Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.
Method Article
Ahtapotların benzersiz fizyolojik ve anatomik yapılarını anlamak biyomedikal araştırmaları büyük ölçüde etkileyebilir. Bu kılavuz, bu türe uyum sağlamak için bir deniz ortamının nasıl kurulup sürdürüleceğizlerini gösterir ve ahtapotun sinir sistemi anatomisini ve işlevini görselleştirmek için son teknoloji görüntüleme ve analitik yaklaşımları içerir.
Biyomedikal araştırmalardaki birçok gelişme, farklı türlerdeki belirli işlevleri destekleyen anatomik ve hücresel mekanizmaların keşfedilmelerinden ilham alınmıştır. Ahtapot, bilim insanlarına nörobilim, robotik, rejeneratif tıp ve protez alanları hakkında yeni bilgiler veren bu olağanüstü hayvanlardan biridir. Bu sefalopod türüyle yapılan araştırmalar, projenin başarısı için kritik öneme sahip ahtapot ve ekosistemi için karmaşık tesislerin ve yoğun bakımın kurulumunu gerektirir. Bu sistem, hayvan için güvenli ve temiz bir ortam sağlamak için birden fazla mekanik ve biyolojik filtreleme sistemi gerektirir. Kontrol sistemi ile birlikte, tesisin uzun vadede etkin bir şekilde çalışması için özel rutin bakım ve temizlik gereklidir. Tankın manzarasını değiştirerek, çeşitli avları birleştirerek ve üzerinde çalışmaları için zorlu görevler sunarak bu akıllı hayvanlara zenginleştirilmiş bir ortam sağlamaları önerilir. Sonuçlarımız arasında MRG ve tüm vücut otoflüoresans görüntülemenin yanı sıra sinir sistemini daha iyi anlamak için davranışsal çalışmalar bulunmaktadır. Ahtapotlar, biyomedikal araştırmaların birçok alanını etkileyebilecek benzersiz fizyolojiye sahiptir. Onlara sürdürülebilir bir ekosistem sağlamak, farklı yeteneklerini ortaya çıkarmanın ilk önemli adımıdır.
Biyomedikal araştırma ve biyomedikal mühendisliğindeki yeni kavramlar genellikle biyolojik türlerin çevresel ve fizyolojik koşulları ve zorlukları ele almak için sahip oldukları belirli stratejileri belirlemekle ilham almaktadır. Örneğin, ateşböceklerindeki floresan özelliklerini anlamak, diğer model organizmalarda hücresel aktiviteyi rapor edebilecek yeni floresan sensörlerin geliştirilmesine yol açmıştır1; alglerde ışıkla aktive edilen iyon kanallarının tanımlanması hücresel ve zamansal spesifik ışık bazlı-nöromodülasyonun gelişmesine yol açmıştır2,3,4,5; Dünya'nın manyetik alanına göre gezinen cam yayın balığındaki proteinlerin keşfedilmesi manyetik tabanlı nöromodülasyonun gelişmesine yol açmıştır6,7,8,9,10,11; Aplysia'daki sifon refleksini anlamak, davranışın hücresel temelini anlamada etkili olmuştur12,13,14.
Araştırmacılar, geleneksel olmayan laboratuvar türlerinin sahip olduğu fizyolojik işlevler üzerindeki benzersiz güçlü yönlerden ve yeni bakış açılarından yararlanarak mevcut biyomühendislik ve filogenetik araç kutusunu genişletmeye devam ediyor. Federal kurumlar, çeşitli türler üzerinde gerçekleştirilen yeni çalışmaları finanse ederek bu çalışma çizgilerini desteklemeye başlıyorlar.
Eşsiz anatomi ve yenilenme yeteneklerine sahip bir hayvan cinsinin yanı sıra her bir kolunun adaptif kontrolü, büyüleyici biyologlar ve mühendisler ve toplumun her kesiminden büyüleyici kitleler Ahtapot17'dir. Nitekim, ahtapotun fizyolojisi ve davranışının birçok yönü son on yıllarda incelenmiştir15,16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26 . Bununla birlikte, moleküler ve evrimsel biyoloji, robotik, hareket kaydı, görüntüleme, makine öğrenimi ve elektrofizyolojideki son gelişmeler ahtapot fizyolojisi ve davranışı ile ilgili keşifleri hızlandırır ve bunları yenilikçi biyomühendislik stratejilerine çevirir27,28,29,30,31,32,33,34,35 ,36,37,38,39.
