion temperature. Liver Transpl. 21 (10), 1300-1311 (2015).
  10. Selzner, M., et al. Normothermic ex vivo liver perfusion using steen solution as perfusate for human liver transplantation: First North American results. Liver Transpl. 22 (11), 1501-1508 (2016).
  11. Whitson, B. A., Black, S. M. Organ assessment and repair centers: The future of transplantation is near. World J Transplant. 4 (2), 40-42 (2014).
  12. Tolboom, H., et al. Subnormothermic machine perfusion at both 20°C and 30°C recovers ischemic rat livers for successful transplantation. J Surg Res. 175 (1), 149-156 (2012).
  13. Nagrath, D., et al. Metabolic preconditioning of donor organs: defatting fatty livers by normothermic perfusion ex vivo. Metab Eng. 11 (4-5), 274-283 (2009).
  14. Boehnert, M. U., et al. Normothermic acellular ex vivo liver perfusion reduces liver and bile duct injury of pig livers retrieved after cardiac death. Am J Transplant. 13 (6), 1441-1449 (2013).
  15. Schön, M. R., et al. Liver transplantation after organ preservation with normothermic extracorporeal perfusion. Ann Surg. 233 (1), 114-123 (2001).
  16. Reddy, S., et al. Non-heart-beating donor porcine livers: the adverse effect of cooling. Liver Transpl. 11 (1), 35-38 (2005).
  17. Banan, B., et al. Novel strategy to decrease reperfusion injuries and improve function of cold-preserved livers using normothermic ex vivo liver perfusion machine. Liver Transpl. 22 (3), 333-343 (2016).
  18. Held, P. An Introduction to Reactive Oxygen Species: Measurement of ROS in Cells. , BioTek Instruments, Inc. Vinooski, Vermont. 1-14 (2012).
  19. Chen, C. F., et al. Reperfusion liver injury-induced superoxide dismutase and catalase expressions and the protective effects of N-acetyl cysteine. Transplant Proc. 39 (4), 858-860 (2007).
  20. Chen, B., Tang, L. Protective effects of catalase on retinal ischemia/reperfusion injury in rats. Exp Eye Res. 93 (5), 599-606 (2011).
  21. He, Y. Y., Hsu, C. Y., Ezrin, A. M., Miller, M. S. Polyethylene glycol-conjugated superoxide dismutase in focal cerebral ischemia-reperfusion. Am J Physiol. 265 (1 Pt 2), H252-H256 (1993).
  22. Işlekel, S., Işlekel, H., Güner, G., Ozdamar, N. Alterations in superoxide dismutase, glutathione peroxidase and catalase activities in experimental cerebral ischemia-reperfusion. Res Exp Med (Berl). 199 (3), 167-176 (1999).
  23. Li, G., Chen, Y., Saari, J. T., Kang, Y. J. Catalase-overexpressing transgenic mouse heart is resistant to ischemia-reperfusion injury. Am J Physiol. 273 (3 Pt 2), H1090-H1095 (1997).
  24. Nowak, K., et al. Immunotargeting of catalase to lung endothelium via anti-angiotensin-converting enzyme antibodies attenuates ischemia-reperfusion injury of the lung in vivo. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 293 (1), L162-L169 (2007).
  25. Beckman, J. S., et al. Superoxide dismutase and catalase conjugated to polyethylene glycol increases endothelial enzyme activity and oxidant resistance. J Biol Chem. 263 (14), 6884-6892 (1988).
  26. Yabe, Y., Nishikawa, M., Tamada, A., Takakura, Y., Hashida, M. Targeted delivery and improved therapeutic potential of catalase by chemical modification: combination with superoxide dismutase derivatives. J Pharmacol Exp Ther. 289 (2), 1176-1184 (1999).
  27. Yabe, Y., et al. Prevention of neutrophil-mediated hepatic ischemia/reperfusion injury by superoxide dismutase and catalase derivatives. J Pharmacol Exp Ther. 298 (3), 894-899 (2001).
  28. Ushitora, M., et al. Prevention of hepatic ischemia-reperfusion injury by pre-administration of catalase-expressing adenovirus vectors. J Control Release. 142 (3), 431-437 (2010).
  29. Kakizaki, Y., et al. The Effects of Short-Term Subnormothermic Perfusion after Cold Preservation on Liver Grafts from Donors after Cardiac Death: An Ex Vivo Rat Model. Transplantation. , (2018).
  30. Kumar, R., Chung, W. Y., Dennison, A. R., Garcea, G. Ex Vivo Porcine Organ Perfusion Models as a Suitable Platform for Translational Transplant Research. Artif Organs. , (2017).
  31. Nativ, N. I., et al. Liver defatting: an alternative approach to enable steatotic liver transplantation. Am J Transplant. 12 (12), 3176-3183 (2012).
  32. Yeung, J. C., et al. Ex vivo adenoviral vector gene delivery results in decreased vector-associated inflammation pre- and post-lung transplantation in the pig. Mol Ther. 20 (6), 1204-1211 (2012).
  33. Goldaracena, N., et al. Inducing Hepatitis C Virus Resistance After Pig Liver Transplantation-A Proof of Concept of Liver Graft Modification Using Warm Ex Vivo Perfusion. Am J Transplant. 17 (4), 970-978 (2017).
  34. Van Raemdonck, D., Neyrinck, A., Rega, F., Devos, T., Pirenne, J. Machine perfusion in organ transplantation: a tool for ex vivo graft conditioning with mesenchymal stem cells? Curr Opin Organ Transplant. 18 (1), 24-33 (2013).
  35. Pratschke, S., et al. Results of the TOP Study: Prospectively Randomized Multicenter Trial of an Ex Vivo Tacrolimus Rinse Before Transplantation in EDC Livers. Transplant Direct. 2 (6), e76(2016).
  36. Pratschke, S., et al. Protocol TOP-Study (tacrolimus organ perfusion): a prospective randomized multicenter trial to reduce ischemia reperfusion injury in transplantation of marginal liver grafts with an ex vivo tacrolimus perfusion. Transplant Res. 2 (1), 3(2013).
  37. Nativ, N. I., et al. Elevated sensitivity of macrosteatotic hepatocytes to hypoxia/reoxygenation stress is reversed by a novel defatting protocol. Liver Transpl. 20 (8), 1000-1011 (2014).
  38. Lonze, B. E., et al. In vitro and ex vivo delivery of short hairpin RNAs for control of hepatitis C viral transcript expression. Arch Surg. 147 (4), 384-387 (2012).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

T psay 136Normothermic ex vivo karaci er perf zyonNEVLPmarjinal organlarl t bak k hayvan modelikemirgens an geni letilmi

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır