Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Locus coeruleus nöronlar fizyolojik süreçleri çeşitli ilgili küçük bir kümesidir. Burada, biz fare beyin bölümleri çalışmalar proteinler ve bu çekirdek metal analizleri hazırlamak için bir protokol tanımlamak.

Özet

Locus coeruleus (LC) fizyolojik fonksiyonları bir dizi modüle nöronlar üreten norepinefrin önemli bir merkezidir. LC yapısal veya fonksiyonel anormallikleri korteks, Hipokampus ve beyincik de dahil olmak üzere çeşitli beyin bölgeleri etkileyen ve depresyon, bipolar bozukluk, anksiyete, hem de Parkinson hastalığı ve Alzheimer hastalığı için katkıda bulunabilir. Bu bozuklukların genellikle metal dengesizliğe ile ilişkili, ama metaller LC rolü yalnızca kısmen anlaşılmaktadır. Akkreditivin morfolojik ve fonksiyonel çalışmalar insan patolojiler ve metaller katkısını daha iyi anlamak için ihtiyaç vardır. Fareler yaygın olarak kullanılan bir deneysel model, ancak fare LC küçük (~0.3 mm çap) ve sigara bir uzman için tanımlamak zor. Burada, biz fare beynindeki LC yerelleştirmek için adım adım bir immünhistokimya tabanlı protokol tanımlamak. Dopamin-β-hidroksilaz (DBH) ve alternatif olarak, tirozin hidroksilaz (TH), son derece LC ifade edilen her iki enzim immunohistokimyasal işaretleyicilerini beyin dilimler olarak kullanılır. LC içeren bölümler için bitişik bölümleri Histoloji morfolojik araştırmalar, metabolik test, hem de metal görüntüleme için de dahil olmak üzere daha fazla analiz, x-ışını Floresans mikroskobu (XFM) tarafından kullanılabilir.

Giriş

Locus coeruleus (LC) beyin sapı ve norepinefrin (NE) üretim1büyük bir sitenin önemli bir ülkedir. LC korteks, Hipokampus ve beyincik3 projeksiyonlar beyin2 boyunca gönderir ve sirkadiyen ritim4,5, dikkat ve bellek6dahil olmak üzere önemli fizyolojik süreçleri düzenler, 7, Bilişsel süreçler8ve duygu9,10stres. Disfonksiyon Akkreditivin Parkinson hastalığı12,13,14, Alzheimer hastalığı14, depresyon15 de dahil olmak üzere nörolojik ve nöropsikiyatrik bozukluklar11' de karıştığı olmuştur ,16,17, bipolar bozukluk18,19ve anksiyete20,21,22,23, 24. bu roller göz önüne alındığında, LC analizleri kendi işlev ve disfonksiyon eğitim için çok önemlidir.

Fareler fizyolojik ve Etyopatogenezi süreçleri çalışmaları için yaygın olarak kullanılır. Kendi küçük boyutu nedeniyle fareyi LC ~ 300 mikron, yapısı bulma zorluk için önde gelen bir ortalama çapındadır. Beyin kesit sırasında LC kolayca koronal veya sagittal bölümlerindeki özledim. Mevcut çalışmalar LC tanımlaması hayvanlarda açıklayan adım adım bir protokol sağlamıyorsa olmayan bir uzman1,25takip edebilirsiniz. Böylece, LC lokalizasyonu için rehberlik sunmak, biz çeşitli uygulamalar (şekil 1, Şekil 2, şekil 3) için fare beynindeki bu bölgeyi bulmak için geliştirdiğimiz bir protokol tanımlamak. Protokol dikkatle incelenmiş beyin kesit ve immunohistokimyasal olarak algılanmasını DBH26,27, ya da alternatif olarak TH24, son derece içinde LC28zenginleştirilmiş her iki enzim geçerlidir. LC immünhistokimya tarafından bulunan sonra bitişik beyin dilimleri için daha fazla çalışmalar, morfolojik ve metabolik analizleri, aynı zamanda x-ışını Floresans mikroskobu (XFM)29ile metal görüntüleme çalışmaları da dahil olmak üzere kullanılabilir. Bir örnek olarak bu Protokolü (şekil 3) XFM açıklar.

Protokol

Çalışmalar hayvanların Johns Hopkins Üniversitesi hayvan bakımı ve kullanımı (ACUC) iletişim kuralı numarası M017M385 tarafından onaylanmış.