Burada, farklı geçmişlerden, bilimsel ilgi alanlarından ve hedeflerden bilim adamları ve mühendisler için ilgi ve alaka düzeyi olacak ahtapot hayvancılığının nasıl kurulacağını ve sürdürüleceğini açıklıyoruz. Bununla birlikte, sonuçlarımız ahtapotların nörobilim ve nöromühendislik araştırmalarında uygulanmasına odaklanmaktadır. Ahtapot, merkezi beyinde 45 milyon nöron, optik loblarda 180 milyon nöron ve sekiz eksenel kordon ve periferik gangliyonda ek 350 milyon nöron ile oldukça gelişmiş bir sinir sistemine sahiptir; karşılaştırıldığında, bir köpek benzer sayıda nörona ve bir kediye sadece yarısına sahiptir40. Omurgalı sinir sisteminin aksine, ahtapotun beynindeki milyonlarca nöronun kolunun eksenel kordonlarındaki milyonlarca nörona bağlayan sadece 32K efferent ve 140K afferent lifleri vardır40,41,42. Bu nispeten az sayıda birbirine bağlı lif, ahtapotların sahip olduğu benzersiz dağıtılmış nöronal kontrolü vurgulayarak, motor programlarının yürütülmesine ilişkin ayrıntıların çoğunun eksenel kordonun kendisinde gerçekleştirildiğini göstermektedir. Ahtapotun kolları, kabın içinde olsalar bile kavanoz kapaklarını açma gibi manipülasyon becerilerini sağlayan olağanüstü ince motor kontrolüne sahiptir. Bu son derece gelişmiş prehensile motor yeteneği Cephalopods sınıfına özgüdür (ahtapot, mürekkep balığı ve kalamar)43.
Gerçekten de, yüz milyonlarca yıllık evrim boyunca ahtapot, bilimsel ve mühendislik alanlarında yeni gelişim ve ilerlemeye ilham veren olağanüstü ve sofistike bir genom ve fizyolojik sistem43.44 geliştirmiştir. Örneğin, ahtapotun emicilerinin anatomik yapısına dayanan suya dayanıklı bir yapışkan yama ıslak ve kuru yüzeylere yapışabilir45; ahtapotun kamuflaj derisinden esinlenen sentetik bir kamuflaj malzemesi, düz, 2D bir yüzeyi tümsekler ve çukurlarla üç boyutlu bir yüzeye dönüştürebilir46. Gelecekte vücudun içinde cerrahi aletler olarak hizmet verebilecek minyatür yumuşak ve otonom robotlar (yani Octobots); ve tank benzeri bir robot48'e bağlı bir kol (yani OctoArm) da geliştirilmiştir. Biyomedikal araştırmalarda ahtapotların birçok türü kullanılır, örneğin Ahtapot vulgaris, Ahtapot sinensis, Ahtapot variabilis ve Ahtapot bimaküloidleri (O. bimaküloidler); O. vulgaris ve O. bimaculoides en yaygın 34,49,50'dir. Farklı ahtapot genomlarının son dizilimi bu cinsi özel olarak ilgi çekici kılmaktadır ve ahtapot araştırmalarında yeni sınırlar açmaktadır34,43,51,52.
