Bir plaka rekabet tahlil olarak hastalık bastırma hızlı bir ön değerlendirme

Özet

Sunulan belirli bir kompost bakteri ve mantar büyüme Rhizoctonia solanibastırmak bulunma olasılığı olup olmadığını belirlemek bir plaka rekabet tahlil için bir protokoldür.

Özet

Geliştirmek ve hastalık süpresif yetenek soilborne mantar Rhizoctonia solanikarşı belirli bir kompost algılamak için bir basit, uygun fiyatlı ve etkili bioassay en iyi duruma getirmek için hedefi oldu. R. solani bitki ana bilgisayarlar dünya çapında geniş bir patojen var. Mantar ve topraklarda bir cimri hayatta basit su agar medyada hızla büyür. Plaka tahlil onların yetenek R. solanibüyümesini yavaşlatmak kompost karşılaştırmak için hızlı bir yöntemdir. Tahlil de Alternaria erken korumalılar, Fusarium solgunluğu, Phytophthora kök çürüklüğü ve Pythium kök çürüklüğü gibi toprakta saprophytes olarak hayatta diğer soilborne fungal patojenlerin bastırılması ile karşılıklı olarak ilişkilendirir.

Giriş

Rhizoctonia temsil eden mantarlar, hangi Thanatephorus cucumeris (Frank) Donk, geniş bir kompleks (Galatasaray Rhizoctonia solani Kühn =) olan kök çürüklüğü ve sönümleme kapalı¹neden olan patojen. Rhizoctonia solani agresif bir patojen ve olumsuz çevre koşulları¹altında sclerotia olarak yaşayabilir bir cimri olduğunu. Sonuç olarak, bu bir genel dağıtım ve hastalık çeşitli bitki ana Solanaceae, baklagiller, bitki ve ciddi ekonomik kayıplar sonucu turpgiller gibi birine neden olabilir.

Kompost biyolojik maddeler, bazı bitki patojenleri²için liman kapasitesine sahiptir. Ancak, tüm kompost birbirine ne de onlar tüm patojenler etkiler benzer şekilde³. Ahşap tabanlı karbon saman veya saman-karbon kompost tabanlı daha yüksek lignin selüloz oranlarına sahiptir. R. solani hazır karbon saman bulundu tercih ediyor. Buna ek olarak, karbon hazır daha az olduğunda Trichoderma spp. gibi biyolojik mücadele mantarlar daha etkilidir. Faydalı mantar ve bakteri kompost içine bitki hastalık ile rekabet, husumet veya bitki büyüme³düzenleyen gizle. Önerilen tahlil öncelikle üretim antibiyotikler, ecoenzymes veya patojen için zararlıdır şelatörlerin yarattığı husumet algılar.

Bitki biyoanalizler kompost lehine veya bitki büyüme⁴caydırmak olup olmadığını belirlemek için bir altın standarttır. Ancak, çoğu bitki biyoanalizler ay için zaman alıcı (hafta) hangi-ebilmek var olmak istenen ve bitki kök sistemleri şiddetini ölçmek için kökleri ile ayıklamak için daha fazla emek gerektiren daha uzun tamamlamak için. Nispeten sağlam, ama daha hızlı (gün) deneyleri kalite kontrol programları için ideal olacaktır. Bu kağıt amacı kompost süpresif potansiyel tahmin etmek için nispeten hızlı ve doğru bir test göstermektir. Yöntem Alfano et al. sonra desenli ⁵ iki istisna dışında kompost özleri seyreltilmiş ve su agar patates dekstroz agar (PDA) yerine kullanılmıştır. PDA bakteri ve kültür⁶kontamine diğer mantar büyüme terfi ise R. solani basit su agar medyada hızla büyür.

Bu plaka tahlil toprakta R. solani⁷, Alternaria erken korumalılar, Fusarium solgunluğu, Phytophthora kök çürüklüğü ve Pythium kök çürüklüğü gibi saprophytes hayatta bitki patojenleri bir dizi uygulandığı bastırma bir göstergesi olarak hizmet vermektedir. Plaka rekabet tahlil bir toprak patojenlerin biyolojik mücadele etmeni hizmet mikroplar toplulukların içeren için kompost ürün yelpazesi ekrana yararlıdır. Tahlil hastalık bastırma ticari kompost ürünler^6,8' en tutarlı göstergeleri biriydi. Ürünler kendi varyasyon tarifi, olgunluk ve üretim süreci için seçilmiştir.

Protokol

1. önceden hazırlamak

1. Ana mantar kültürü (test organizma)
   1. Amerikan tipi kültür Collection, Mikrobiyoloji koleksiyonu⁹, onun teleomorph Thanatephorus cucumeris (Frank) (ATCC 10154) veya MYA 4031 tarafından sipariş.
   2. Alternatif olarak: yerel yalıtır yazarlar tarafından yapılan olarak toplamak. Kırmızı turp (Raphanus sativus) fidan iyi bir yem bitkisi olarak iş; toprak sönümleme-off veya kök çürüklüğü R. solanitarafından neden olduğu bir geçmişi olduğu bilinen bir konumdan toplamak. Toprak tohumları ekmek ve fidan 3-4 haftalık olduğunda kök lezyon yalıtır.
      1. Fidan topraktan çıkarmak ve musluk suyuyla durulayın. Yaprak ve kök (Şekil 1) arasında hypocotyl bölgedeki kahverengi doku arayın.
      2. 1 cm kesimlerde hypocotyl veya kök kahverengi bir renk varsa kesmek için tek ucu keskin jilet kullanın. Alev sterilize forseps % 10 çözüm için 1 dakika, 10 s durulama steril su ardından ev çamaşır suyu segmentlerinde daldırma için kullanın.
         Not: Üst ve alt kısımlarında steril Petri kabına yararlı için bu adımı kapsayıcılardır.
      3. Bitki aktarmak için alev sterilize kullanım forseps pat kuru ve Petri kabına su agar (1 L 15 g) ile yüzeyi yerleştirmek için bir kağıt havlu iç parçaları.
      4. Kapaklı plastik bir kap içinde Petri kabına yerleştirin ve oda sıcaklığında (yaklaşık 20 ° C) kuluçkaya. Kapsayıcı % 10 çamaşır suyu ya da % 75 etanol ile iç silin ve çanak eklemeden önce kuru hava sağlar.
      5. Yalıtır mısır yemek agar en az bir ortam üzerinde uzun süreli depolama (1 L 17 g) yatık (5 ° C'de) unutmayın.

Şekil 1: hastalık belirtileri. R. solani içeren toprak düzensiz çimlenme ve kuruluş (solda) ile sonuçlanır. Belirtiler turp fidan üzerinde hypocotyl (sağda), kahverengi lezyonlar olarak ortaya çıkar. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

2. Patates dekstroz agar tabak (1 L 39 g) inoculum bu plaka tahlil için kullanın.
   1. Bir kızı kültür Rhizoctonia kültür patates dekstroz agar bir tarih oluşturmak veya iki gün önce tahlil, bu sigorta için de tahlil önce kültür plaka üzerinde kurulmuştur. Kızı kültür küçük bir parça (10 mm çap) R. solani ana kültüründen patates dekstroz agar (Şekil 2) taze bir tabak merkezine transfer ederek başlayın.
      Not: bir laminar akış mahallede iş veya bir laboratuvar tezgah bulaşma riskini en aza indirmek için % 10 çamaşır suyu ya da % 75 etanol ile aşağı silin.
3. Otoklav 25 mL test tüpleri ile 10 mL aliquots distile su (2 x sayısı örnekleri).

2. Test için örnek hazırlanması

1. İki bağımsız 0.5 g örnek her kompost test örneği 10 mL 25 mL test tüpleri autoclaved su ekleyin. Test tüpleri gecede sallamak.
   1. Test tüpleri benzersiz örnek numaraları ve her üyesi çifti (başvuru) veya B (örnek) olarak etiketleyin.
2. 24 saat sonra 90 mL distile su içinde iki 125 mLconical şişeler için düz agar 1.5 g ekleyin.
3. Otoklav agar ve her çifti yavaş egzoz ayarı 20 dk için A örneği ile her iki konik şişeler.
4. Denge (yaklaşık 30 dk) ulaşana kadar basınçlı kap sonra konik şişeler agar ile 45 ° C su banyosu yerleştirin. Herhangi bir örnek sprey su banyosunda 45 ° C'ye serin kadar koymak değil

Şekil 2: illüstrasyon Protokolü'nün. R. solani fişler Petri yemekler üzerinde kompost su özü içeren yerleştirilir. Mycelial büyüme çapını çözünürlük ve kontrast geliştirmek için stereo mikroskop yardımıyla 1-2 gün sonra ölçülür. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız.