1. beyin Dilimleme

  1. Hareketsiz için % 3 isoflurane uygulama tarafından fareler anestezi.
    1. Bir pamuk topağı isoflurane damlaları ile ıslatın ve bir 15 mL microcentrifuge tüpü yerleştirin. Hayvanın burun tüp içine yerleştirin ve isoflurane nefes sağlar. Anestezi derinliği için yanıt-e doğru ayak parmağı-çimdik eksikliği tarafından kontrol.
  2. Hayvan sırtında yerleştirin ve yoluyla onun kol ve bacaklar bir T iğne ile onun karın erişimine süre hareketsiz.
  3. Ekran alıntısını karın deriden yaparak hayvan Cerrahi makas ile kesme ve göğüs bölgesinde deri yoluyla kesti. Cilt T iğne kullanarak pin. Peritoneal membran Toraks kadar çiğnemek. Kalp, göğüs boşluğuna çatlama ve diyafram kesme maruz.
  4. Kan hayvan dışarı akışını sağlamak için sağ atrium kesti. Bir 10 mL şırınga ile 25'lik iğne sol ventrikül yerleştirin ve fosfat tamponlu tuz (PBS) ile 10 mL sıvı.
    Not: Bu çözüm sistemik dolaşım ve çıkış akış sağlar Sağ atrium sayesinde.
  5. 10 mL şırınga çıkarıp 60 mL şırınga bağlı 25 lik bir iğne yerleştirin. Buz soğuk %4 paraformaldehyde (PFA) 50 mL ile sol ventrikül arasında sıvı.
    1. % 10 PFA H2O çözümde sulandrarak ve nihai % 4 İngiltere'de yılın çözüm 4 ° C'de soğuk buz soğuk % 4 İngiltere'de yılın çözüm hazırlayın
  6. Fare başkanı yalıtmak ve beyin kafatasından kaldırın.
    1. Boynuna deriden kesilmiş ve kafatası ortaya çıkarmak için gözleri doğru kesti. Kafatası burnuna boyun ve o zaman diğer bir gözü çatlamak. Kafatası dışarı kabuğu ve tüm beyin tüketim.
  7. %4 beyinde kuluçkaya PFA 4 ° C'de 24 h için
  8. Beyin Forseps ile 25 mL % 30 Sükroz çözeltisi ile dolu bir 50 mL konik tüp içine aktarın. Beyin tüp altına batar kadar 48-72 saat için 4 ° C'de sakla.
  9. Bir yetişkin fare beyin dilimleyici ile beyin matris koronal orta (bregma in ~ 3 mm arka) aracılığıyla kesilmiş. Beyin içeren beyin bölümü tutma.
    Not: Bu iki beyin bölümde-korteks (kesme anterior) ve bir beyin sapı/beyincik (kesme arka) içeren bir içeren çoğu neden olur. Beyin sapı bölümü için aşağıdaki adımları kullanın.
  10. En uygun kesme sıcaklığı ile bileşik (Ekim); çevrili bir gömme kalıp altına yerleştirilir kesme yüzeyi ile beyin sapı bölüm katıştırma Katıştırılmış beyin-80 ° C dondurucu taşımak ve en az 12 h için-daha fazla kullanılmasını kadar dondurma.
  11. Cryostat kesme: gömme kalıp beyin Ekim cryostat; içeren yer cryostat cryostat olan için beyin blok sıcaklığını ayarlamak birkaç saat içinde kuluçkaya.
  12. Beyin içeren OCT blok duyurmak için gömme kalıp peel Away.
  13. Tıraş bıçağı, Ekim aşırı beyin dokunmadan blok yüzeyinden kaldırmak için kullanın.
  14. OCT blok beyin önüne doğru kesme yüzeyinin açığa cryostat, chuck bağlama.
  15. Beyin kesilmiş yüzeyine paralel olarak cryostat razorblades yönelik şekilde ayarlayın.
  16. Rostrally 100 µm bölümleri kesme medulla başlayan beyin kırpın.
  17. Serebellum ve beyin sapı sürekli bir dilim kesmek kadar rostrally kırpın. Dilimler, 50 µm kalınlık toplama başlar.
    Not: bir rostrally medulla kırpar gibi beyin ve beyincik iki ayrı bölümde kesecek. Rostral bölümlerde, beyin ve beyincik sonunda 4th ventrikül düzeyinde birleştirir. 4th ventrikül lateral kenarlarına doğru biçimli olduğunda, sonra serebellum ve beyin sapı bir sürekli dilim ortaya çıkar.
    1. Forseps ile OCT çevrili beyin dilim toplamak ve bir de PBS (şekil 2a) ile dolu bir 24-şey plaka yerleştirebilirsiniz. Serebellum ve aşağı olacaklar ~-5.52 mm bregma (Şekil 1b) posterior tanılmaktadır LC en önemli olacaktır.
      Not: bir kez beyincik tam kesitli ve artık ~-5.34 mm bregma (şekil 1 c) posterior, aşağı olacaklar çevreleyen LC en ön bölümü kaybolacaktır.