Kurulumumuzda kullanılan bimaküloidler, ilk olarak 1949'da keşfedilen ve Orta Kaliforniya'dan Baja California yarımadasının güneyine kadar Kuzeydoğu Pasifik kıyılarındaki sığ sularda bulunabilen orta büyüklükte bir ahtapot türüdür17. Gözlerinin altındaki mantındaki sahte göz lekeleri tarafından tanınabilir. Dev Pasifik Ahtapotu (Enteroctopus dofleini) ve Common Octopus (O. vulgaris) ile karşılaştırıldığında, Kaliforniya İki Noktalı Ahtapot (O. bimaküloidler) nispeten küçüktür, birkaç santimetreden daha küçük başlar ve bir çocuk olarak hızlı büyür. Bir laboratuvarda yükseltildiğinde, yetişkin mantle boyutu ortalama 100 cm'ye kadar büyüyebilir ve 800 g53,54 ağırlığa kadar çıkabilir. Ahtapotlar ilk 200 gün içinde hızlı bir büyüme dönemine sahiptir; O zamana kadar yetişkin olarak kabul edilirler ve hayatlarının geri kalanında büyümeye devam ederler55,56,57. Ahtapotlar yamyam olabilir, özellikle her iki cinsiyet de bir tank içinde bir araya geldiğinde; bu nedenle, ayrı tanklarda ayrı ayrı barındırılmaları gerekir58.
Tüm hayvan çalışmaları Michigan Eyalet Üniversitesi Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (IACUC) tarafından onaylandı.
1. Ahtapot tank ekipmanı kurulumu
Şekil 1: Ahtapot tankı kurulumu. Su girişi ve çıkışı (a). Her biri 1,22 m x 0,3 m (b) alana sahip üç ahtapot tankı. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: Kartem sistemi. Kartem sisteminin yan görünümü (a). Kartem sisteminin üst görünümü (b). Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 3: Tankın ve çevre kontrol ünitelerin altında kartperte filtreleme sistemine sahip akvaryum. Yeşil oklar sistemden geçen su akışının yönünü gösterir. Soğutma için birinci bölümden ikiye ve ağır biyolojik maddeyi daha hafif maddeden ayırmak için üçe akan su. Ağır atıklar alta ve bölüm beşe doğru yüzerken, daha küçük biyolojik madde bölüm 4 içindeki çorap filtresine akar. Su, beş numaralı bölümün altındaki dört bölümden akarak, su içindeki kalan atıkları gidermek için protein sıyırıcısına altıda girer. Alg kutusu, atıkları, amonyağı ve nitratları parçalamak ve suyu oksijene bağlamak için mikroorganizmalar içerir. Sistemin son bölümünde, tanka geri pompalanmadan önce buharlaşmayı hesaba katmak için daha fazla su eklenir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
2. Depolama tankları
3. Gıda tankı kurulumu
4. Ahtapotun tanka girişi
5. Günlük bakım
6. Haftalık sanitasyon
Şekil 4: Keman yengeçleri için tank (Minuca pugnax). Tankın tabanı kuru yatak için, diğer yarısı ise 2 cm sığ tuzlu su için belirlenmiştir. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 5: Hayalet karides tankı (Palaemonetes paludosus). Karides tankındaki kayalar, karideslerin saklanması ve erimesinin yanı sıra mikroorganizmaların büyümesi için yerler sağlar. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
7. hasta hayvanların bakımı
8. Ahtapot anestezisi
9. Ahtapot ötenazisi
10. O. bimaküloidlerin davranışı
11. Ahtapot MRI
NOT: Daha önce ahtapotun retinasında uyandırılan fonksiyonel MRG yanıtları uyuşturulmuş hayvanlarda ölçüldü70. Burada, ahtapotun sinir sisteminin saatlerce tarama gerektiren ultra yüksek uzamsal çözünürlüklü MR'ını elde ettik. Böylece, bu ötenazili bir O. bimaküloidlerde gerçekleştirildi.
12. Kriyo-floresan tomografi (CFT) görüntüleme
Çalışmalarımızdaki tüm hayvanlar vahşi doğadan elde edildi ve bu nedenle tam yaşları belirlenemedi ve laboratuvarda kalmaları değişkendi. Ahtapot durumu her gün gözlendi. Parazitler, bakteriler, cilt hasarı veya anormal davranışlar görmedik. Hayvanların ortalama ağırlığı 170.38 +/- 77.25 g idi. Her hayvan kendi 40 galonluk tanklarında yaşıyordu. Bir hafta boyunca bir tank için kaydedilen parametreler için ortalama ± standart sapma şunlardı: pH 8.4 ± 0.0, tuzluluk 34.06 ± 0.61 ppt, sıca...
Sistem Kurulumu:
Akvaryum ekosistemi, suyu filtrelemek ve oksijenleştirmek için hem mekanik hem de biyolojik yöntemlerin uygulandığı şekilde geliştirilmiştir. Sistemin filtreleme elemanları, azot ve oksijen seviyelerini korumak için çorap filtreleri, protein sıyırıcıları ve düzenli temizlik kullanır. Daha da önemlisi, tehlikeli azotlu bileşikleri ve diğer biyolojik atıkları tüketmek ve fotosentez işlemleriyle suyu havalamak için deniz mikroorganizmalarına da güveniyoruz. E...
Tüm yazarlar çıkar çatışması olmadığını beyan eder.
Bu çalışma NIH UF1NS115817 (G.P.) tarafından desteklendi. G.P., NIH'nin R01NS072171 ve R01NS098231 hibeleri tarafından kısmen desteklenmektedir. Emit Imaging'den Patrick Zakrzewki ve Mohammed Farhoud'a Xerra Görüntüleme Platformu'ndaki verilerin toplanması ve görselleştirilmesindeki yardım ve destekleri için teşekkür ederiz. MSU'nun Bruker Biospin ile bir araştırma anlaşması var.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
1-3/4 in. Drill Bit | Home Depot | 204074205 | Glass cutting tool Part number:1 |
1" flow sensors | Neptune Systems | Local Dealer | Pipe with sensor to measure water flow Part number:2 |
1" Slip Bulkhead Strainer | Bulk Reef Supply | 207113 | Strainer for water leaving tank Part number:3 |
10 gallon tank | Pruss Pets | Local Dealer | Fiddler crab holding tank Part number:4 |
4 inch X 12 inch 200 Micron Nylon Monofiliment Mesh Filter Sock w/ Plastic Ring | AQUAMAXX | UJ41171 | Filter for large organic matter in sump Part number:5 |
40 gallon aquarium | Pruss Pets | Local Dealer | 4 Food aquarium tanks Part number:6 |
60g poly tanks - rectangle | Pruss Pets | Local Dealer | 2 Water Storage (salt and freshwater) Part number:7 |
Active Aqua 1/10th HP Hydroponic or Aquarium Chiller 2018 Model | WayWe | 719574198463 | For cooling water continuously Part number:8 |
ALAZCO 2 Soft-Grip Handle Heavy-Duty Tile Grout Brush | ALAZCO | B06W2FT5V5 | Tank Cleaning Part number:9 |
Ammonia Testing Kit | Aquarium Pharmaceuticals | 33D | For water testing Part number:10 |
Apex system WiFi | Neptune Systems | Local Dealer | System connection for off site monitoring Part number:11 |
API Aquarium Test Kit | Amazon | B001EUE808 | For water testing Part number:12 |
API Copper Test Kit | Amazon | B0006JDWH8 | For water testing Part number:13 |
Aqua Ultraviolet Classic UV 25 Watt Series Units | Aqua Ultraviolet | A00028 | For removing bacteria leaving sump system Part number:14 |
AquaClear 50 Foam Filter Inserts, 3 pack | Aquaclear | A1394 | Food Tank Carbon Filter Inserts Part number:15 |
Aqueon QuietFlow LED PRO Aquarium Power Filter 30 | Aqueon | 100106082 | Food tank filtering units Part number:16 |
Auto Top Off Kit (ATK) (Each includes 1 FMM module, 2 optical sensors and 1 float) | Neptune Systems | Local Dealer | For freshwater tank Part number:17 |
Automatic top off from RODI (LLC) | Neptune Systems | Local Dealer | From water storage to octopus tanks Part number:18 |
Banded Trochus Snail | LiveAquaria | CN-112080 | For algae bin Part number:19 |
Chaetomorpha Algae, Aquacultured | LiveAquaria | BVJ-76354 | For algae bin Part number:20 |
Clams - Live, Hard Shell, Cherrystone, Wild, USA Dozen | Fulton Fish Market | N/A | Live food Part number:21 |
Classic Sea Salt Mix - Tropic Marin | Bulk Reef Supply | 211813 | Salt for tank water Part number:22 |
Clear Masterkleer Soft PVC Plastic Tubing, for Air and Water, 3/4" ID, 1" OD | McMaster | 5233K71 | Cleaning tool Part number:23 |
Continuum Aquablade-P Acrylic Safe Algae Scraper W/ Plastic Blade - 15 Inch | Marine Depot | 4C31001 | Cleaning tool Part number:24 |
Copper Testing Kit | Aquarium Pharmaceuticals | 65L | For water testing Part number:25 |
Curve Refugium CREE LED Aquarium Light | Eshopps | 6500K | Algae bin light Part number:26 |
Eheim 1262 return pumps | EHEIM | 1250219 | Pump for storage tanks Part number:27 |
Eshopps R-100 Refugium Sump GEN 3 | Eshopps | 15000 | Sump system Part number:28 |
Ethyl Alcohol, 200 Proof | Sigma-Aldrich | 64-17-5 | Anesthesia Part number:29 |
Extech DO600 ExStik II Dissolved Oxygen Meter | Extech | DO600 | Oxygen measurment Part number:30 |
Fiddler Crabs; live; dozen | NORTHEAST BRINE SHRIMP | N/A | Live food Part number:31 |
Filter Cartrages | Aqueon | 100106087 | Food tank filters Part number:32 |
Florida Crushed Coral Dry Sand - CaribSea | Bulk Reef Supply | 212959 | Sedimate for bottom of tank Part number:33 |
FMM module | Neptune Systems | Local Dealer | Controller for apex system Part number:34 |
Fritz-Zyme TurboStart 900 - Fritz | Bulk Reef Supply | 213036 | Bacteria start Part number:35 |
Hand Operated Drum Pump, Siphon, Basic Pump with Spout, For Container Type Bucket, Pail | Granger | 38Y789 | Water Hand Pump Part number:36 |
High pH Testing Kit | Aquarium Pharmaceuticals | 27 | For water testing Part number:37 |
Imagitarium Fine Mesh Net for Shrimp | Petco | 2580993 | Shrimp and fish transfer net Part number:38 |
Leak Detection Kit (LDK) - Includes FMM module plus 2 ALD sensors | Neptune Systems | Local Dealer | Placed on floor to detect water Part number:39 |
Lee`S Algae Scrubber Pad Jumbo - Glass | Marine Depot | LE12007 | Cleaning tool Part number:40 |
Live rocks | Pruss Pets | Local Dealer | Habitat for octopus Part number:41 |
Long Bottle Cleaning Brush 17" Extra Long | Haomaomao | B07FS7J7PN | Tank Cleaning Part number:42 |
Magnesium chloride | Sigma-Aldrich | M1028-100ML | Euthanasia Part number:43 |
Magnetic Probe Rack | Neptune Systems | Local Dealer | For holding apex sensor probes Part number:44 |
Marine Ghost Shrimp | NORTHEAST BRINE SHRIMP | N/A | Live food Part number:45 |
Marineland C-Series Canister Carbon Bags Filter Media, 2 count | Chewy | 98331 | For elevated copper levels Part number:46 |
Nitra-Zorb Bag | Aquarium Pharmaceuticals | AP2213 | Absorbes nirtogen compounds Part number:47 |
Nitrate Testing Kit | Aquarium Pharmaceuticals | LR1800 | For water testing Part number:48 |
Nitrite Testing Kit | Aquarium Pharmaceuticals | 26 | For water testing Part number:49 |
Pawfly 2 Inch Air Stones Cylinder 6 PCS Bubble Diffuser Airstones for Aquarium Fish Tank Pump Blue | Amazon | B076S56XWX | Aierating water Part number:50 |
Penn Plax Airline Tubing for Aquariums –Clear and Flexible Resists Kinking, 8 Feet Standard | Amazon | B0002563MM | Tubing for connecting air pump to air stone Part number:51 |
Plumbing with unions/valves plus 3/4" flex hose | Pruss Pets | Local Dealer | Water transport Part number:52 |
PM1 module | Neptune Systems | Local Dealer | Power control module for apex Part number:53 |
Protein skimmer | Reef Octopus | AC20284 | Removes biowaste from system Part number:54 |
PVC Apex Mounting board, grommets, wire mounts | Neptune Systems | Local Dealer | Helps ensure organization for wires and tubing within system Part number:55 |
PVC Regular Cement and 4-Ounce NSF Purple Primer | Amazon | Oatey - 30246 | For connecting PVC pipes Part number:56 |
RODI unit | Neptune Systems | Local Dealer | RO Water Part number:57 |
Salinity Probes | HANNA probes | HI98319 | Measures salinity of water Part number:58 |
Seachem Pristine Aquarium Treatment | Sea Chem | 1438 | Provides bacteria that break down excess food, waste and detritus Part number:59 |
Seachem Stability Fish Tank Stabilizer | Sea Chem | 116012607 | Seachem Stability will rapidly and safely establish the aquarium biofilter in freshwater and marine systems Part number:60 |
Set of lexan tops | Pruss Pets | Local Dealer | Aquarium tank lids Part number:61 |
Set of Various extended length aquabus cables | Neptune Systems | Local Dealer | Cables for Apex system Part number:62 |
SLSON Aquarium Algae Scraper Double Sided Sponge Brush Cleaner Long Handle Fish Tank Scrubber for Glass Aquariums | Amazon | B07DC2TZCJ | Cleaning tool Part number:63 |
Standard-Wall PVC Pipe Fitting for Water, 45 Degree Elbow Adapter, 3/4 Socket Female x 3/4 Socket Male | McMaster | 4880K189 | PVC pipe Part number:64 |
Standard-Wall PVC Pipe Fitting for Water, 90 Degree Elbow Adapter, 1 Socket Female x 1 Socket Male | McMaster | 4880K773 | PVC pipe Part number:65 |
Standard-Wall PVC Pipe Fitting for Water, Adapter, 1 Socket-Connect Female x 1 Barbed Male | McMaster | 4880K415 | PVC pipe Part number:66 |
Standard-Wall PVC Pipe Fitting for Water, Straight Reducer, 2 Socket Female x 3/4 Socket Female | McMaster | 4880K008 | PVC pipe Part number:67 |
Standard-Wall PVC Pipe Fitting for Water, Tee Connector, White, 1 Size Socket-Connect Female | McMaster | 4880K43 | PVC pipe Part number:68 |
Standard-Wall Unthreaded Rigid PVC Pipe for Water, 1 Pipe Size, 10 Feet Long | McMaster | 48925K13 | PVC pipe Part number:69 |
Standard-Wall Unthreaded Rigid PVC Pipe for Water, 3/4 Pipe Size, 5 Feet Long | McMaster | 48925K92 | PVC pipe Part number:70 |
Structural FRP Fiberglass Sheet, 48" Wide x 96" Long, 1/4" Thick | McMaster | 8537K15 | Table top material Part number:71 |
Structural FRP Fiberglass Square Tube, 10 Feet Long, 2" Wide x 2" High Outside, 1/8" Wall Thickness | McMaster | 8548K33 | Structural table materal Part number:72 |
Tank Sediment | TopDawg Pet Supply | 8479001207 | Sediment for bottom of fiddler crab tank Part number:73 |
Temperature probe | Neptune Systems | Local Dealer | Temperature probe for tanks Part number:74 |
Tetra TetraMarine Large Saltwater Flakes for all Marine Fish | Amazon | B00025K0US | Fish, shrimp, and crab food Part number:75 |
Tetra Whisper Aquarium Air Pump for 10 gallon Aquariums | Petco | 2335234 | Air pump for smaller tanks Part number:76 |
Thick-Wall Through-Wall Pipe Fitting, for Water, PVC Connector, 1 Socket-Connect Female | McMaster | 36895K843 | PVC pipe Part number:77 |
Vectra s2 pump | Bulk Reef Supply | 212141 | Aquarium Pump Part number:78 |
Water Pump | TACKLIFE | GHWP1A | Pump for cleaning tanks Part number:79 |
Wyze Cam v2 1080p HD Indoor WiFi Smart Home Camera with Night Vision | Amazon | B076H3SRXG | DeepLabCut Recording Part number:80 |
Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi
Izin talebiThis article has been published
Video Coming Soon
JoVE Hakkında
Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır