Kabakta Interspesifik Hibridizasyon için Embriyo Kurtarma Protokolü

Özet

Makalede, Cucurbita pepo ve Cucurbita moschata'nın interspesifik hibridizasyonundan türetilen olgunlaşmamış embriyoların rejenerasyonu için bir embriyo kurtarma protokolü açıklanmaktadır. Protokol kolayca çoğaltılabilir ve kabak yetiştirme programları için önemli bir kaynak olacaktır.

Özet

Cucurbita bitkilerinde (kabak) interspesifik hibridizasyon, genetik çeşitliliğin genişletilmesi ve yararlı alellerin içe girmesi için arzu edilir. Bu geniş haçlardan üretilen olgunlaşmamış embriyolar, uygun embriyo kurtarma teknikleri kullanılarak rejenere edilmelidir. Bu teknik birçok ürün için iyi kurulmuş olmasına rağmen, kabak için rutin uygulamasına izin verecek uygun metodolojinin ayrıntılı bir açıklaması eksiktir. Burada, C. pepo ve C. moschata'nın interspesifik hibridizasyonu için yararlı bir embriyo kurtarma protokolünü açıklıyoruz. Embriyo kurtarma için uygun kombinasyonları tanımlamak için, 24 interspesifik haç gerçekleştirildi. Meyve seti, yirmi iki haçtan elde edildi ve bu da% 92'lik bir başarı oranına işaret ediyor. Bununla birlikte, elde edilen meyvelerin çoğu, embriyolardan yoksun tohumlarla (boş tohumlar) partenokarpikti. Sadece bir çapraz kombinasyon, bazal bitki büyüme ortamı kullanılarak rejenere edilebilen olgunlaşmamış embriyolar içeriyordu. İnterspesifik F1 meyvesinden toplam₁₀ embriyo kurtarıldı ve embriyo kurtarmanın başarı oranı% 80 idi. Burada geliştirilen embriyo kurtarma protokolü, kabak ıslah programlarında interspesifik hibridizasyon için faydalı olacaktır.

Giriş

Cucurbita (2n = 40), Cucurbitaceae familyasında, beşi^1'i evcilleştirilmiş 27 farklı tür içeren oldukça çeşitli bir cinstir. Bunlar arasında, Cucurbita moschata, C. pepo ve C. maxima dünya çapında ekonomik açıdan en önemli olanlardır. ABD'de, C. moschata ve C. pepo, tarımsal üretimdeki en önemli iki türdür. C. pepo, crookneck, straightneck, meşe palamudu, tarak, cocozelle, sebze iliği, kabak ve balkabağı^2,3,4,5'in hem yaz hem de kış kabak çeşitlerini içeren dört alt türden (ovifera^,

Protokol

1. Dikim ve tozlaşma

NOT: Hibridizasyonu meyve tutumu ve canlı embriyoların üretimi ile sonuçlanacak uyumlu genotiplerin tanımlanması önemlidir.

1. Dikim koşulları ve bakım
   1. Hibridizasyon için kabak genotiplerinin tohumlarını (çeşitler/katılımlar) elde edin (Tablo 1).
   2. 50 hücreli başlangıç düzlüklerini (25 cm genişlik x 50 cm uzunluk), 1,38 g/kg N, 1,38 g/kg P ve 1,38 g/kg K içeren komple NPK gübre ile değiştirilmiş saksı ortamıyla doldurun.
   3. Tohumları uzunluklarına eşit bir derinliğe kadar ekin ve saksı ortamı ile örtün. Durağan su oluşturmadan daireleri sulayın. Daha sonra....

Sonuçlar

Meyve seti ve tohum canlılığı
Çeşitli çapraz kombinasyonlarda meyve tutumunu ve tohum canlılığını belirlemek için ilk test yapıldı. Dört C. pepo ve 11 C. moschata olmak üzere toplam 15 kabak genotipi seçildi (Tablo 1). Denenen 24 interspesifik çapraz kombinasyondan, meyve setinde genel olarak% >92'lik bir başarıyı temsil eden 22 (Tablo 2) için bir meyve seti elde edilmiştir. O ve M ile E ve J'yi geçerek olgun meyveler elde ed.......

Tartışmalar

C. moschata ve C. pepo arasında başarılı bir interspesifik hibridizasyon için iki ana darboğaz vardır: hibrid embriyolar üretmek için genotip duyarlılığı ile belirlenen çapraz uyumluluk bariyeri ve hibrid embriyoların normal tohumlara gelişimini engelleyen döllenme sonrası engeller. Kabak için daha önce bildirildiği gibi, mevcut çalışmadaki çapraz uyumluluk testi, meyvenin çoğunun partenokarpik olarak geliştiğini ve tohumların çoğunun dayanılmaz olduğunu ortaya koymuşt.......

Malzemeler

Name	Company	Catalog Number	Comments
ampicillin	Fisher Scientific	BP1760-5
autoclave	Steris	AMSCO LAB 250
balance
cefotaxime	Sigma Alfrich	C 7039
centrifuge tubes (1.5 ml)	Sigma Alfrich	T9661
detergent
ethanol, 95%	Decon Labs	2805HC
forceps	VWR	82027-408
gellan gum	Caisson Laboratories	G024
growth chamber or illuminated shelf
laminar hood / biosafety cabinet	The Baker Company, Inc	Edgegard
masking tape	Uline	S-11735
media bottle
Murashige & Skoog Medium	Research Products International	M10200
NPK fertilizer (20-20-20)	BWI Companies, Inc	PR200
Osmocote Plus fertilizer	BWI Companie,s Inc	OS90590
Parafilm M	Sigma Alfrich	P7793
Petri dish (60 x 15 mm)	USA Scientific, Inc	8609-0160
plant pots	BWI Companies, Inc	NP4000BXL
plastic food containers, reused	Oscar Mayer	4470003330
plastic hang tags	Amazon	B07QTZRY6T
potting mix	Jolly Gardener	Pro-Line C/B
seedling starter trays	BWI Companies Inc	GPPF128S4
syringe filter (0.22 um )	ExtraGene	B25CA022-S
trellis support	The Home Depot	2A060006
water bath