2. immünhistokimya dopamin β-hidroksilaz veya tirozin hidroksilaz (Şekil 2) için

  1. Gün 1
    1. Seçili dilimleri 5 min için üç kez PBS içinde yıkayın.
    2. Deterjan (PBSD) 4 ° C'de % 0.5 tamponlanmış fosfat serum içinde 24 h için permeabilize
      1. 125 µL deterjan PBS 25 ml seyreltik.
  2. 2. gün
    1. Dilimleri 5 min için üç kez yıkamak %0,5 PBSD.
    2. 1:500 %0,5 seyreltme birincil antikor, anti-DBH veya anti-TH 18 h için ekleyin PBSD 4 ° C'de
  3. 3. gün
    1. Dilimleri 10 min için üç kez yıkamak %0,5 PBSD.
    2. 1: 1000 %0,5 seyreltme istediğiniz ikincil antikor (488 eşek Anti-tavşan yeşil floresan için) eklemek için 16 h PBSD.
    3. Alüminyum ve yer 4 ° C'de 24 iyi plaka şal
    4. Dilimleri 5 min için üç kez yıkamak %0,5 PBSD.
    5. 5 dakika içinde PBS için yıkama.
    6. Dilimleri bir kalem fırça ile bir su kabı aktarın.
    7. Şarj edilmiş slaytlarda suda yüzen dilimleri bağlayın.
    8. Coverslip bölümleri hard-set montaj medya (olmadan DAPI) ile.
    9. Oda sıcaklığında 30 dk için bağlı beyin bölümleri kuru.
    10. Görüntü ayarları uygun ikincil antikor fluorophore dalga boyu sinyalini tespit etmek için confocal veya floresan mikroskop, beyin dilimleri.
    11. Mikroskop için beyin dilim odak düzlemi ayarlamak ve 10 X büyütme tek bir görüntü alır.
    12. Olası bir LC bölgenin beyin dilimi bulmak için kullandığı yöndür 4th ventrikül kullanın; beyincik ventrikül yer alır, pons ve beyin sapı30altında bulunur.
    13. LC bulmak için 4th ventrikül lateral kenarlarında odak; 4th ventrikül ve pons doğru puan kenarlarını LC kaynaklandığı / beyin bölgesi (şekil 2b, 2 c).
    14. Aşağıdaki görüntüleme ve yerelleştirme belirli beyin dilimleri içinde Akkreditivin depolamak 4 ° C'de beyin dilimler içeren slayt

3. beyin dilimleri içinde LC tespiti

  1. LC içeren beyin bölümü bulun, yukarıda açıklandığı gibi fare beyin dilim ve PBS bölümlerde toplamak için 24 iyi yemekler, şekil 2agösterildiği gibi dolu.
    1. Bir beyin bölümü LC uygun yerelleştirme için izin vermek için iyi başına yerleştirin.
  2. İmmunostained beyin başına olacak 48 beyin dilimleri toplam toplamak.
    Not: Tüm kuyu şekil 2a gösterildiği iki tabak beyin dilimleri bir hayvan içerir.
  3. Immunostain her üçüncü beşinci dilim DBH veya TH. Tercihen, immünhistokimya denetlesinler o bitişik olan bu beyin dilimleri gerçekleştirmek (yolu ile x-ışını Floresans mikroskobu, XFM) daha fazla.
    Not: Bu yordam son tahlil dilimleri içinde Akkreditivin tam yerelleştirme için izin verir (şekil 2a; sayılar kuyular arasında taşır).
  4. Merkezi ve LC veya kaba bir yaklaşım kenarı tam konumunu ihtiyaçları olup olmadığını immunostained örneğin, uygulamaya bağlı olan beyin dilim sayısını ayarlayın.
  5. İmmünhistokimya, her iki ifade 4th ventrikül (şekil 2b, 2 c) karakteristik bir desen ile LC içeren beyin dilimleri tespit. Büyütme ardışık beyin dilimleri LC DBH sinyal şekil 2B, 2eiçinde gösterilir; TH gösterildiği için bu lekeli LC büyütülmüş görüntü şekil 2f.
  6. Daha fazla çalışmalar - içeren bu LC bitişik bölümleri XFM için metal düzeyleri (şekil 3) ölçmek için bu durumda kullanın.
  7. XFM gerçekleştirmek için 10-30 µm (Kurulum) bağlı olarak ince koronal beyin dilimleri ile hangi onlar örnek tutucular monte edilebilir ve sinkrotron yansıma ince polimer film toplamak.
  8. Mağaza beyin dilimleri üzerinde hazırlanan polimer film XFM için oda sıcaklığında ince ve XFM gerçekleştirmek.

4. LC XFM üzerinden metal görüntüleme

  1. Yukarıda açıklandığı gibi örnek fare beyin dilim, LC belirlemek ve metal düzeylerinden LC içeren bu beyin dilimler XFM üzerinden ölçmek.
  2. Görüntü beamline 2-ID-E gelişmiş foton kaynak (Argonne Ulusal Laboratuvarı, Argonne Il), elemental dağıtımlarında.
  3. Kaydetmek veri 'anında'31daha önce açıklandığı gibi.
  4. Beyin dilimleri kullanarak program haritalar32,33LC içeren Elemental konsantrasyonlarda belirlemek.

Sonuçlar

Değişiklikleri (örneğin, Cu, Fe, Zn ve Mn) metal homeostazı kez LC34,35değişiklikler dahil olmak üzere nörolojik hastalıklarda gözlenir. Böylece, beyindeki metal düzeylerini belirleme hastalığı mekanizmaları anlamak için gereklidir. Açıklanan protokolü kullanılarak oluşturulan beyin bölümleri LC diğer metaller ve Cu seviyesini ölçmek ve onları LC dışındaki bölgelerde düzeylere karşılaştırmak i...

Tartışmalar

Düzgün örnek yönlendirme bu iletişim kuralı çok önemli bir adımdır. LC (beyincik ve aşağı olacaklar arasında sınır) bulmak için beyin dorsal yüzeyi anatomik özellikleri kullanmakta olduğunuz için bölümleri düzgün uyumlu önemlidir. Bu fare beyin dilimleyici matris beyin arızalı özen gerektirir. Anterior ve posteiror LC çekirdek eksik önlemek için daha fazla doku ~ 500 mikron kesme tavsiye ediyoruz. En yaygın hata LC tamamen eksik sonuçları çok az bölümleri azaltmak olduğunu. Böylece...

Açıklamalar

Hiçbiri.

Teşekkürler

Biz Abigael Muchenditsi fare koloni bakımı için teşekkür ederim. ABD Enerji Bakanlığı, bilim Office, Office temel Enerji Bilimler, sözleşme numarası altında tarafından desteklenen Argonne Ulusal Laboratuvarı Gelişmiş foton kaynak kullanımı: DE-AC02-06CH11357. Biz Olga Antipova ve Dr. Stefan Vogt kullanıcı desteği ve gelişmiş foton kaynağında yardım için teşekkür ederiz. Bu eser SL için Ulusal Sağlık Enstitüsü grant 2R01GM101502 tarafından finanse edildi.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
Adult mouse brain slicer matrixZivic InstrumentsBSMAS001-1
Anti-rabbit secondary antibody, Alexa Fluor 488 (source - donkey)Thermo Fisher ScientificA-21206
Charged glass slidesGenesee29-107
Confocal microscopeZeissLSM 800
CryostatMicrom GmbHHM 505E
Cryostat cutting bladesThermo Fisher ScientificMX35
Scissors Mini, 9.5cmAntech Diagnostcs503241
DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole)Sigma-AldrichD9542-10MG
Dopamine β-hydroxylase (DBH) antibody - inhouse production (source - rabbit)B. Eipper-
Dopamine β-hydroxylase (DBH) antibody - commercially availabe (source - rabbit)Cell Signaling8586
Falcon tubes, 50mlUSA Scientific339652
Forane (isofluorane)BaxterNDC 1019-360-60
Forceps Micro AdsonAntech Diagnostcs501245
Hardset mounting mediaEM sciences17984-24
MicroscopePascalLSM 5
Multi-well plates, 24 wellsThermo Fisher Scientific930186
Optimal cutting temperature compound (OCT)VWR/ tissue tech102094-106
Paraformaldehyde (PFA)/ formalin 10%Fisher ScientificSF98-4
Peel-A-Way disposable embedding moldsPolysciences Inc.18646A
Pencil brush
Phosphate buffered saline (PBS)Life Tech14190250
Razor bladesAmazonASIN: B000CMFJZ2
SpatulasAntech Diagnostcs14374
T pinsOffice Depot344615
The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates, Paxinos and Franklin, 3rd EditionAmazonISBN: 978-0123694607
Triton-X 100 (to prepare PBSD)Sigma-AldrichT8787
Tween 20Sigma-AldrichP7949-500ml
Tyrosine hydroxylase (TH) antibody (source - rabbit)EMD MilliporeAB152
Ultralene thin film for XRFSPEX Sample Prep3525
Wide-field fluorescent microscopeZeissAxio Zoom.V16

