JoVE Logo
Yazarlar
Bize Ulaşın

Oturum Aç

Bu içeriği görüntülemek için JoVE aboneliği gereklidir. Oturum açın veya ücretsiz deneme sürümünü başlatın.

Bu Makalede

  • Özet
  • Özet
  • Giriş
  • Protokol
  • Sonuçlar
  • Tartışmalar
  • Açıklamalar
  • Teşekkürler
  • Malzemeler
  • Referanslar
  • Yeniden Basımlar ve İzinler

Özet

Bir arka pençenin geçici bir haşlanma yaralanması (65 °C ± 0.5 °C, 3 s), ipsilateral tarafın von Frey filament stimülasyonuna eşik (g) değerini azaltır ve yürüyüş düzenini değiştirir. Ayrıca, yanık yaralanması zorunlu yüzme testinde depresyon benzeri davranışlara neden olur.

Özet

Haşlama suyu, hem yaşlı hem de genç popülasyonda yanık yaralanmasının en yaygın nedenidir. Düşük ve orta gelirli ülkelerdeki yüksek mortalite ve sekeller nedeniyle en büyük klinik zorluklardan biridir. Yanıklar sıklıkla yoğun spontan ağrı ve kalıcı allodininin yanı sıra hayatı tehdit eden bir soruna neden olur. Daha da önemlisi, aşırı ağrıya genellikle yaşam kalitesini önemli ölçüde azaltabilecek depresyon eşlik eder. Bu makale, yanık kaynaklı ağrı ve depresyon benzeri davranışların incelenmesi için bir hayvan modelinin nasıl geliştirileceğini göstermektedir. Anesteziden sonra, farenin bir arka pençesinin 3 s boyunca sıcak suya (65 ° C ± 0.5 ° C) batırılmasıyla yanık yaralanmasına neden oldu. Von Frey testi ve otomatik yürüyüş analizi, yanık yaralanmasından sonra her 2 günde bir yapıldı. Ek olarak, zorla yüzme testi kullanılarak depresyon benzeri davranış incelendi ve yanık yaralanmasından sonra anormal motor fonksiyonu ayırt etmek için rota-çubuk testi yapıldı. Bu çalışmanın temel amacı, farelerde yanık yaralanmasına bağlı ağrı ve depresyon benzeri davranışların incelenmesi için bir hayvan modelinin geliştirilmesini tanımlamaktır.

Giriş

Yanık ve travma gibi doku hasarı genellikle akut ağrının birlikte ortaya çıkmasıyla ilişkilidir. Yanık yaralanmaları ve travmaya bağlı semptomlar, her yıl yaklaşık 1.80.000 ölümün yanıklardan kaynaklandığı tahmin edilmektedir - büyük çoğunluğu düşük ve orta gelirli ülkelerde farklı yanık türlerinden meydana gelmektedir1. Dünya çapında yayınlanan bir rapora göre, yanıklar çocuklarda yaygındır ve hastanede yatan hastaların yaklaşık% 40-60'ını oluşturur 2,3. Bu spesifik yaralanmalar, kaynar veya banyo suyu gibi günlük yaşamda ortaya çıkabilecekleri için daha da ciddidir 4,5. Akut ağrı çoğu durumda doku hasarından kurtulduktan sonra kendiliğinden düzelebilse de, sinir sistemindeki anormal değişiklikler nedeniyle kronikleşmek mümkün olabilir 6,7.

Son zamanlarda, akut ağrının depresif bir ruh halini tetikleyebileceği ve kronik ağrının anksiyete ve depresyona neden olabileceği öne sürülmüştür 8,9,10,11. Ağrı ve depresyonun bir arada bulunması hastanın tedavisini zorlaştırır. Depresyon ayrıca ağrı duyarlılığını artırma eğilimindedir, bu da daha yoğun depresyon ve ağrıya neden olabilir12. Ağrı ve depresyonun komplikasyonları periferik inflamasyonun hayvan modellerinde gösterilmiştir13,14,15,16. Ağrıya bağlı depresyonun altında yatan ayrıntılı mekanizmalar şimdiye kadar iyi bilinmemektedir17. Bu nedenle, yan etkileri ve semptomları hafifletmek için yanıklar için daha etkili tedaviler geliştirmek gerekir.

Bu nedenle, bu çalışma, farelerde yanık yaralanmasına bağlı akut ağrı ve depresyon benzeri davranışları incelemek için bir hayvan modeli geliştirmek üzere tasarlanmıştır. Bunun için yanık yaralanmasına bağlı anormal dokunsal duyarlılık, değişmiş yürüyüş paterni ve depresyon benzeri davranış ölçüldü. Ek olarak, bu çalışma NSAID'leri kullanarak modeli doğrulamaya çalışmaktadır.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protokol

Tüm deneysel protokoller, Güney Kore'deki Chungnam Ulusal Üniversitesi'ndeki Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından gözden geçirilmiş ve onaylanmıştır ve daha sonra Uluslararası Ağrı Çalışmaları Derneği18'in etik kurallarına dayanarak yürütülmüştür.

1. Arka pençede haşlama yanığı yaralanmasının indüklenmesi

  1. 20-25 g ağırlığındaki erkek ICR farelerini ışık ve sıcaklık kontrollü bir odada (12/12 saat açık-karanlık döngüsü, 22,5 °C ± 2,5 °C) %40-%60 nem oranıyla barındırın.
    NOT: Bu protokol için hem erkek hem de dişi fareler kullanılabilir.
  2. Hayvanın yiyecek ve suya serbestçe erişmesine izin verin ve deneye başlamadan önce en az 1 hafta boyunca iklimlendirin.
    NOT: Tüm hayvanlar, izolasyon stresi gibi değişkenleri dışlamak için grup halinde barındırılmıştır.
  3. Fareleri rastgele deney veya kontrol grubuna atayın ve hayvan numaralarını kod olarak kullanarak kör deneyler yapın.
  4. Yanık indüksiyonu gününde, fareyi 100 mg / kg'lık bir dozda 300 μL alfaxalone intraperitoneal (i.p.) enjeksiyonu ile anestezi yapın. Yanık indüksiyonunu yaparken cerrahi bir elbise, eldiven ve maske takın.
  5. Fareyi derinlemesine anestezi altına aldıktan sonra,% 70 etanol ile sağ arka pençenin etrafını dezenfekte edin.
    NOT: Derin anestezi durumunu doğrulamak için arka ayak parmaklarına veya kuyruğa uygulanan çimdik stimülasyonuna yanıt verilmediğini kontrol edin.
  6. Anestezi indüksiyonundan sonra kornea kurumasını önlemek için gözlere oftalmik merhem uygulayın.
  7. Derin anestezi uygulanan farenin sağ arka pençesini 65 °C ± 0,5 °C'de 3 sn sıcak suya batırın. Yanmış alanda tutarlılığı korumak için arka pençeyi sıcak suya batırmadan önce her farenin ayak bileğinde bir işaret yapın.
  8. Yanıkların indüklenmesinden sonra, fareleri temiz bir ev kafesine getirin ve hayvanlar anesteziden iyileşene kadar bir ısıtma yastığına yerleştirin.
    NOT: Analjezik ajan olan asetaminofen (200 mg/kg), yanık yaralanması gününden başlayarak 7 gün boyunca günde bir kez intraperitoneal olarak uygulandı (Sadece Yanık + Asetaminofen grubu). Yanık grubuna araç kontrolü olarak salin uygulandı. Deney, önceki bir çalışmada açıklanan yönteme göre gerçekleştirildi4.

2. Mekanik allodininin ölçülmesi

  1. Fareleri davranışsal test odasına getirin ve testten önce en az 30 dakika boyunca iklimlendirmelerine izin verin. Testi yaparken cerrahi bir elbise, eldiven ve maske takın.
  2. Fareleri metal bir örgü zeminde (ağ boyutu: 0,7 cm x 0,7 cm) kare bir kutuya (çap: 13 cm, yükseklik: 12 cm) yerleştirin ve en az 30 dakika boyunca iklimlendirmelerine izin verin.
  3. Yükselen uyaran yöntemi 19,20'yi kullanarak arka pençenin mekanik eşiğini değerlendirin.
  4. Arka plantarı uyarmak için 5-8 s aralıklarla bir dizi von Frey filamentini nazikçe dürtün. Yanık indüksiyonundan önceki gün temel değerleri elde edin.
    NOT: Testte sırasıyla tüm hayvanlarda pençe çekilme eşiğini ölçmek için 0.16-1.2 g von Frey filamentleri kullanılmıştır. Pençe geri çekilme tepki testi, von Frey filamentinin en düşük bükülme kuvveti ile başlatıldı (bu protokolde 0.16 g). Yanıt yoksa, bir sonraki bükme kuvvetine sahip bir filament uygulandı.
  5. Her ipsilateral (yaralı) arka pençe için mekanik eşikleri değerlendirmek için beş deneme yapın.
    NOT: Her hayvandaki beş denemenin üç katından fazlasına yanıt veren von Frey filamentinin bükülme kuvveti, pençe çekilme eşiği (PWT, g) olarak ifade edilmiştir. Mekanik eşikler yanık yaralanmasından bir gün önce ve 1, 3, 5 ve 7 gün sonra ölçüldü. Analjezik etki, hayvanda asetaminofenin uygulanmasından 1 saat sonra değerlendirildi.

3. Otomatik yürüyüş analizi

  1. Fareleri, yanık yaralanmasından 5 gün önce 10-15 dakika boyunca günde bir kez yürüyüş analiz sistemine alıştırın. Yürüyüş analizi yaparken cerrahi bir elbise, eldiven ve maske takın.
  2. Test gününde, fareleri davranışsal test odasına getirin ve testten en az 30 dakika önce iklimlendirin.
    NOT: Karanlık bir ortamda alışma ve yürüme analizi testleri gerçekleştirin. Program menüsünün koşullarını aşağıdaki gibi ayarlayın.
    1. Programı çalıştırdıktan sonra, verileri kaydedecek klasörü belirlemek için Yeni Deneme Oluştur menüsünü tıklayın.
    2. Atamadan sonra, maksimum çalışma süresini 5 s'ye ve izin verilen maksimum hız değişimlerini% 50'ye ayarlayın.
    3. Kayıtlı bir kamera seçin ve programın Kurulum sekmesinde yürüyüş yolu uzunluğunu 30 cm olarak ayarlayın.
    4. Program menüsünün Al sekmesinde, Alımı Aç'ı seçin.
    5. Durum mesajlarına bağlı olarak, boş bir yürüyüş yolunun arka plan görüntüsünü almak için Arka Planı Tutturma düğmesine tıklayın.
  3. Edinimi Başlat düğmesine tıklayın ve ardından fareyi sol-sağa çapraz geçiş yolunun girişine yerleştirin. Kayıt, farenin serbest hareketini takiben otomatik olarak başlayacaktır.
    NOT: Hayvanın yürüyüşü başarıyla kaydedildiyse ve tüm ayak sesleri algılandıysa, yeşil bir simgeyle Uyumlu Koşu olarak işaretlenir. Yazılım herhangi bir ayak izi algılamazsa, kırmızı bir simge görüntülenir, bu durumda kaydın tekrar yapılması önerilir. Yazarlar, benzer çalışma hızlarıyla gerçekleştirilen en az beş başarılı uyumlu koşunun toplanmasını ve analiz edilmesini önermektedir.
  4. Program menüsünün Al sekmesinde, Çalıştırmaları Sınıflandır'ı seçin.
    NOT: Yukarıdaki başarılı uyumluluk çalışmasından elde edilen verileri seçtikten sonra, farelerin yürüyüş kalıplarının kaydedildiği video analiz ekranına gidin.
  5. Analiz edilecek çalıştırmayı seçin ve Otomatik Sınıflandır'a tıklayın.
  6. Otomatik sınıflandırma yaptıktan sonra, burun, genital tanıma ve pençelerin her çalıştırmada önemsiz verilere yanlış tanınmasını kaldırın ve ardından verileri analiz edin.
    NOT: Tüm istatistiksel parametreler otomatik olarak analiz edilir ve programa kaydedilir ve ham veri değerleri deneycinin analiz menüsünde bulunabilir. Otomatik yürüyüş analizi, yanık yaralanmasından önce ve 1, 3, 5 ve 7 gün sonra yapıldı. Değerlendirme, Yanık + Asetaminofen grubunda asetaminofen uygulamasından 30 dakika sonra ve Yanık grubunda salin tedavisinden 30 dakika sonra yapıldı. Bu deney, önceki çalışmalarda açıklanan yönteme göre gerçekleştirilmiştir 4,21,22.

4. Depresyon benzeri davranışların ölçülmesi

NOT: Umutsuzluğa dayalı davranış, sudaki hareketsizlik süresi zorla yüzme testi ile ölçülmüştür.

  1. Fareleri davranışsal test odasına getirin ve testten en az 30 dakika önce iklimlendirin. Zorla yüzme testini yaparken cerrahi bir elbise, eldiven ve maske takın.
  2. Fareyi 15 dakika boyunca 15 cm su (25 °C ± 0,5 °C) içeren şeffaf bir pleksiglas silindire (10 cm x 25 cm) koyun.
  3. 24 saat sonra, fareyi aynı koşulların silindirine koyun ve hareketsizlik süresini ölçün.
    NOT: Hareketsizlik süresi 5 dakikalık test süresi boyunca ölçüldü ve farelerin tırmanmayı veya yüzmeyi bıraktığı ve sadece kafalarını su yüzeyinin üzerinde tutmak için yüzdüğü zaman kaydedildi. Zorla yüzme testi, yanık yaralanmasından sonraki 7. günde yapıldı. Değerlendirme, Yanık + Asetaminofen grubunda asetaminofen uygulamasından 1 saat sonra, Yanık grubunda salin tedavisinden 1 saat sonra yapıldı. Deney, önceki çalışmalarda açıklanan yönteme göre gerçekleştirilmiştir23,24.

5. Normal motor fonksiyonunun ölçülmesi

NOT: Rota-çubuk testi, yanık yaralanmasından sonra anormal motor fonksiyonu ayırt etmek için yapılmıştır.

  1. Fareleri davranışsal test odasına getirin ve testten en az 30 dakika önce iklimlendirin. Zorla yüzme testini yaparken cerrahi bir elbise, eldiven ve maske takın.
  2. Hayvanları, aparatın tabanından 16 cm yukarıda asılı duran yuvarlanan silindirik bir platforma (5,7 cm genişliğinde; 3 cm çapında) yerleştirin.
  3. Her hayvanın, yanık yaralanmasının indüklenmesinden önce en az 5 gün boyunca günde bir kez rota-çubuk üzerinde antrenman yapmasına izin verin.
  4. İlaç uygulamasından sonra 2 saat boyunca her 20 dakikada bir rota-çubuk testi yapın. Kesme süresini 2 dakikaya ayarlayın.
  5. Farenin dönen bir çubuk üzerinde düşmeden dakikada 15 devir sabit hızda çalıştığı süreyi ölçün.
    NOT: Rota-çubuk testi, yanık yaralanmasının indüklenmesinden 7 gün sonra gerçekleştirilmiştir. Değerlendirme, Yanık + Asetaminofen grubunda asetaminofen uygulamasından hemen sonra ve Yanık grubunda salin tedavisinden hemen sonra yapıldı. Alfaxalone, bu testte deneysel olarak tedavi edilen ilaçlar için pozitif bir kontrol olarak kullanıldı. Rotarod testi sırasında, farenin dönen çubuk üzerinde düşmeden çalıştığı süre ölçülür. Deney, önceki çalışmalarda açıklanan yönteme göre gerçekleştirilmiştir22,25.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Sonuçlar

Hayvan ıstırabını en aza indirmek ve Üç R (Değiştirme, Azaltma ve İyileştirme) kılavuzlarına göre kullanılan hayvan sayısını azaltmak için, bu çalışma ön deney yoluyla belirlenen önemli verilerin toplanması için minimum sayıda hayvan ile tasarlanmıştır. Bu çalışmada, davranışsal deneyler bağımsız olarak aşağıdaki gibi iki kez gerçekleştirilmiştir. Yürüme analizi, mekanik allodini ve depresyon benzeri davranış testleri Kontrol (n = 5), Yanık (n = 7; araç kontrolü; salin) v...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Tartışmalar

Haşlama yanığı, ısıtılmış sıvıların neden olduğu bir tür termal yanıktır. Çoğu durumda birinci veya ikinci derece yanıkların meydana geldiği öne sürülmüştür, ancak ısı kaynaklarıyla uzun süreli temas üçüncü derece yanıklara neden olabilir26. Bu çalışmada, farelerin sağ arka pençesinin 3 s 4,26 için 65 °C'de sıcak suya maruz bırakılmasıyla yanık hasarı indüklenmiştir. Yanık yaralı pençed...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Açıklamalar

Yazarların açıklayacak hiçbir şeyleri yoktur.