5. A örnek (autoclaved başvuru) kompost Bulamaç A agar şişeye erimiş agar dökün. Girdap agar kompost dağıtmak için.
6. B örnek (canlı örnek) kompost Bulamaç B agar şişeye erimiş agar dökün. Girdap agar kompost dağıtmak için.
7. İçine 100 mm çapında olan beş plastik Petri yemekler her şişeyi karışımı dökün.
8. Agar sertleşir plakaları serin gecede izin.

3. eklemek Rhizoctonia Challenge

1. Aseptik teknik kullanarak, R. solani eşit büyüklükte parçalar örnek ağar kaplamalar her çifti için transfer (3-5 mm corkborer de eşit büyüklükte parçalar oluşturmak için çalışır). Koloni adet miselyum aktif büyüyen sigorta ettirmeleri koloni dış kenar boşluğunda almak.
   Not: bir laminar akış mahallede iş veya bir laboratuvar tezgah % 10 çamaşır suyu ya da % 70ini etanol ile aşağı silin.
2. Plakayı oda sıcaklığında 1-2 koloni büyüme A tabak hakkında yarı yol kenarına ulaşıncaya kadar günlerce kuluçkaya.

4. ölçü R. solani büyüme

1. Stereo mikroskop ile iletilen aydınlatma kullanarak açık düz cetvel ile miselyum her plaka yakın 1 mm yarıçapında ölçmek.
   Not: Eğik veya koyu alan aydınlatma görmek ve şeffaf hif ölçmek kolaylaştırır. Bu noktada, kompost süpresif ise inhibisyon bölgeleri kompost parçaları B plaka çevresinde görünür hale gelir.
2. RADIUS plaka başına üç yerde kaydetmek ve temsili bir ölçütü üç ortalaması hesaplamak.
3. Demek--dan A tabak B plakaların çıkarma. Eğer B < daha sonra burada R. solani patojen süpresif B plakaları mikroplar vardır.
4. Ortalama RADIUS Challenge birimler göreli bastırma bir oranı, mm miselyum günlük olarak ifade etmek için gün sayısı bölün.

Sonuçlar

Bitmiş kompost istikrarlı ve Olgun, iki o güvenli bir şekilde paketlenmiş taşınan ve sık sık birbirinin yerine geçebilir, kullanılan terimler ve olumsuz etkilere neden sırasında son kullanım⁴. İstikrar ayrışma bir direnci ve genellikle mikrobiyal aktivite endeksi kullanılarak belirlenir. Genel önlemler mikrobiyal solunum kompost istikrar şart değil hastalık bastırma bir saldırgan patojen ve cimri R. solani^...

Tartışmalar

Biliyoruz önceki araştırma, belirli kompost R. solani bastırmak etkili ve baskılayıcı etkileri kompost içinde yaşayan mikroplar nedeniyle değil kompost^6,8abiyotik özellikleri vardır. Media¹⁰karbon kimya etkilediğinden ısıyla kullanımı microbiota ' öldürmeye ' aracı olarak eleştirilmiştir. Isıyla Whatman No 1 kağıt üzerinden vakum filtrasyonu için kullanımı ile karşılaştırıldığında. Ne süzülm?...

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
autoclavable narrow-neck glass conical flask	Fisher Scientific	10-040D	125-mL
autoclavable glass testtubes	Fisher Scientific	14-925J	25-mL
dehydrated granulated agar	Fisher Scientific	DF0145-17-0	500 g quantity
heat resistant gloves	Fisher Scientific	MEMGG1314WL	several brands available
Parafilm (strips of 2-3 cm wide)	Fisher Scientific	PM992 13-374-16	5 or 10 cm widths work
disposable polystyrene petri dishes	Fisher Scientific	R80116	comes in sleeves of 20/ea or cases of 500
dehydrated potato dextrose agar	Fisher Scientific	DF0013-15-8	comes in quantities of 100, 500 and 2000 grams
benchtop reciprocal shaker	Thomas Scientific	1227Y31	other models will work
water bath	ThermoScientific	S37363	5L general purpose
clear ruler, flat, at least 10 cm	Any		use metric rule
ATCC culture	American Type Culture Collection	ATCC 10154	teleomorph Thanatephorus cucumeris (Frank) (ATCC 10154) or MYA 4031;
lab tape	Fisher Scientific	15935	autoclavable and removable, 1" wide preferred
water resistant marker	office or scientific supply	Sharpie fine tip	write sample number on tape