Referanslar

  1. Robertson, S. D., Plummer, N. W., de Marchena, J., Jensen, P. Developmental origins of central norepinephrine neuron diversity. Nature neuroscience. 16, 1016-1023 (2013).
  2. Kobayashi, R. M., Palkovits, M., Jacobowitz, D. M., Kopin, I. J. Biochemical mapping of the noradrenergic projection from the locus coeruleus. A model for studies of brain neuronal pathways. Neurology. 25, 223-233 (1975).
  3. Olson, L., Fuxe, K. On the projections from the locus coeruleus noradrealine neurons: the cerebellar innervation. Brain research. 28, 165-171 (1971).
  4. Costa, A., Castro-Zaballa, S., Lagos, P., Chase, M. H., Torterolo, P. Distribution of MCH-containing fibers in the feline brainstem: Relevance for REM sleep regulation. Peptides. , 50-61 (2018).
  5. Semba, J., Toru, M., Mataga, N. Twenty-four hour rhythms of norepinephrine and serotonin in nucleus suprachiasmaticus, raphe nuclei, and locus coeruleus in the rat. Sleep. 7, 211-218 (1984).
  6. Takeuchi, T., et al. Locus coeruleus and dopaminergic consolidation of everyday memory. Nature. 537, 357-362 (2016).
  7. Korf, J., Aghajanian, G. K., Roth, R. H. Increased turnover of norepinephrine in the rat cerebral cortex during stress: role of the locus coeruleus. Neuropharmacology. 12, 933-938 (1973).
  8. Sara, S. J., Segal, M. Plasticity of sensory responses of locus coeruleus neurons in the behaving rat: implications for cognition. Progress in brain research. 88, 571-585 (1991).
  9. Markevich, V. A., Voronin, L. L. Synaptic reactions of sensomotor cortex neurons to stimulation of emotionally significant brain structures]. Zhurnal vysshei nervnoi deiatelnosti imeni I P Pavlova. 29, 1248-1257 (1979).
  10. File, S. E., Deakin, J. F., Longden, A., Crow, T. J. An investigation of the role of the locus coeruleus in anxiety and agonistic behaviour. Brain research. 169, 411-420 (1979).
  11. Pamphlett, R. Uptake of environmental toxicants by the locus ceruleus: a potential trigger for neurodegenerative, demyelinating and psychiatric disorders. Medical hypotheses. 82, 97-104 (2014).
  12. Wang, J., et al. Neuromelanin-sensitive magnetic resonance imaging features of the substantia nigra and locus coeruleus in de novo Parkinson's disease and its phenotypes. European journal of neurology. 25, 949-973 (2018).
  13. Oliveira, L. M., Tuppy, M., Moreira, T. S., Takakura, A. C. Role of the locus coeruleus catecholaminergic neurons in the chemosensory control of breathing in a Parkinson's disease model. Experimental neurology. , 172-180 (2017).
  14. Zarow, C., Lyness, S. A., Mortimer, J. A., Chui, H. C. Neuronal loss is greater in the locus coeruleus than nucleus basalis and substantia nigra in Alzheimer and Parkinson diseases. Archives of neurology. 60, 337-341 (2003).
  15. Chandley, M. J., et al. Gene expression deficits in pontine locus coeruleus astrocytes in men with major depressive disorder. Journal of psychiatry & neuroscience : JPN. 38, 276-284 (2013).
  16. Bernard, R., et al. Altered expression of glutamate signaling, growth factor, and glia genes in the locus coeruleus of patients with major depression. Molecular psychiatry. 16, 634-646 (2011).
  17. Gos, T., et al. Tyrosine hydroxylase immunoreactivity in the locus coeruleus is elevated in violent suicidal depressive patients. European archives of psychiatry and clinical neuroscience. 258, 513-520 (2008).
  18. Bielau, H., et al. Immunohistochemical evidence for impaired nitric oxide signaling of the locus coeruleus in bipolar disorder. Brain research. 1459, 91-99 (2012).