Teşekkürler

Bu araştırma, Kore hükümeti tarafından finanse edilen Chungnam Ulusal Üniversitesi ve Kore Ulusal Araştırma Vakfı (NRF) hibesi (NRF-2019R1A6A3A01093963 ve NRF-2021R1F1A1062509) tarafından desteklenmiştir.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Malzemeler

NameCompanyCatalog NumberComments
1 mL syringeBD307809
1.5 mL tubeAxygenMCT-150-C
50 mL tubeSPL50050
Acetaminophen BioXtra, ≥99.0%Sigma-AldrichA7085-100GThis analgesic agent is used as a positive control.
Alfaxan multidose (Alfaxalone)JUROX Pty.LimitedIn this experiment, this material was used for animal anesthesia, and was used as a positive control for experimentally treated drugs in the rota-rod test.
CatWalk automated gait analysis systemNoldusCatWalk XTGait analysis in freely walking rodents is used to study the changes in limb movement and positioning in models with sensory-motor dysfunction
OPTISHIELD (Cyclosporin ophthalmic ointment)Ashish Life ScienceThis material was used for an ointment to prevent corneal drying after induction of anesthesia.
Plexiglass cylinderSCITECH KOREAcustom made productsUsed in forced swimming test
Rota-rod systemSCITECH KOREAAccelerating rota rodUsed in the measurement of Normal Motor Function
von Frey filamentsNorth Coast MedicalNC12775Used in the measurement of Mechanical Allodynia
WaterbathCHANGSHIN SCIENCEC-WBEUsed in the burn injury induction

Referanslar

  1. Peck, M. D. Epidemiology of burns throughout the World. Part II: intentional burns in adults. Burns. 38 (5), 630-637 (2012).
  2. Tracy, L. M., Cleland, H. Pain assessment following burn injury in Australia and New Zealand: Variation in practice and its association on in-hospital outcomes. Australasian Emergency Care. 24 (1), 73-79 (2021).
  3. Montgomery, R. K. Pain management in burn injury. Critical Care Nursing Clinics of North America. 16 (1), 39-49 (2004).
  4. Kang, D. W., Choi, J. G. Bee venom reduces burn-induced pain via the suppression of peripheral and central substance P expression in mice. Journal of Veterinary Science. 22 (1), 9(2021).
  5. Abdi, S., Zhou, Y. Management of pain after burn injury. Current Opinion in Anaesthesiology. 15 (5), 563-567 (2002).
  6. Ullrich, P. M., Askay, S. W. Pain, depression, and physical functioning following burn injury. Rehabilitation Psychology. 54 (2), 211-216 (2009).
  7. Patwa, S., Benson, C. A. Spinal cord motor neuron plasticity accompanies second-degree burn injury and chronic pain. Physiological Reports. 7 (23), 14288(2019).
  8. Michaelides, A., Zis, P. Depression, anxiety and acute pain: links and management challenges. Postgraduate Medicine. 131 (7), 438-444 (2019).
  9. Doan, L., Manders, T., Wang, J. Neuroplasticity underlying the comorbidity of pain and depression. Neural Plasticity. 2015, 504691(2015).
  10. Vachon-Presseau, E., Centeno, M. V. The emotional brain as a predictor and amplifier of chronic pain. Journal of Dental Research. 95 (6), 605-612 (2016).
  11. Apkarian, A. V., Baliki, M. N. Predicting transition to chronic pain. Current Opinion in Neurology. 26 (4), 360-367 (2013).
  12. Yin, W., Mei, L. A Central amygdala-ventrolateral periaqueductal gray matter pathway for pain in a mouse model of depression-like behavior. Anesthesiology. 132 (5), 1175-1196 (2020).
  13. Deng, Y. T., Zhao, M. G., Xu, T. J. Gentiopicroside abrogates lipopolysaccharide-induced depressive-like behavior in mice through tryptophan-degrading pathway. Metabolic Brain Disease. 33 (5), 1413-1420 (2018).
  14. Zhang, G. F., Wang, J. Acute single dose of ketamine relieves mechanical allodynia and consequent depression-like behaviors in a rat model. Neuroscience Letters. 631, 7-12 (2016).
  15. Edwards, R. R., Smith, M. T. Symptoms of depression and anxiety as unique predictors of pain-related outcomes following burn injury. Annals of Behavioral Medicine. 34 (3), 313-322 (2007).
  16. Pincus, T., Vlaeyen, J. W. Cognitive-behavioral therapy and psychosocial factors in low back pain: directions for the future. Spine. 27 (5), 133-138 (2002).
  17. Laumet, G., Edralin, J. D. CD3(+) T cells are critical for the resolution of comorbid inflammatory pain and depression-like behavior. Neurobiology of Pain. 7, 100043(2020).
  18. Zimmermann, M. Ethical guidelines for investigations of experimental pain in conscious animals. Pain. 16 (2), 109-110 (1983).
  19. Deuis, J. R., Dvorakova, L. S. Methods used to evaluate pain behaviors in rodents. Frontiers in Molecular Neuroscience. 10, 284(2017).
  20. Scholz, J., Broom, D. C. Blocking caspase activity prevents transsynaptic neuronal apoptosis and the loss of inhibition in lamina II of the dorsal horn after peripheral nerve injury. The Journal of Neuroscience: The Official Journal of the Society for Neuroscience. 25 (32), 7317-7323 (2005).
  21. Kang, D. W., Choi, J. G. Automated gait analysis in mice with chronic constriction injury. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (128), e56402(2017).
  22. Kang, D. W., Moon, J. Y. Antinociceptive profile of levo-tetrahydropalmatine in acute and chronic pain mice models: Role of spinal sigma-1 receptor. Scientific Reports. 6, 37850(2016).
  23. Huang, W., Chen, Z. Piperine potentiates the antidepressant-like effect of trans-resveratrol: involvement of monoaminergic system. Metabolic Brain Disease. 28 (4), 585-595 (2013).
  24. Can, A., Dao, D. T. The mouse forced swim test. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (59), e3638(2012).
  25. Choi, J. G., Kang, S. Y. Antinociceptive effect of Cyperi rhizoma and Corydalis tuber extracts on neuropathic pain in rats. Korean Journal of Physiology & Pharmacology. 16 (6), 387-392 (2012).
  26. Mosby's. Mosby's Dictionary of Medicine, Nursing & Health Professions - Seventh edition, Nursing Standard. 20 (22), RCN Publishing Company Ltd. 36(2006).
  27. Vandeputte, C., Taymans, J. M. Automated quantitative gait analysis in animal models of movement disorders. BMC Neuroscience. 11, 92(2010).
  28. Isvoranu, G., Manole, E. Gait analysis using animal models of peripheral nerve and spinal cord injuries. Biomedicines. 9 (8), 1050(2021).
  29. Yankelevitch-Yahav, R., Franko, M. The forced swim test as a model of depressive-like behavior. Journal of Visualized Experiments: JoVE. (97), e52587(2015).
  30. Yan, H. C., Cao, X. Behavioral animal models of depression. Neuroscience Bulletin. 26 (4), 327-337 (2010).
  31. Papp, M., Willner, P. An animal model of anhedonia: attenuation of sucrose consumption and place preference conditioning by chronic unpredictable mild stress. Psychopharmacology. 104 (2), 255-259 (1991).
  32. Seminowicz, D. A., Laferriere, A. L. MRI structural brain changes associated with sensory and emotional function in a rat model of long-term neuropathic pain. Neuroimage. 47 (3), 1007-1014 (2009).
  33. Yalcin, I., Barthas, F. Emotional consequences of neuropathic pain: insight from preclinical studies. Neuroscience and Biobehavioral Reviews. 47, 154-164 (2014).
  34. Choi, J. W., Kang, S. Y. Analgesic effect of electroacupuncture on paclitaxel-induced neuropathic pain via spinal opioidergic and adrenergic mechanisms in mice. American Journal of Chinese Medicine. 43 (1), 57-70 (2015).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Yeniden Basımlar ve İzinler

Bu JoVE makalesinin metnini veya resimlerini yeniden kullanma izni talebi

Izin talebi

Daha Fazla Makale Keşfet

N robilimSay 175

This article has been published

Video Coming Soon

JoVE Logo

Gizlilik

Kullanım Şartları

İlkeler

Bize Ulaşın

KÜTÜPHANEYE TAVSİYE ET

JoVE HABER BÜLTENLERİ

Araştırma

Eğitim

Yazarlar

Kütüphaneciler

JoVE Hakkında

Telif Hakkı © 2020 MyJove Corporation. Tüm hakları saklıdır