  19. Wiste, A. K., Arango, V., Ellis, S. P., Mann, J. J., Underwood, M. D. Norepinephrine and serotonin imbalance in the locus coeruleus in bipolar disorder. Bipolar disorders. 10, 349-359 (2008).
  20. Borodovitsyna, O., Flamini, M. D., Chandler, D. J. Acute Stress Persistently Alters Locus Coeruleus Function and Anxiety-like Behavior in Adolescent Rats. Neuroscience. 373, 7-19 (2018).
  21. Hirschberg, S., Li, Y., Randall, A., Kremer, E. J., Pickering, A. E. Functional dichotomy in spinal- vs prefrontal-projecting locus coeruleus modules splits descending noradrenergic analgesia from ascending aversion and anxiety in rats. eLife. 6, (2017).
  22. McCall, J. G., et al. CRH Engagement of the Locus Coeruleus Noradrenergic System Mediates Stress-Induced Anxiety. Neuron. 87, 605-620 (2015).
  23. Borges, G. P., Mico, J. A., Neto, F. L., Berrocoso, E. Corticotropin-Releasing Factor Mediates Pain-Induced Anxiety through the ERK1/2 Signaling Cascade in Locus Coeruleus Neurons. The international journal of neuropsychopharmacology. 18, (2015).
  24. Simone, J., et al. Ethinyl estradiol and levonorgestrel alter cognition and anxiety in rats concurrent with a decrease in tyrosine hydroxylase expression in the locus coeruleus and brain-derived neurotrophic factor expression in the hippocampus. Psychoneuroendocrinology. 62, 265-278 (2015).
  25. Carter, M. E., et al. Tuning arousal with optogenetic modulation of locus coeruleus neurons. Nature. 13, 1526-1533 (2010).
  26. Fan, Y., et al. Corticosterone administration up-regulated expression of norepinephrine transporter and dopamine beta-hydroxylase in rat locus coeruleus and its terminal regions. Journal of neurochemistry. 128, 445-458 (2014).
  27. Xiao, T., et al. Copper regulates rest-activity cycles through the locus coeruleus-norepinephrine system. Nature chemical biology. 14, 655-663 (2018).
  28. Amaral, D. G., Sinnamon, H. M. The locus coeruleus: neurobiology of a central noradrenergic nucleus. Progress in neurobiology. 9, 147-196 (1977).
  29. Ralle, M., et al. Disease at a Single Cell Level: intracellular copper trafficking activates compartment-specific responses in hepatocytes. The Journal of Biological Chemistry. 285, 30875-30883 (2010).
  30. Paxinos, G., Franklin, K. B. J. . The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates. , (2013).
  31. Bonnemaison, M. L., et al. Copper, zinc and calcium: imaging and quantification in anterior pituitary secretory granules. Metallomics : integrated biometal science. 8, 1012-1022 (2016).
  32. Nietzold, T., et al. Quantifying X-Ray Fluorescence Data Using MAPS. Journal of visualized experiments : JoVE. , (2018).
  33. Vogt, S. MAPS: A set of software tools for analysis and visualization of 3D X-ray fluorescence data sets. J. Phys. IV France. 104, 635-638 (2003).
  34. Davies, K. M., et al. Copper pathology in vulnerable brain regions in Parkinson's disease. Neurobiology of aging. 35, 858-866 (2014).
  35. Davies, K. M., Mercer, J. F., Chen, N., Double, K. L. Copper dyshomoeostasis in Parkinson's disease: implications for pathogenesis and indications for novel therapeutics. Clinical science. 130, 565-574 (2016).
  36. James, S. A., et al. Quantitative comparison of preparation methodologies for X-ray fluorescence microscopy of brain tissue. Analytical and bioanalytical chemistry. , 853-864 (2011).

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

Neurosciencesay 145beyinlocus coeruleusmetallerimm nhistokimyax n Floresans mikroskobunorepinefrinbak rDBHTHATP7AATP7B

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır